원심분리 보조 미토콘드리아 교모세포종 줄기세포로의 이식

짙은 적색 형광 표지된 기증자 미토콘드리아가 들어 있는 튜브로 시작합니다.

미토콘드리아를 분산시키기 위해 저온 증식 배지를 추가합니다.

변형된 교모세포종 줄기 세포 또는 GSC가 포함된 웰의 바닥 근처에 미토콘드리아 용액을 분배합니다.

이러한 변형된 뇌암 세포는 청색 형광 염료로 표지되고 적색 형광 표지된 내인성 미토콘드리아를 포함합니다.

현탁액은 우물의 전체 표면을 덮고 미토콘드리아를 균일하게 분포시킵니다.

배양 플레이트를 원심분리하여 미토콘드리아를 세포에 더 가깝게 가져와 상호 작용을 합니다.

이제 배양 플레이트를 배양합니다.

세포막은 기증자 미토콘드리아를 포함한 세포외 물질을 삼키는 큰 소포를 형성합니다.

그런 다음 세포는 이러한 소포를 내재화하여 기증자 미토콘드리아를 세포질로 방출하여 잠재적으로 GSC 대사와 기능을 변경합니다.

공초점 현미경으로 세포를 관찰합니다.

이미지 분석 후, 적색 내인성 미토콘드리아와 함께 녹색 기증자 미토콘드리아를 포함하는 청색 세포의 존재는 성공적인 미토콘드리아 전달을 확인합니다.

분리된 MSC 미토콘드리아를 GSC로 옮기려면 200마이크로리터의 예냉된 GSC 증식 배지를 미토콘드리아 펠릿에 추가합니다. GSC 증식 배지에서 미토콘드리아 제제를 희석하여 GSC에 20마이크로리터의 미토콘드리아 현탁액을 일관되게 첨가할 수 있도록 합니다.

다음으로, 우물 바닥에 가까운 미토콘드리아를 천천히 추가합니다. 플레이트를 섭씨 4도에서 1,500배 G로 15분 동안 원심분리합니다. 그런 다음 즉시 배양균을 섭씨 37도에 놓습니다. 마지막으로 텍스트 프로토콜에 따라 미토콘드리아 전달, FACS 분석 및 공초점 이미징 분석을 수행합니다.