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최소한의
침습으로 뇌 시각화를 가능하게 하기 위해 얇은 두개골층이 있는 두개골 창이 있는 마취된 마우스를 예로 들어 보겠습니다.
현미경으로 더 큰 혈관에서 작은 혈관으로 가는 혈류를 기반으로 동맥을 식별합니다.
순환을 통해 뇌에 도달하는 꼬리 정맥에 감광성 염료를 주입합니다.
빛으로 염료를 여기시켜 형광을 방출하여 혈류 모니터링이 가능합니다.
광혈전
증으로 알려진 혈전 형성을 유도하기 위해 빛의 강도를 높입니다.
염료는 고강도 빛을 흡수하고 산소와 반응하여 활성산소종을 생성하여 내피 세포를 손상시킵니다.
손상된 세포는 혈소판을 부착시켜 혈전 형성을 시작하는 매개체를 방출합니다. 혈액 속의 피브린은 추가 혈액 세포를 가두어 혈전을 만드는 데 도움이 됩니다.
혈
전은 앞에 염료가 축적되어 감지되어 뇌로 가는 혈류를 방해합니다.
절개 부위를 봉합하고 감염을 예방하기 위해 항생제를 바르고 진통제를 투여하여 통증을 줄이고 회복시킵니다.
마우스를 현미경에 설치한 후 신선한 장미 벵골을 인공 CSF에 밀리리터당 20mg으로 준비합니다. 필터 멸균 혼합물을 실험 완료 후 폐기하십시오. 항상 신선하게 사용해야 합니다.
이제 561나노미터 레이저로 두개창을 스캔하면서 꼬리 정맥을 통해 혼합물 0.1을 주입합니다. 5초 이내에 염료가 두개골 맥관 구조에서 쉽게 볼 수 있습니다. 충분한 염료를 주입한 후 혈전증을 위해 40-80미크론 혈관을 선택합니다. 동맥은 더 큰 혈관에서 작은 혈관으로, 또는 그 반대의 흐름에 따라 정맥과 구별될 수 있습니다.
이제 선택한 용기에 레이저를 장착할 준비를 합니다. 사용 중인 시스템에 적합한 체류 시간을 늘립니다. 레이저 출력을 100%로 높이고 최대 스캔 속도로 이미지 컬렉션을 초당 1프레임으로 설정합니다. 스테이플 응고가 형성될 때까지 마우스를 스캔합니다. 일반적으로 이 작업은 약 5분 정도 소요됩니다. 이상적으로는 혈전을 만들기 위해 하나의 시야만 스캔해야 합니다. 그에 따라 목표를 선택하십시오. 혈전이 형성되지 않으면 더 많은 염료를 사용해 보십시오.
혈전이 형성되면 이미징 영역에서 마우스를 제거하고 해부 현미경으로 수술을 완료할 준비를 합니다. 먼저 출혈 여부를 확인하면서 링을 조심스럽게 제거합니다. 출혈이 발생하면 실험을 종료해야 합니다.
다음으로 6-0 봉합사를 사용하여 절개 부위를 봉합합니다. 그런 다음 절개선에 항생제를 바르십시오. 통증 완화를 위해 3일 동안 부프렉스를 피하 주사하십시오. 부프레넥스의 첫 번째 주사를 투여한 후 마우스를 회복실에 넣고 걸을 수 있을 때까지 모니터링합니다. 그런 다음 청소해야 하는 집 새장으로 돌려보내십시오. 종단 이미징은 텍스트 프로토콜에 자세히 설명되어 있습니다.