화학적 가교 분석법을 사용한 마우스 뇌의 뉴런 표면 단백질 가교 분석

얼음처럼 차가운 완충액에 분리된 마우스 뇌로 시작합니다.

복부가 위를 향하도록 뇌를 뇌 매트릭스로 옮깁니다.

면도날을 삽입하여 뇌의 앞부분을 연속적으로 자릅니다.

뒤쪽 부분을 남겨두고 칼날을 함께 잡고 슬라이스를 들어 올립니다. 면도날을 분리하고 뇌 조각이 위를 향하도록 차갑게 식힌 표면에 놓습니다.

원하는 슬라이스를 선택하고 관심 영역을 추출합니다.

티슈를 나누고 다지십시오.

다진 조직을 화학 물질 BS3가 보충된 뇌척수액이 들어 있는 튜브로 옮깁니다.

튜브를 뒤집고 혼합하여 조직을 더 작은 조각으로 부수고 회전하면서 배양합니다.

세포막 불투과성 화학 물질인 BS3는 GABA 수용체와 같은 신경 표면 단백질을 가교하는 반면 내부 GABA 수용체는 변경되지 않습니다.

가교 반응을 담금질하기 위해 글리신을 첨가합니다.

샘플은 표면 GABA 수용체 수준을 평가할 준비가 되었습니다.

시작하려면 안락사된 C57 검은 6J 마우스의 두개골에서 뇌를 빠르게 제거합니다. 얼음처럼 차가운 PBS가 들어 있는 페트리 접시에 10-15초 동안 담가둡니다. 식힌 뇌를 복부가 위로 향하도록 얼음 위의 뇌 매트릭스에 놓습니다. 뇌를 관상으로 자르려면 후각 구근과 후각자루 사이의 경계를 통해 첫 번째 면도날을 삽입합니다. 3-4개의 추가 면도날을 사용하여 1mm 간격으로 뇌의 앞쪽 부분을 관상으로 연속적으로 자릅니다.

삽입된 면도날을 함께 잡고 뇌 기질에서 관상 조각을 들어 올리고 뒤쪽 부분을 남겨둡니다. 집게를 사용하여 면도날을 서로 분리하고 뇌 조각이 위를 향하도록 평평하고 차가운 표면에 놓습니다.

전두엽 피질을 샘플링하려면 후각 꽃자루가 포함된 첫 번째 슬라이스 뒤쪽에 있는 두 번째와 세 번째 슬라이스를 선택합니다. 티슈 펀치 또는 겸자를 사용하여 원하는 부위를 제거합니다. 식힌 면도날에 티슈를 놓고 고르게 두 조각으로 나눕니다. 집게의 가는 끝을 사용하여 면도날에서 여러 수직 동작으로 각 조직을 조각으로 자릅니다. 인공 뇌척수액이 들어 있는 미리 냉각된 라벨 튜브에 30마이크로리터의 BS3 용액을 첨가합니다. 그런 다음 다진 조직을 즉시 원하는 튜브로 옮깁니다.

가교 반응의 경우 조직과 용액이 들어 있는 튜브를 뒤집어 조직 덩어리를 작은 조각으로 부수십시오. 샘플을 섭씨 4도에서 30분에서 2시간 동안 튜브 로테이터에서 배양하고 각 튜브에 대한 BS3 배양 시작 시간을 기록합니다. 그런 다음 78마이크로리터의 1몰 글리신으로 반응을 담금질합니다. 섭씨 4도에서 일정한 회전으로 10분 동안 더 배양하고 담금질 시작 및 종료 시간을 기록합니다.