면역형광을 이용한 소장 신경내분비종양 스페로이드의 특성화

0 조회수2:38 • April 28th, 2025

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소장 신경내분비 종양 스페로이드를 튜브에 넣습니다.

세포를 보존하기 위해 고정액을 추가합니다.

세척, 원심분리 및 고정액을 완충액으로 교체합니다.

원심분리하고 상청액을 버려 남아 있는 고정액을 제거합니다.

세제와 차단제가 포함된 완충액을 첨가하여 세포막을 투과화하고 비특이적 항체 결합을 방지합니다.

여분의 세제와 차단제를 제거하기 위해 완충액으로 세척하십시오.

신경내분비 세포에 특이적인 표적 단백질에 결합하는 1차 항체와 함께 배양합니다.

결합되지 않은 항체를 제거하기 위해 완충액으로 세척합니다.

1차 항체에 결합하는 형광단 태그가 지정된 2차 항체를 추가합니다.

완충액으로 헹구어 과도한 항체를 제거합니다.

핵을 염색하기 위해 염료가 포함된 마운팅 매체를 추가합니다.

스페로이드를 슬라이드에 옮기고 커버 슬립으로 장착합니다.

형광 현미경을 사용하여 특정 단백질을 발현하는 스페로이드의 신경내분비 세포를 시각화합니다.

500마이크로리터의 파라포름알데히드를 첨가하고 15분 동안 배양하여 오가노이드를 고정합니다. 배양 후, 배양액을 PBS 1밀리리터로 두 번 세척합니다. 3% BSA 및 0.1% Triton X-100과 함께 500마이크로리터의 PBS를 첨가하여 배양액을 투과시킵니다. 튜브를 5분 동안 배양한 다음 오가노이드를 1밀리리터의 PBS와 3% BSA로 3회 세척합니다.

그런 다음 배양액을 1차 항체와 함께 1시간 동안 배양한 다음 PBS 및 BSA로 세척을 반복합니다. 2차 항체와 함께 배양하고 세척을 반복하여 모든 상청액을 흡인하고 버립니다.

스페로이드를 이미지화하려면 DAPI가 포함된 5마이크로리터의 마운팅 매체를 추가하고 P20 피펫을 사용하여 5마이크로리터의 스페로이드를 유리 슬라이드로 옮깁니다. 슬라이드를 커버 슬립으로 밀봉하고 10, 20, 40배 대물렌즈를 사용하여 형광 현미경으로 이미지를 촬영합니다.

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마지막 업데이트: 15 8월 2026