역행성 신경 추적을 위한 쥐 척수에 바이러스 벡터 주입

매우 효율적인 역행 수송 또는 HiRet 바이러스 벡터가 포함된 마이크로니들로 마이크로인젝터를 가져 가십시오.

HiRet 바이러스 외피의 당단백질은 시냅스를 통해 뉴런으로 들어가는 것을 촉진합니다. 이 바이러스는 또한 형광 단백질을 암호화하는 유전자를 가지고 있습니다.

요추 척수가 노출된 마취 된 쥐를 1 내지 4로 가져 가십시오.

척수의 정중선을 기준으로 바늘을 주사 부위 위에 위치시킵니다.

바늘을 척수에 내립니다.

통제된 속도로 바이러스 투여를 시작합니다.

바늘을 빼기 전에 바이러스 확산을 위해 충분한 시간을 허용하십시오.

신경 수용체는 바이러스 당단백질과 결합하여 시냅스를 통한 바이러스 진입을 촉진하고 축삭을 통해 체마로 수송하는 과정을 촉진하는데, 이를 역행 수송이라고 합니다.

바이러스 유전자는 숙주 게놈과 통합되어 형광 단백질의 발현을 가능하게 합니다.

또한 이러한 바이러스는 연결된 뉴런을 통해 이동하여 뉴런 경로를 추적할 수 있습니다.

척수의 정중선에 바늘을 놓고 미세 조작기의 버니어 눈금을 사용하여 바늘을 측면으로 0.8mm 향하게 합니다. 그런 다음 바늘이 움푹 들어가지만 경막에 구멍이 뚫리지 않을 때까지 척수로 바늘을 내립니다. 그리고 바늘 끝이 1.5mm 깊이까지 가라앉을 때까지 바늘로 경막에 구멍을 뚫기 위해 빠르게 비틀어 동작을 사용합니다.

바늘이 제자리에 있으면 분당 400나노리터의 속도로 바이러스를 전달하도록 인젝터를 프로그래밍하고 염료 전면의 진행 상황을 관찰하여 바이러스가 척수로 들어가고 있는지 확인합니다. 주사가 끝나면 바이러스의 확산을 촉진하기 위해 바늘을 척수에 2-5분 동안 그대로 둔 다음 다음 주사 부위에 위치시키기 위해 바늘을 천천히 빼냅니다.