Drosophila Photoreceptor Cells의 막 단백질 이동에 대한 연구

어둡게 적응하고 마취되고 형질전환된 흰 눈의 파리를 예로 들어 보겠습니다.

파리는 눈의 광수용체에서 eGFP 태그가 지정된 TRPL 이온 채널을 발현합니다.

어둠 속에서 TRPL은 광수용체의 미세융모인 횡문막의 막에 국한됩니다.

압축 공기를 사용하여 플라이를 머리부터 피펫 팁에 밀어 넣습니다.

팁을 자르고 플라이를 뒤로 밉니다.

다시 다듬고 머리만 튀어나올 때까지 플라이를 앞으로 밉니다.

슬라이드에 부착된 모델링 점토로 팁을 고정하고 눈이 현미경 대물렌즈를 방사형으로 향하도록 형광 현미경 스테이지에 놓습니다.

대물렌즈에 물 한 방울을 넣은 다음 눈에 닿을 때까지 내립니다.

광수용체의 이미지를 캡처합니다.

횡문, 세포체 및 배경의 형광 강도를 측정합니다.

주황색 빛으로 파리를 비추어 세포체로의 TRPL 전좌를 유도합니다.

이미징 및 형광 측정을 반복합니다.

이미지를 비교하여 조명 후 감소된 횡문맥 형광을 관찰하여 TRPL이 세포체로 전좌되었음을 나타냅니다.

치명적이지 않은 변형으로 파리를 준비하려면 얼음 마취된 파리를 머리부터 200마이크로리터 피펫 팁으로 옮기고 압축 공기로 플라이를 팁 쪽으로 조심스럽게 밀어냅니다. 그런 다음 메스를 사용하여 머리 바로 앞의 피펫 팁을 잘라냅니다. 그리고 핀셋을 사용하여 플라이를 피펫 팁에 몇 밀리미터 조심스럽게 밀어 넣습니다.

피펫 팁을 다시 잘라냅니다. 그리고 압축 공기로 플라이를 팁 쪽으로 뒤로 밀어 플라이의 머리만 피펫 팁에서 튀어나오도록 합니다. 플라스틱 조각을 물체 슬라이드에 붙인 후 왼쪽 또는 오른쪽 눈이 위를 향하도록 피펫 팁을 누릅니다. 현미경 아래에서 눈의 방향이 올바른지 확인하십시오. 이미지 획득을 위해 수침 대물렌즈를 선택하십시오.

치명적이지 않은 변이의 경우 실험실 피펫을 사용하여 많은 양의 냉각수를 침수 대물렌즈의 밑면에 부착합니다. 준비된 플라이가 있는 물체 슬라이드를 현미경 스테이지에 조심스럽게 놓습니다. 그런 다음 수면에 닿거나 파리의 눈이 물방울에 닿을 때까지 수침 대물렌즈를 수동으로 내립니다.

그런 다음 현미경 카메라로 빛의 경로를 전환하고 라이브 이미지를 생성합니다. 카메라의 초점을 재조정하고 눈이 현미경 대물렌즈를 방사형으로 향해야 한다는 점을 고려하여 눈의 방향을 평가합니다. 조회 테이블 소프트웨어를 사용하여 과포화를 감지합니다.

색

소가 묻지 않은 파리의 경우 가장 밝은 픽셀이 모든 이미지의 채도 한계 바로 아래에 오도록 노출 시간을 조정하십시오. 이미지를 기록하