뇌종양 신경구 절편에서 바이오마커의 면역조직화학적 염색

종양 특이적 핵 단백질 바이오마커를 나타내는 신경 줄기 세포 클러스터인 뇌종양 신경구의 파라핀 포매 절편이 있는 슬라이드를 찍습니다.

가열하여 파라핀을 녹이고 자일렌을 사용하여 제거한 다음 알코올 농도를 낮추어 조직을 재수화합니다.

세제가 포함된 산성 완충액에서 가열하여 바이오마커의 에피토프를 마스킹하고 세포막을 투과시킵니다.

헹구고 산화제로 처리하여 내인성 과산화효소 효소를 비활성화하여 비특이적 신호를 방지합니다.

차단 솔루션을 적용하여 비특이적 바인딩 부위를 마스킹합니다.

바이오마커 에피토프를 표적으로 하는 1차 항체와 함께 배양합니다.

헹구고 1차 항체에 결합하는 비오틴 접합 2차 항체로 처리합니다.

비오틴에 결합하는 과산화효소 효소 접합 아비딘으로 헹구고 배양합니다.

발색 기질과 산화제를 첨가합니다.

과산화효소는 제제를 활용하여 기질을 유색 침전물로 변환하고 바이오마커 위치를 표시합니다.

핵을 대대염색하고 조직을 알코올로 탈수한 다음 바이오마커 분포를 이미징하기 위해 슬라이드를 장착합니다.

먼저 슬라이드를 섭씨 60도의 금속 선반에서 20분 동안 배양하여 파라핀을 녹입니다. 그런 다음 Tex 프로토콜에 따라 실온에서 재수화 트레인에서 배양하여 슬라이드를 탈파라핀화했습니다. 비특이적 항체 결합을 방지하기 위해 슬라이드를 수돗물에 보관하십시오. 그 후, 슬라이드를 섭씨 125도에서 30초 동안 감시 90도에서 10초 동안 배양합니다. 슬라이드를 식힌 후 증류수로 다섯 번 헹굽니다.

다음으로, 슬라이드를 실온에서 0.3% 과산화수소에 20분 동안 배양합니다. 그런 다음 슬라이드를 세척 완충액에서 5분 동안 부드럽게 교반하면서 세 번 세척합니다. 희석된 1차 항체와 함께 섭씨 4도로 설정된 가습 챔버에서 슬라이드를 밤새 배양합니다. 그런 다음 슬라이드를 부드럽게 교반하면서 5분 동안 세 번 씻습니다.

다음으로, 희석된 비오티닐화 2차 항체에서 슬라이드를 실온에서 1시간 동안 배양합니다. 슬라이드를 세척 완충액에서 5분 동안 3회 세척하여 부드럽게 교반합니다. 그런 다음 슬라이드를 아비딘 비오티닐화 양 고추냉이 과산화효소 복합체에서 어두운 곳에서 한 시간 동안 배양합니다. 앞에서 설명한 대로 세척을 반복하십시오. 그 후, 슬라이드를 dab 과산화수소 기질 밴드와 함께 실온에서 2-5분 동안 배양합니다.

슬라이드를 수돗물로 헹구고 슬라이드를 헤마톡실린 용액에 담가 더오얼룩을 만듭니다. 그런 다음 물이 맑아질 때까지 수돗물로 슬라이드를