마우스 뇌의 TRPV1 탈감작을 위한 Resiniferatoxin을 사용한 뇌실내 치료

감각 뉴런에서 발현되는 통증 민감성 이온 채널인 TRPV1 수용체의 고친화성 작용제인 레시니페라톡신으로 채워진 마이크로 주사기를 가져갑니다.

바늘을 금속 튜브에 통과시켜 정확한 심실 표적화를 위해 팁의 짧은 끝을 노출시킵니다.

마취된 쥐를 엎드린 자세로 삼고 알코올을 사용하여 머리를 소독합니다. 두개골을 안정시키기 위해 머리를 단단히 잡으십시오.

시

상 봉합사에 걸릴 때까지 바늘을 두피에서 옆으로 움직입니다.

바늘을 오른쪽으로 이동한 다음 주둥이쪽으로 움직여 관상 봉합사에 연결합니다.

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늘을 우측심실에 삽입한 다음 RTX를 천천히 주입합니다.

바늘을 짧게 잡고 RTX 확산을 허용한 다음 역류를 방지하기 위해 천천히 빼냅니다.

RTX는 뇌의 감각 뉴런에 있는 TRPV1 채널에 결합하여 지속적인 칼슘 유입과 장기간의 뉴런 탈분극을 유발합니다.

이것은 인산화 매개 TRPV1 탈감작을 유발한 후 TRPV1 내재화 및 리소좀 분해를 유발하여 통증 자극에 대한 신경 반응성을 감소시킵니다.

펜토바르비탈 나트륨으로 마우스를 복강 내 마취하고 교정 반사의 상실을 확인합니다. 피하 치료의 경우 RTX를 체중 10g당 0.1밀리리터의 부피로 밀리리터당 20마이크로그램의 양으로 목 뒤쪽에 주사합니다. 대조군의 경우 같은 방법으로 차량을 주입합니다. 일회용 27게이지 바늘을 금속 튜브에 통과시켜 바늘의 3-3.5mm 끝을 노출시킵니다.

그런 다음 손가락으로 마우스의 편평뼈를 단단히 잡습니다. 두피에서 바늘을 옆으로 움직여 시상 봉합사를 찾습니다. 바늘 끝이 봉합사에 걸리면 끝을 오른쪽으로 약 1mm 움직입니다. 그런 다음 끝을 주둥이쪽으로 움직여 관상 봉합사를 찾습니다. 그런 다음 바늘을 천천히 수직으로 삽입합니다. RTX 용액을 10초에 걸쳐 주입한 후 10초 동안 더 유지합니다. 그런 다음 바늘을 천천히 빼내고 마우스를 홈 케이지로 되돌립니다.