젤 내장 환자 유래 질환 섬유혈관 조직의 면역형광 염색

재수화된 피브린 겔 포매, 고정 및 투과화된 환자 유래 병든 섬유혈관 조직을 섭취하십시오. 이 조직에는 내피 세포와 주위 세포가 있는 불규칙한 신생혈관 구조가 포함되어 있습니다.

비특이적 항체 결합을 방지하기 위해 차단 용액으로 조직을 처리합니다.

내피 세포 및 주위 세포의 표면 단백질을 표적으로 하는 1차 항체와 함께 배양합니다.

완충액으로 헹구어 결합되지 않은 항체를 제거한 다음 완충액에서 배양합니다.

완충액 세척 후, 형광 염료 접합 2차 항체와 함께 배양하여 1차 항체에 결합합니다.

완충액으로 세척하여 과도한 항체를 제거하고 완충액에서 배양합니다.

완충액 세척 후 핵 염료를 첨가하여 세포 핵을 염색합니다. 완충액과 탈이온수로 헹구어 결합되지 않은 염료를 제거합니다.

조직을 현미경 슬라이드로 옮깁니다.

마운팅 매체를 도포하고 속경화 마운팅 매체가 들어 있는 커버슬립으로 밀봉합니다.

자연 건조 후 슬라이드를 저온에 보관하십시오. 그런 다음 낙산화형광 현미경으로 조직을 이미지화하여 신생혈관 구조 내에서 내피 세포와 주위 세포의 공간적 배열을 시각화합니다.

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p style='background-color:#ffffff;line-height:1.38;margin-bottom:0pt;margin-top:0pt;padding:0pt 0pt 12pt;' dir='ltr'>지지대에 플레이트를 기울이고 실온에서 2시간 동안 500마이크로리터의 차단 용액에 물방울을 배양합니다. 텍스트 프로토콜에 따라 1차 항체 혼합물을 준비합니다.

그런 다음 둥근 모서리가 있는 주걱을 사용하여 물방울을 둥근 바닥 96웰 플레이트로 옮깁니다. 액적당 30마이크로리터의 1차 항체 혼합물에서 실감 4도에서 밤새 액적을 배양합니다. 다음날, 물방울을 웰당 2밀리리터의 세척액이 들어 있는 12웰 플레이트로 옮깁니다. 5분 동안 세 번 세척하여 물방울을 헹굽니다. 그런 다음 30분 동안 9회 세척하여 물방울을 세척합니다.

다음날 PBS로 물방울을 세 번 헹굽니다. 텍스트 프로토콜에 따라 적절한 형광단 접합 2차 항체 혼합물을 준비합니다. 이전에 시연한 대로 물방울을 둥근 바닥 96웰 플레이트로 옮깁니다. 그리고 플레이트를 30마이크로리터의 2차 항체 혼합물과 함께 빛으로부터 보호된 실온에서 4시간 동안 배양합니다.

4시간 후 물방울을 웰당 2밀리리터의 세척액이 들어 있는 12웰 플레이트로 옮깁니다. 먼저 물방울을 5분 동안 세 번 씻어냅니다. 그런 다음 30분 동안 4회