JoVE 실험 백과사전
신경과학
0 조회수 • 2:08 분 • July 8th, 2025
배양된 수초 운동 뉴런, 근육 조절 신경 세포 및 근관, 다핵 근육 세포가 포함된 플레이트로 시작합니다.
운동 뉴런은 신호 전달 부위인 신경근 접합부 또는 NMJ를 통해 근관과 연결됩니다.
우물에 염화칼슘을 첨가하십시오.
라이브 이미징을 위해 도립 현미경으로 관찰하고 동영상을 녹화합니다.
칼슘 이온은 운동 뉴런으로 들어가 흥분성 신경 전달 물질인 아세틸콜린(ACh)의 방출을 유발합니다.
이 신경 전달 물질은 근관의 ACh 수용체에 결합하여 나트륨 이온이 들어가 근관의 수축을 유발합니다.
동영상을 녹화합니다. 그런 다음 소프트웨어는 근관 수축에 대해 색상으로 구분된 시간 모션 그래픽을 생성하며, 빨간색은 가장 빠른 속도를 나타내고 파란색은 가장 느린 속도를 나타냅니다.
다음으로 ACh 수용체에 결합하는 신경근 차단제를 도입합니다. 이것은 나트륨 유입을 방지하고 근관 수축을 제한합니다.
동영상을 다시 녹화합니다. 빨간색이 감소하면 근관 수축이 감소했음을 나타냅니다.
근관 수축을 유발하려면 분화된 신경근 접합부 세포의 각 웰에 25밀리몰 염화칼슘을 첨가하십시오. 그리고 치료 후 1-2분 이내에 플레이트를 도립 현미경의 스테이지에 놓습니다. 살아있는 세포 현미경을 사용하여 근관 수축 동영상을 20초 동안 기록합니다. 기록이 끝나면 큐라레 밀리리터당 300나노그램을 배양 배지에 추가하고 20초 동안 동영상을 추가로 녹화한 후 분석을 위해 적절한 모션 벡터 분석 소프트웨어 프로그램에서 동영상 파일을 엽니다.