0 조회수 • 4:17 분 • August 7th, 2025
마취된 마우스를 정위 고정 프레임에 고정합니다.
면도한 두피를 소독한 후 정중선을 절개하여 두개골을 노출시킵니다.
두개골을 말리고 과산화수소를 도포하여 브레그마 가시성을 높입니다.
bregma와 lambda를 찾은 다음 대상 사이트를 식별합니다.
대상 부위의 두개골을 조심스럽게 뚫습니다.
바이러스로 채워진 주사기를 정위 고정 기구에 부착합니다.
이 바이러스는 감염된 뉴런을 표지하는 형광 리포터와 함께 치상회뉴런의 게놈 편집을 위한 Cas9 및 단일 가이드 RNA를 암호화합니다.
주사기를 내려 치상회에 도달한 다음 바이러스를 천천히 주입하여 균일한 분포를 보장합니다.
주사기를 점차적으로 올리고 추가 좌표에서 주사를 반복합니다.
역류를 방지하기 위해 잠시 멈춘 다음 바늘을 천천히 빼냅니다.
반대쪽 반구에서 절차를 반복합니다.
마지막으로 절개 부위를 봉합합니다.
이제 이 모델은 추가 연구를 위한 준비가 되었습니다.
주사 부위를 준비하기 위해 마취된 쥐의 머리를 면도합니다. 4% 이소플루란을 노즈콘에 직접 넣습니다. 그런 다음 정위 기구에 마우스를 놓습니다. 이어바를 고정하기 전에 이빨이 슬롯에 떨어질 때까지 바이트 바를 입에 삽입합니다.
동물의 몸이 가열 패드 위에 있고 코가 코콘에 있는지 확인하십시오. 다음으로 발을 꼬집어 마취를 확인합니다. 그런 다음 인공 눈물을 발라 눈에 윤활유를 바르십시오. 그런 다음 면도한 머리를 포비돈 요오드와 리도카인으로 면봉으로 닦습니다.
이제 두피 정중선을 따라 작은 절개를 합니다. 면봉으로 두개골을 말리고 과산화수소를 바르면 브레그마를 시각화하는 데 도움이 됩니다. 해부 스코프를 사용하여 두개골에서 브레그마를 찾아 그 위에 드릴 비트를 놓습니다. x, y 및 z 평면의 디지털 입위 좌표를 0으로 설정합니다.
헤드가 꼬리 y축에서 수평을 이루도록 하려면 드릴 비트를 람다에 놓고 z-좌표가 브레그마와 람다에서 대략 0이 되도록 헤드를 수평으로 맞춥니다. 헤드가 x축을 따라 수평을 이루도록 하려면 드릴 비트를 브레그마와 람다 사이의 중간점에 놓고 양쪽의 중간점에서 1mm에서 z 좌표를 측정하여 동일한지 확인합니다.
다음으로, 드릴을 원하는 좌표 위에 놓기 전에 이소플루란을 2%로 낮추고 두개골을 조심스럽게 뚫습니다. 모든 구멍을 뚫은 후 바이러스로 채워진 주사기를 정위 고정 기구에 부착합니다. 주사기를 구멍 중앙에 놓고 두개골의 z 좌표를 0으로 설정합니다. 주사기를 가장 깊은 z-깊이까지 천천히 내리고 정위 인젝터를 사용하여 분당 0.25마이크로리터의 속도로 주입을 시작합니다.
가장 깊은 z-깊이에서 주입이 완료된 후 1분 정도 기다렸다가 다음 좌표로 올린 후 다시 주입을 시작합니다. 모든 z-주입 좌표가 주입될 때까지 이 패턴을 계속합니다. 마지막 주사 후 2분 정도 기다렸다가 주사기를 꺼냅니다. 그런 다음 정위 기구에서 마우스를 제거하고 두피를 봉합합니다. 리도카인과 항균 크림을 수술 부위에 바르고 진통제를 투여한 후 동물을 가열된 회복실로 옮깁니다.