Assessment of Excitatory Neurotransmitter Levels in Chronic Epilepsy-Induced Rats

해마에 가이드 캐뉼라와 뇌파도(EEG) 전극을 이식한 대조군 쥐와 만성 간질 유발 쥐를 취합니다.

간질 유도는 흥분성 신경 전달 물질 방출을 증가시켜 시냅스 후 세포로 이온 유입을 유발하여 지속적인 흥분 전위를 생성합니다. 이로 인해 전극을 사용하여 기록된 발작이라고 하는 전기적 활동의 동기화된 폭발이 발생합니다.

반투막이 있는 미세 투석 프로브를 캐뉼라에 삽입합니다.

쥐를 EEG 기록 시스템의 새장에 묶습니다.

프로브 입구를 통해 뇌 조직에 생리학적 완충액을 주입합니다.

발작이 없는지 확인하고 프로브 배출구를 통해 세포외액을 수집하여 신경 전달 물질 수준을 평가합니다.

간질 쥐의 기저 수치 상승은 간질 매개 증가를 나타냅니다.

고칼륨 완충액을 주입하고 샘플을 회수합니다.

칼륨 증가는 신경 흥분성을 연장하여 지속적인 신경 전달 물질 방출을 유발합니다.

간질 쥐와 대조군 쥐 모두에서 신경 전달 물질 수치의 일시적인 급증은 높은 칼륨 유발 증가를 나타냅니다.

제조업체 사용자 가이드에 따라 처음 사용할 미세 투석 프로브를 준비하고 링거 용액으로 채우는 것으로 시작합니다. 그런 다음 10cm 길이의 FEP 튜브 조각을 절단하고 다양한 색상의 튜브 어댑터를 사용하여 프로브의 입구 및 출구 캐뉼라에 연결합니다. 튜브가 모든 연결에서 데드 스페이스 없이 어댑터에 닿는지 확인하십시오.

동물의 머리를 단단히 잡고 핀셋을 사용하여 가이드에서 더미 캐뉼라를 제거합니다. 미세 투석 프로브를 가이드 캐뉼라에 삽입하고 모델링 점토를 사용하여 캐뉼라를 더욱 단단하게 합니다. 그런 다음 동물을 테더링된 EEG 기록 시스템에 연결합니다. 그런 다음 동물을 플렉시글라스 실린더에 넣고 새로운 환경을 탐색하게 하십시오. 깨어 있고 자유롭게 움직이는 쥐의 움직임을 따라가십시오.

그런 다음 튜브 어댑터를 사용하여 링거 용액이 들어 있는 무딘 2.5게이지 바늘로 프로브의 입구를 22밀리리터 주사기에 연결합니다. 2.5밀리리터 주사기의 피스톤을 계속 밀어 10초 안에 링거 용액 1밀리리터를 프로브에 밀어 넣습니다. 프로브를 사용할 준비가 되었음을 나타내기 위해 배출구에 액체 방울이 나타나는지 확인하십시오. 마지막으로 튜브 어댑터로 FEP 튜브에 연결된 2.5밀리리터 주사기에 링거 용액을 채우고 주입 펌프에 장착합니다. 분당 2마이크로리터로 펌프를 시작하고 밤새 작동시키십시오.

비디오 EEG 기록을 통해 샘플 수집 전 3시간 동안 발작이 없음을 확인한 후 링거 용액으로 채워진 FEP 튜브 캐뉼라 주사기를 운반하는 펌프를 중지합니다. 100밀리몰 칼륨 용액이 포함된 수정된 링거 용액으로 채워진 튜브 어댑터를 사용하여 FEP 튜브에 연결된 또 다른 2.5밀리리터 주사기 세트를 장착합니다. 분당 2마이크로리터로 펌프를 시작하고 작동시키십시오. 시스템에 기포가 없는지 확인하고 튜브가 모든 연결부에서 데드 스페이스 없이 어댑터에 닿는지 확인하십시오.

그런 다음 프로브를 사용할 준비가 되었음을 나타내기 위해 배출구에 액체 방울이 나타나는지 확인하십시오. 그런 다음 링거 용액으로 채워진 주사기의 FEP 튜브를 각 동물의 프로브 입구 캐뉼라에 연결하고 출구 끝에 액체 방울이 나타날 때까지 기다립니다. 프로브의 배출구를 FEP 튜브에 연결하면 시험관에 수집됩니다.

천공된 캡이 있는 밀폐된 0.2밀리리터 시험관에 FEP 튜브를 삽입합니다. 그리고 모델링 점토 조각으로 고정하여 튜브가 제자리에 유지되도록 합니다. 평형을 위해 샘플을 수집하지 않고 60분 동안 분당 2마이크로리터로 펌프를 가동한 후 시스템은 기준선 조건에서 5회 연속 30분 투석액 샘플을 수집합니다. 그리고 얼음 위에 샘플을 보관하십시오.

10분 후 100밀리몰 칼륨 링거 용액이 들어 있는 주사기에서 일반 링거 용액으로 튜브를 전환하고 펌프를 작동시킵니다. 다섯 번째 평형 후 투석액을 수집한 후 1시간 동안 10분마다 20마이크로리터 투석액 분획을 수집합니다. 그런 다음 30분 투석액 샘플을 추가로 수집하고 펌프를 중지합니다. 마지막으로 실험 후 HPLC 분석까지 시료를 섭씨 영하 80도에서 보관합니다.