0 조회수 • 3:28 분 • April 28th, 2025
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p style='background-color:#ffffff;line-height:1.7999999999999999999;margin-bottom:0pt;margin-top:0pt;padding:0pt 0pt 12pt;' dir='ltr'>식세포 활성을 나타내는 미세아교세포 유사 세포가 포함된 멀티웰 플레이트를 가져갑니다.핵 염색과 함께 배양하여 핵에 라벨을 붙입니다.
음성 대조군 웰에 액틴 중합 억제제를 추가합니다.
인큐베이션 중에 억제제는 액틴 필라멘트에 결합하여 액틴 중합 및 식균 작용을 억제합니다.
플레이트를 저온으로 유지하고 pH에 민감한 염료 표지 인간 시냅토좀(신경 시냅스 말단의 분리된 조각)을 추가합니다.
세포-시냅토솜 상호작용을 촉진하되 조기 흡수를 방지하기 위해 플레이트를 저온에서 원심분리합니다.
플레이트를 라이브 셀 이미징 시스템으로 옮깁니다.
테스트 우물에서 시냅토좀은 식균작용을 하고 식식소좀을 형성하는 리소좀과 융합됩니다. 리소좀 산성 환경은 염료를 활성화하여 형광을 일으
킵니다.시간이 지남에 따라 테스트 우물에서 더 많은 시냅토솜이 삼켜져 형광이 더욱 증가합니다.
그러나 음성 대조군 우물에서는 액틴 중합이 억제되어 시냅토솜 흡수를 방지합니다. 결과적인 최소 형광은 액틴 매개 식균작용에 대한 형광 의존성을 확인합니다.
분석 당일, 웰당 40마이크로리터의 배지를 제거하고 10마이크로리터의 핵 염색 용액을 추가합니다. 플레이트를 2시간 동안 배양합니다. 얼음 위에서 표지된 시냅토솜을 해동하고 물 초음파 처리기를 사용하여 1 분 동안 부드럽게 초음파 처리합니다. 다시 말하지만, 즉시 시냅토좀을 얼음 위에 놓습니다. 표지된 시냅토좀과 IMG 완전 배지를 배지 50마이크로리터당 시냅토솜 1마이크로리터로 희석합니다.
음성 대조군의 경우 IMG 완전 배지에서 60마이크로몰 사이토칼라신 D를 준비하여 액틴 중합을 억제하여 식균 작용을 억제합니다. 그런 다음 최종 농도 10마이크로몰을 위해 각 웰에 이 용액 10마이크로리터를 첨가하고 30분 동안 배양합니다. 인큐베이터에서 플레이트를 제거하고 섭씨 10도에서 10분 동안 배양합니다. 접시를 얼음 위에 유지하고 시냅토좀을 포함하는 배지 50마이크로리터를 추가합니다.
플레이트를 섭씨 10도에서 3분 동안 270배 g으로 원심분리하고 이미징 획득이 있을 때까지 플레이트를 얼음 위에 유지합니다. 플레이트를 라이브 셀 이미징 리더에 삽입하고 분석할 웰을 선택합니다. 그런 다음 20x 대물 렌즈를 선택합니다. 그런 다음 초점 발광 다이오드 또는 LED 강도 통합 시간과 명시야 및 청색 채널의 게인을 조정합니다. 시냅토솜 형광은 초기 시점에서 무시할 수 있어야 합니다.
웰당 몽타주에서 획득할 개별 타일의 수를 선택합니다. 유정 중앙에 16개의 타일을 획득하여 전체 유정 면적의 약 5%를 이미징합니다. 온도를 섭씨 37도로 설정하고 이미징을 위해 원하는 시간 간격으로 설정합니다.
본 연구에서는 살아있는 세포 이미징 시스템을 사용하여 미세아교세포 유사 세포의 식세포 작용 활성을 조사합니다. 식세포 작용의 메커니즘을 이해하기 위해 액틴 중합 억제가 시냅토솜 섭취에 미치는 영향을 분석합니다.
인간 시냅토좀과 미세아교세포 유사 세포를 이용한 정량적 살아있는 세포 식세포 작용 분석은 신경퇴행성 질환 파이프라인과 관련된 신경면역 기전을 조사하기 위한 강력한 플랫폼을 제공합니다. 이 접근 방식은 인간 관련 시스템에서 액틴 의존적 식세포 기능을 분리함으로써 기전적 위험 제거 및 타겟 검증을 가능하게 합니다. 본 분석법은 신경염증 및 시냅스 유지 연구의 초기 단계 포트폴리오 결정에 대한 예측 신뢰도를 지원합니다.
이 살아있는 세포 분석법은 초기 발견에서 리드 화합물 도출 단계의 연속선상에 위치하며, 신경생물학의 표적 검증 및 기전 연구를 위한 실행 가능한 데이터를 제공합니다.
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마지막 업데이트: 29 8월 2026