다운스트림 분석을 위한 마우스 뇌 처리

0 views • 4:44 min • July 8th, 2025

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신방 수확한 쥐의 뇌를 가져다가 빠른 조직 보존을 위해 미리 냉각된 이소펜탄에 급속 냉동합니다.

다음으로, 슬라이싱하는 동안 차가운 환경을 유지하기 위해 피질이 위로 향하는 뇌를 얼어붙은 뇌 매트릭스로 옮깁니다.

뇌가 매트릭스 온도에 평형을 이룰 수 있도록 하십시오. 시상동과 가로 부비동을 따라 매트릭스에 정렬하여 대칭 단면을 보장합니다.

차갑게 식힌 칼날을 뇌에 삽입하여 올바른 정렬을 보장합니다.

그런 다음 균일하게 눌러 균일한 뇌 절편을 얻습니다.

섹션이 있는 블레이드를 제거하고 주둥이면이 위로 향하도록 얼어붙은 유리판 위에 놓습니다.

주둥이에서 꼬리 방향까지 섹션을 올바른 해부학적 순서로 구성합니다. 이제 분리하십시오.

적절한 뇌 참조를 사용하여 섹션에서 관심 영역을 찾아 제거합니다.

절제된 조직을 다운스트림 분석을 위해 미리 냉각된 바이알로 옮깁니다.

안락사된 성체 CD-1 야생형 마우스로부터 뇌를 제거한 후 드라이아이스로 미리 냉각된 액체 질소 또는 이소펜탄에서 조직을 60초 동안 급속 동결하고 섭씨 -80도에서 보관합니다.

조직을 해부하기 24시간 전에 해동된 냉동 팩 더미에 깨끗한 브레인 매트릭스를 놓고 두 개의 냉동 팩 사이에 매트릭스의 측면을 끼우고 면도기 슬롯 바닥과 팩 상단 사이에 약 반 센티미터를 남겨 둡니다.

단열 상자에 상단에서 최대 약 5cm 떨어진 곳에 얼음을 채워 해부를 위한 냉동 유리판을 설치합니다. 그런 다음 그 위에 2.5cm 두께의 드라이아이스를 깔고 검은색 비닐 시트로 덮습니다. 플라스틱 위에 유리판을 놓고 접시 경계 주위에 드라이아이스를 놓습니다.

동실에서 냉동된 뇌 매트릭스를 꺼내 뇌 피질 쪽을 위로 향하게 하여 매트릭스에 삽입합니다. 이 시간 동안 뚜껑을 열어 두면서 티슈가 상자 안의 온도와 평형을 이룰 수 있도록 합니다. 차가운 집게를 사용하여 매트릭스에서 뇌의 위치를 조정하여 시상동과 횡동이 블록의 수직 홈과 일직선

이 되도록 합니다.

뇌가 제자리에 있으면 식힌 면도날을 중앙 근처에 놓고 조직에 약 1mm 누르십시오. 그런 다음 뇌의 양쪽 끝에 차가운 칼날 하나를 놓고 매트릭스 안으로 끝까지 누릅니다. 그런 다음 끝에 식힌 칼날을 추가하여 슬롯에 한 번에 하나씩 넣고 티슈에 1mm 부드럽게 누릅니다. 꼬리 끝을 향해 작업하면서 1mm 간격으로 블레이드를 계속 추가합니다.

모든 칼날이 제자리에 있으면 손가락, 손바닥 또는 뭉툭한 물체로 상단을 누르고 천천히 좌우로 흔들어 조직을 통해 움직입니다. 블레이드가 슬롯 바닥에 도달하면 블레이드 그룹의 양쪽을 잡고 앞뒤로 흔들어 매트릭스에서 분리합니다.

블레이드 그룹을 풀어준 후 면이 위로 향하도록 유리판에 놓고 스택 옆이나 위에 드라이아이스를 놓아 샘플을 더 쉽게 분리할 수 있도록 더 얼립니다. 그런 다음 날카로운 모서리가 아래로 향하도록 스택을 놓고 엄지와 손가락 사이에서 스택을 이동하여 블레이드를 분리합니다.

유리판의 섹션을 주둥이에서 꼬리까지 정렬하고 손가락 사이로 조직을 구부리거나 두 번째 차가운 칼날로 분리하여 칼날에서 조직을 분리합니다. 때때로 조직이 칼날의 양쪽에 달라붙을 수 있으므로 주둥이에서 꼬리 방향을 유지하도록 주의해야 합니다.

해부를 시작하기 전에 Allen Mouse Brain Atlas 또는 다른 참고 자료를 열고 관심 영역을 식별하는 데 필요한 랜드마크를 찾으십시오. 차갑게 식힌 집게나 칼날을 사용하여 섹션을 뒤집고 관심 영역이 섹션 전체에서 일관되게 유지되는지 확인합니다.

깨끗한 메스나 펀치로 해당 부분을 자르고 금속을 부드럽지만 단단히 조직에 밀어 넣고 앞뒤로 흔들어 절단합니다. 관심 지역을 수확한 후 라벨이 붙은 사전 냉장 1.5밀리리터 튜브에 넣고 섭씨 -80도에서 보관합니다.

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Last updated: 18 July 2026