0 조회수 • 4:10 분 • July 8th, 2025
시험관 내 혈액-뇌 장벽과 유사한 마우스 뇌 미세혈관 내피 세포를 포함하는 멤브레인 삽입물로 시작합니다.
이 인서트를 내장된 전극이 포함된 경내피 전기 저항 또는 TEER 기기 웰에 넣습니다.
하단 구획에 새 용지를 추가합니다.
전극이 있는 뚜껑을 TEER 웰 위에 놓은 다음 기기를 인큐베이터에 넣고 기록 시스템에 연결합니다.
전극은 경내피 저항 측정을 위해 세포층을 가로질러 전류를 생성합니다.
세포 사이의 온전한 접합 단백질은 전류의 흐름을 방해하여 더 높은 TEER 값을 초래합니다.
기기를 분리하고 제거합니다.
뚜껑을 분해하고 상부 구획에서 일부 배지를 제거하고 사전 활성화된 T 세포를 추가합니다. TEER 측정을 위해 기기를 재조립합니다.
활성화된 T 세포는 내피 세포와 상호 작용하여 염증 인자와 세포용해 효소를 방출하여 접합부 무결성을 방해합니다.
이러한 중단으로 인해 전류 흐름이 증가하여 TEER 값이 낮아집니다.
TEER 측정을 설정하려면 TEER 기기의 24웰 모듈을 층류 후드에 놓습니다. 뚜껑을 제거하고 겸자를 사용하여 MBMEC가 있는 인서트를 기기에 넣습니다.
다음으로, 810마이크로리터의 신선한 배지를 모듈 웰의 하부 구획에 피펫팅합니다. 인서트와 모듈 웰의 벽 사이에 조심스럽게 추가하십시오. 그런 다음 뚜껑을 닫고 기구를 인큐베이터에 넣습니다. 기기를 컴퓨터에 연결합니다. 그런 다음 계측기 컨트롤러를 켜고 소프트웨어를 엽니다.
팝업 창에서 '새 측정'을 선택합니다. 'TEER 표시' 및 'CCL 표시' 상자를 선택한 다음 '시작'을 누릅니다. 첫 번째 측정을 완료한 후 '결과' 탭에서 '모든 웰 확인'을 선택하여 모든 TEER 및 Ccl 값을 확인합니다. 그런 다음 파일을 저장합니다.
다음으로, Ccl이 안정적이고 평방 센티미터당 1마이크로패럿 미만이고 TEER가 최대 수준에 도달했을 때 MBMEC를 T 세포와 공동 배양할 시점을 선택합니다. 절대 TEER 및 Ccl 값을 주의 깊게 검사하고 MBMEC가 충분히 합류한 단층을 개발하지 않은 웰을 선택 취소하여
제외합니다.우물을 마우스 오른쪽 버튼으로 클릭하고 '새 평균 유정에 유정 추가'를 선택하여 나머지 유정을 그룹화합니다. 팝업 창에서 이름을 지정하고 그룹화할 모든 개별 웰에 대해 동일한 작업을 수행합니다. 그런 다음 모든 평균 우물을 확인하여 공동 배양 전에 모든 우물이 동일한 초기 조건을 가지고 있는지 확인합니다.
'실험' 탭에서 '일시 중지'를 누릅니다. 기기를 분리하고 인큐베이터에서 꺼냅니다. 그런 다음 층류 후드의 뚜껑을 제거합니다. 그런 다음 상부 웰 구획의 인서트에서 배지의 일부를 제거합니다. 150마이크로리터의 배지를 조심스럽게 피펫팅하여 MBMEC에 T 세포를 추가합니다. 그런 다음 기기를 다시 연결하고 '측정 재개'를 누릅니다. 24시간 후 '실험' 탭에서 '중지'를 누르고 파일을 저장합니다.