뇌암 세포 침입의 임피던스 기반 측정

상부 및 하부 챔버가 포함된 세포 침범 및 이동 플레이트를 가져 가십시오.

상부 챔버에는 바닥에 임피던스 측정 금 미세 전극 어레이가 있는 미세 다공성 멤브레인이 포함되어 있습니다. 세포외 기질 또는 ECM 용액으로 멤브레인을 코팅합니다.

하부 챔버를 고혈청 배지로 채웁니다.

그런 다음 상부 챔버에 저혈청 배지를 추가하고 배양 조건에 적응하도록 배양합니다.

기준선 임피던스를 측정하기 위해 미세 전극에 약한 전위를 적용합니다.

상부 챔버에 뇌암 세포를 시드하고 ECM에 정착하도록 합니다.

고혈청 배지는 화학유인제 역할을 하여 세포의 움직임을 유도합니다.

세포는 ECM을 분해하는 프로테아제를 분비하여 막 기공을 통해 화학유인제를 향해 이동할 수 있도록 합니다.

세포가 이동함에 따라 미세 전극에 부착되어 세포 임피던스가 증가합니다.

시간이 지남에 따라 더 많은 세포가 이동하여 미세 전극에 부착되어 세포 임피던스가 더욱 증가하여 이러한 세포의 침습 가능성을 반영합니다.

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p style='background-color:#ffffff;line-height:1.38;margin-bottom:0pt;margin-top:0pt;padding:0pt 0pt 12pt;' dir='ltr'>실시간 세포 분석 5-6시간 전에 실시간 세포 분석 시스템을 세포 배양 인큐베이터에 넣습니다. 침습 분석을 설정하려면 역방향 피펫팅을 사용하여 세포외 기질 겔 밀리리터당 0.1마이크로그램이 보충된 50마이크로리터의 DMEM을 세포 침범 플레이트의 상부 챔버의 각 웰에 넣습니다.

도금 직후 각 웰에서 30마이크로리터의 세포외 기질 용액을 제거하고 플레이트를 세포 배양 인큐베이터에 넣습니다. 4시간 동안. 측정 6시간 전에 임피던스 측정 프로그램을 설정하려면 모든 전기천공된 세포 배양의 배지를 저혈청 배지로 교체하십시오. 관련 임피던스 측정 소프트웨어의 레이아웃 탭에서 각 생물학적 조건에 대해 4중 웰을 선택합니다.

일정 탭에서 1분 간격으로 일회성 기준선 측정 스윕 단계를 설정하고 실제 실험을 위해 각각의 개별 크래들에서 셀 임피던스를 측정하는 두 번째 단계를 설정합니다. 세포 임피던스 측정 시작 1시간 전, 화학유인제로 10% 태아 소 혈청을 보충한 160마이크로리터의 배지를 세포 침범 및 이동 플레이트의 하부 챔버 웰에 추가합니다.

상부 챔버의 웰을 50마이크로리터의 저혈청 배지로 채우고 챔버를 시스템의 요람에 넣습니다.

클릭 메시지 소프트웨어에서 탭을