0 조회수 • 2:42 분 • April 29th, 2025
도파민 합성의 핵심 효소인 티로신 하이드록실라제를 발현하는 도파민 뉴런을 포함하는 마우스 뇌 조직 절편으로 폴리머 코팅 슬라이드를 가져갑니다.
균일한 염색을 보장하기 위해 소수성 펜으로 절편의 윤곽을 그립니다.
조직 형태를 보존하기 위해 조직을 아세톤-메탄올 용액에 고정합니다.
세포막을 투과화하기 위해 세제가 함유된 완충액으로 헹굽니다.
도파민 뉴런에서 티로신 하이드록실라제를 표적으로 하는 1차 항체와 함께 배양한 다음 세척하여 결합되지 않은 항체를 제거합니다.
형광 염료 태그가 지정된 2차 항체, 핵 염료 및 RNase 억제제를 추가합니다.
배양하는 동안 2차 항체는 1차 항체에 결합하고, 핵 염료는 핵에 표지하며, RNase 억제제는 RNase를 비활성화합니다.
완충액으로 헹굽니다. 그런 다음 증가하는 농도의 에탄올로 조직 절편을 탈수합니다.
자일렌에서 배양하여 조직을 제거합니다.
처리된 조직 절편은 이제 레이저 캡처 미세 해부를 위한 준비가 되어 표적 도파민 뉴런의 정확한 시각화 및 해부가 가능합니다.
면역조직화학을 수행하려면 소수성 펜을 사용하여 조직의 윤곽을 그려 건조시키십시오. 그런 다음 1 대 1 아세톤 메탄올 용액에 조직을 섭씨 음하 20도에서 10분 동안 고정합니다. 냉동실에서 조직을 꺼낸 후 PBS와 1% 트리톤에 100-200마이크로리터의 티로신 하이드록실라제 항체를 10분 동안 절편을 덮습니다.
그런 다음 1% 트리톤이 함유된 PBS를 사용하여 슬라이드를 헹구고 Alexa Fluor 488로 표시된 염소 항토끼 IgG 100-200마이크로리터로 섹션을 덮습니다. 5분 동안 배양한 다음 PBS를 사용하여 슬라이드를 두 번 헹굽니다. 다음으로, 이 비디오의 앞부분에서 설명한 것처럼 등급이 매겨진 일련의 RNase 프리 에탄올에서 샘플을 각각 30초 동안 탈수합니다. 자일렌에서 1분 동안 배양하고 두 번째 세척을 5분 동안 배양합니다. LCM에 사용하기 직전에 슬라이드를 제거하고 자연 건조시키십시오.