0 조회수 • 4:15 분 • August 7th, 2025
적색 형광 단백질 또는 RFP 발현을 차단하는 loxP 측면 STOP 카세트를 운반하는 유전자 변형 쥐 새끼를 예로 들어 보겠습니다.
강아지를 맞춤형 정위 프레임에 고정하고 얼음으로 덮어 마취를 유지합니다.
두피를 소독하고 람다를 기준점으로 표시합니다.
주사 바늘을 람다에 대한 선조체 좌표에 맞추고 두개골에 구멍을 뚫습니다.
바늘을 두개골 표면으로 집어넣은 다음 목표 깊이에 삽입합니다.
염료 혼합 바이러스 벡터를 제어된 속도로 선조체에 주입합니다. 벡터는 녹색 형광 단백질 또는 GFP 및 Cre 재조합효소를 암호화합니다.
용액 역류를 방지하기 위해 바늘을 천천히 빼냅니다.
강아지를 제거하고 회복을 허용하십시오.
선조체 세포에서 바이러스는 게놈을 방출하여 Cre 재조합 효소와 GFP의 발현을 가능하게 합니다. Cre는 loxP 측면 STOP 카세트를 절제하여 RFP 발현을 활성화합니다.
GFP 및 RFP 동시 발현은 성공적인 유전자 조작을 확인합니다.
장갑을 끼고 강아지를 헤드 트레이에 놓고 저체온 마취를 유지하기 위해 라텍스 슬리브 주위에 으깬 얼음을 놓습니다. 그런 다음 70% 에탄올로 강아지의 머리를 문지르고 람다 랜드마크를 찾습니다. 마커로 표시하십시오. 그런 다음 바늘 끝을 람다에 맞추고 전방, 후방 및 내측 측면 좌표를 0으로 설정합니다.
다음으로 뇌 아틀라스를 참조하여 주사 암을 표적 부위로 이동합니다. 예를 들어, P2 새끼의 선조체는 람다의 앞쪽으로 2.4mm, 정중선 양쪽으로 1.0mm, 복부에서 1.7mm입니다. 그런 다음 펜을 사용하여 PE10 튜브에 빠른 녹색 염료의 위치를 표시합니다. 그런 다음 바늘 끝이 두개골 표면에 닿을 때까지 피부와 두개골을 통해 천천히 바늘을 관통하기 시작합니다.
등쪽 복부 좌표를 0으로 설정합니다. 그런 다음 바늘을 표적 부위까지 천천히 내립니다. 제자리에 있으면 실질이 정상 모양으로 돌아올 때까지 1분 동안 기다리십시오. 그런 다음 분당 100나노리터로 미세 주입 프로그램을 실행합니다. 주입하는 동안 PE 튜브에서 빠른 녹색 염료가 움직이는 것을 관찰하십시오.
바늘 끝이 두개골 표면에 닿을 때까지 피부와 두개골을 통해 바늘을 천천히 관통하는 것이 중요합니다. 주입하는 동안 Fast Green 염료가 PE 튜브에서 움직이는 것을 관찰하는 것이 필수적입니다.
주사가 완료된 후 1분 정도 기다린 다음 천천히 바늘을 관통된 DV 깊이의 절반까지 들어 올립니다. 그런 다음 강아지의 머리에서 바늘을 천천히 빼내기 전에 30초 더 기다리십시오.
주사가 완료된 후 1분 정도 기다렸다가 천천히 바늘을 관통된 DV 깊이의 절반까지 올린 다음 30초 더 기다렸다가 강아지 머리에서 천천히 바늘을 빼내는 것이 중요합니다.
모든 표적 부위를 주입한 후 섭씨 33도 인큐베이터에서 강아지를 20분 동안 예열합니다.
강아지가 흉골 누운 자세를 회복할 때까지 5분마다 강아지를 확인하십시오. 그런 다음 강아지를 댐으로 돌려보냅니다.