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신경과학
0 조회수 • 2:58 분 • July 8th, 2025
콜린 아세틸트랜스퍼라제 효소를 발현하는 신경 섬유가 풍부한 Meynert의 기저핵을 포함하는 고정된 마우스 뇌 절편을 가져 가십시오.
이절편은 내인성 과산화효소를 비활성화하기 위해 전처리됩니다.
세포막을 투과화하기 위해 세제를 첨가한 다음 비특이적 항체 결합을 방지하기 위해 차단 용액을 첨가합니다.
용액을 콜린 아세틸트랜스퍼라제에 결합하는 1차 항체로 교체합니다.
결합되지 않은 항체를 제거하기 위해 완충액으로 세척합니다. 1차 항체에 결합하는 비오틴 태그가 부착된 2차 항체와 함께 배양합니다.
결합되지 않은 항체를 제거하고 2차 항체에 결합하는 아비딘-비오틴-과산화효소 복합체를 추가합니다.
과도한 복합체를 제거하기 위해 씻으십시오.
과산화효소와 반응하여 유색 침전물을 형성하는 발색 기질을 추가합니다.
과도한 침전물을 제거하기 위해 증류수로 헹굽니다.
절편을 젤라틴화된 슬라이드에 옮깁니다.
다음으로, 에탄올 농도를 증가시킨 다음 자일렌을 사용하여 절편을 탈수합니다.
절편을 장착하고 현미경으로 관찰하여 염색된 신경 섬유를 시각화합니다.
조직 절편의 면역조직화학적 표지를 위해, 트리스 완충 식염수에서 0.1% Triton X-100에서 10% 정상 소 혈청과의 비특이적 결합을 차단한 후, 섭씨 4도에서 48시간 동안 관심 있는 1차 항체로 절편을 표지합니다.
배양이 끝나면 세척할 때마다 신선한 트리스 완충 식염수로 3분 동안 절편을 3회 세척합니다. 이어서 적절한 비오티닐화된 2차 항체와 실온에서 1시간 동안 배양합니다.
배양이 끝나면 시연된 대로 신선한 트리스 완충 식염수로 절편을 세 번 세척합니다. 이어서 제조업체의 프로토콜에 따라 아비딘-비오틴-과산화효소 복합체 및 DAB 과산화효소 기질 용액으로 염색합니다.
세척 후 하나의 뇌 조직 샘플의 모든 절편을 하나의 젤라틴화된 슬라이드에 장착합니다. 샘플을 자연 건조시키십시오. 절편을 탈수하려면 표시된 대로 시료를 희석당 5분 동안 순차적 상승 에탄올 용액에 두 번 담근 다음 10분 자일렌 세척 2회로 청소합니다. 그런 다음 적절한 장착 매체를 사용하여 슬라이드에 커버슬립을 놓습니다.