0 조회수 • 2:34 분 • April 28th, 2025
쥐 뇌 미세혈관 내피 세포(RBMEC)의 단층 배양이 있는 챔버 슬라이드를 가져갑니다.
세포는 액틴 세포골격에 연결된 밀착 단백질로 연결되어 혈액-뇌 장벽의 내피층을 모방합니다.
배지를 탈산소 포도당이 없는 배지로 교체한 다음 슬라이드를 저산소증 챔버에 놓습니다.
산소와 포도당을 사용할 수 없으면 ATP 합성이 억제됩니다. 나머지 ATP는 뉴클레오티드 유도체로 분해됩니다.
ATP 고갈은 칼슘 펌프를 방해하여 산화환원효소 효소를 활성화하는 세포내 칼슘을 증가시킵니다.
그런 다음 산소 배지를 보충한 다음 슬라이드를 산소 배양기에 넣습니다. 활성화된 산화환원효소는 재도입된 산소를 활용하여 뉴클레오티드 유도체를 분해하여 활성 산소종 또는 ROS를 생성합니다.
ROS는 밀착 접합 단백질 간의 상호 작용을 방해하고 액틴 세포골격을 스트레스 섬유로 리모델링하여 세포-세포 상호 작용을 약화시키는 신호 전달 경로를 유도합니다.
세포간 상호 작용이 중단된 단층은 분석할 준비가 되었습니다.
준비 시 제조업체의 지침에 따라 저산소증 세포 배양 시스템을 설정하고 교정하십시오. 챔버 환경은 질소 95%, 이산화탄소 5%, 섭씨 37도여야 합니다. 이제 포도당이 없는 dmem을 저산소증 챔버에 4-6시간 동안 두어 탈산소화합니다. 나중에 배지를 탈산소화된 포도당이 없는 DMEM으로 교체하여 세포에 스트레스를 주기 시작합니다. 그런 다음 세포를 저산소증 챔버에 2시간 동안 넣습니다. 2시간 후, 세포를 쥐 뇌 내피 세포 완전 배지에 다시 놓습니다. 그런 다음 한 시간 동안 세포를 정상 상태로 되돌려 세포에 다시 산소를 공급합니다.