Detection of Oxygen Consumption Rate in Acute Mouse Brain Slices (급성 마우스 뇌 절편의 산소 소비율 측정)

건강한 신경퇴행성 마우스의 뇌 슬라이스 펀치를 샘플 보유 스크린에 배치합니다.

화면을 뒤집어 티슈 플레이트에 삽입합니다.

센서 프로브가 있는 사전 보정된 센서 카트리지를 가져옵니다. 피루브산, 올리고마이신, FCCP 및 안티마이신 A와 같은 화합물을 주입 포트에 넣습니다.

카트리지를 티슈 플레이트에 놓습니다. 세포외 플럭스 분석기에서 실행을 시작합니다.

프로브는 슬라이스의 산소 소비율 또는 (OCR)를 측정합니다.

첫 번째 주사로 피루브산은 미토콘드리아로 들어가 전자 운반체를 생성합니다.

이 운반체는 전자 전달 사슬 또는 (ETC)의 복합체 I 및 II에 전자를 기증하여 산소 소비 및 OCR을 증가시키는 전자 전달 반응을 시작합니다.

올리고마이신은 복합체 V를 억제하여 ATP 합성을 중단하고 OCR을 감소시킵니다.

양성자인 FCCP는 양성자 구배를 방해하여 산소 소비량과 OCR을 증가시킵니다.

Antimycin A는 복합체 III에 결합하여 ETC를 중단하여 OCR을 최소화합니다.

OCR 프로필을 비교합니다.

신경퇴행성 절편에서 OCR이 감소하면 미토콘드리아 손상을 나타냅니다.

천공된 뇌 조직 한 조각을 흡입하고 조직을 캡처 화면의 메쉬 쪽에 조심스럽게 놓습니다. 한쪽에 메쉬가 부착된 원형 플라스틱 조각입니다. 종이 티슈를 사용하여 캡처 스크린을 부드럽게 말리고 수분을 제거하면 티슈가 끈적거리고 메쉬 중앙에 부착됩니다.

다음으로, 캡처 화면을 잡고 핀셋으로 면이 아래로 향하도록 슬라이스한 다음 배양 섬 플레이트의 웰 중 하나에 넣습니다. 그런 다음 섬 플레이트를 인큐베이터에서 섭씨 37도에서 최소 30분 동안 배양하여 분석법을 실행하기 전에 온도와 pH 평형을 유지합니다. 원하는 화합물과 BSA 없이 변형된 인공 뇌척수액을 각각 포트 A에서 D까지의 작업 농도의 최종 스톡 농도로 희석합니다.

완전히 삽입하면 포트를 통해 화합물이 누출될 수 있으므로 팁을 주입 포트의 벽에 대고 팁을 45도 각도로 삽입하여 75마이크로리터의 희석된 화합물을 센서 카트리지의 적절한 주입 포트에 부드럽게 예압합니다. 그런 다음 기포를 만들지 않고 포트에서 팁을 조심스럽게 빼내고 기포가 완화되지 않도록 카트리지의 어떤 부분도 두드리지 마십시오. 그런 다음 주입 포트가 균일하게 적재되었는지 육안으로 검사하여 모든 액체가 포트에 있고 카트리지 위에 잔류 방울이 없는지 확인합니다.

센서 카트리지를 유틸리티 플레이트에 올려놓은 후 인큐베이터에 30분 동안 넣어 섭씨