시각화를 위한 쥐 해마 절편에서 바이오사이틴으로 채워진 중간뉴런 라벨링

비활성화된 내인성 과산화효소가 있는 바이오시틴으로 채워진 중간 뉴런을 포함하는 고정 및 투과화된 쥐 해마 절편을 섭취하십시오.

양 고추냉이 과산화효소(HRP)를 함유한 아비딘-비오틴 복합체(ABC)를 첨가하고 배양하여 아비딘이 바이오시틴에 결합할 수 있도록 합니다.

바인딩되지 않은 ABC를 씻어냅니다.

발

색 기질과 금속 강화제의 혼합물을 첨가한 다음 배양합니다.

과산화수소를 도입하여 HRP를 활성화하면 기질을 산화시켜 어두운 침전물을 형성하고 강화제는 대비를 향상시킵니다.

슬라이스를 여과지로 옮기고 여분의 완충액을 제거합니다. 대비를 강화하기 위해 사산화오스뮴으로 처리하십시오.

슬라이스를 슬라이드 위에 놓고 장착합니다. 증가하는 에탄올 농도를 사용하여 탈수하십시오.

절수 에탄올과 프로필렌 옥사이드로 슬라이스를 세척하십시오.

조직에 침투하기 위해 수지를 첨가하십시오.

슬라이스를 판체에 넣고 가열하여 수지를 중합시킵니다. 슬라이스를 슬라이드에 옮기고 커버슬립을 놓고 수지를 응고시킵니다.

광학 현미경을 사용하여 어둡게 염색된 바이오시틴으로 채워진 중간 뉴런을 시각화합니다.

절편을 PBS가 들어 있는 깨끗한 유리 바이알에 넣습니다. HRP 반응 생성물을 증폭하기 위해 먼저 아비딘 비오틴 복합체 또는 ABC에서 절편을 최소 2시간 동안 배양하여 아비딘 HRP 반응을 수행합니다.

그런 다음 PBS로 10분 동안 3회 세척한 다음 Tris 완충액으로 10분 동안 2회 세척합니다. 마지막 미량 완충액 세척을 제거한 후 디아미노벤지딘 용액 또는 DAB 용액에 8% 염화니켈 용액 1방울을 빠르게 첨가합니다. 그런 다음 용액을 피펫으로 넣었다 꺼내어 혼합합니다.

그리고 섹션 위에 이 용액 1밀리리터를 빠르게 추가합니다. 이 용액에서 절편을 15분 동안 배양합니다. 그런 다음 DAB 용액에 10마이크로리터의 1% 과산화수소를 첨가합니다. 세포가 표지될 때까지 약 1-2분 동안 일정한 교반 하에 어둠 속에서 반응을 진행하도록 합니다.

연기 후드에 작은 원의 여과지를 페트리 접시에 넣고 PB로 적십니다. 붓을 사용하여 유리 바이알에서 한 번에 하나씩 섹션을 들어 올리고 조심스럽게 종이 위에 평평하게 놓습니다. 또 다른 젖은 여과지 원으로 섹션을 덮습니다. 그리고 티슈 페이퍼를 표면에 부드럽게 대고 여분의 완충액을 제거합니다.

PB에 8% 사산화오스뮴 9방울을 상단 용지에 바르십시오. 접시를 덮고 최소 30분, 1시간 이상 사용하지 않도