쥐 새끼의 뇌에 Interneuron 전구 세포의 이식

마취된 수혜자 쥐 새끼부터 시작하십시오. 두개골이 노출된 상태로 유지되도록 테이프로 머리를 고정합니다.

해부학적 참조 람다를 사용하여 표적 뇌 영역을 찾습니다.

성숙한 중간 뉴런으로 분화할 수 있는 중간 뉴런 전구체 세포의 현탁액이 적재된 표적 영역 위에 마이크로피펫을 배치합니다.

이러한 전구체 세포는 수혜자와 동일한 발달 단계에 있는 기증자 강아지의 피질, 선조체 또는 해마에서 파생됩니다.

현탁액을 뇌에 주입하여 전구체가 기원 영역으로 전달되는 동소성 이식 또는 다른 뇌 영역에 도입되는 이소성 이식을 수행합니다.

역류를 방지하기 위해 마이크로피펫을 집어넣기 전에 현탁액이 확산되도록 하십시오.

회복을 위해 강아지를 보온 패드에 옮깁니다.

이제 수혜자 강아지의 뇌에서 기증자 전구체의 생존 및 성숙을 평가할 수 있습니다.

끝이 가는 마이크로피펫에 미네랄 오일을 넣습니다. 마이크로피펫을 나노리터 주입기에 부착하고 나노리터 주입 장치를 마그네틱 베이스에 부착된 매니퓰레이터에 고정합니다. 첫 번째 새끼가 얼음 위에서 마취되는 동안 균질한 세포 분포를 보장하기 위해 세포 용액을 여러 번 피펫팅합니다.

미네랄 오일을 배출하고 피펫에 단일 세포 현탁액을 완전히 채웁니다. 발가락 꼬집기에 대한 반응이 부족하다는 것을 확인한 후 머리 꼭대기가 비교적 평평해지도록 머리를 접착 퍼티 위에 올려 놓은 채 페트리 접시 덮개 위에 강아지를 놓습니다.

다이아몬드 구멍이 있는 실험실 테이프로 머리를 덮고 피부가 늘어날 때까지 테이프를 팽팽하게 당겨 머리가 단단히 고정되고 구멍을 통해 람다가 보입니다. 고정된 강아지를 나노리터 인젝터 아래로 옮기고 팁이 람다 바로 위에 오도록 마이크로피펫을 내립니다.

매니퓰레이터의 x, y 좌표를 관찰하고 마이크로피펫이 머리의 내외측 및 전후 축을 따라 적절한 좌표에 위치할 때까지 매니퓰레이터 손잡이를 조정합니다. 팁이 피부에 작은 오목한 부분을 만들 때까지 마이크로피펫을 내리고 z축 조작기 손잡이를 단단하게, 그러나 부드럽게 돌려 마이크로피펫을 피부와 두개골을 통해 뇌로 밀어 넣습니다.

팁이 텐트 모양의 원뿔형 피부로 둘러싸여 있을 때까지 마이크로피펫을 약간 집어넣고 z축을 따라 좌표를 봅니다. 그런 다음 마이크로피펫을 적절한 실험 깊이로 낮추고 세포를 주입합니다. 세포가 전달된 후 15초 동안 기다렸다가 마이크로피펫을 집어넣고 원하는 경우 두 번째 위치에서 주입을 반복합니다. 강아지를 가열 패드 위에 놓고 완전히 회복될 때까지 모니터링한 후 집 케이지로 다시 옮깁니다.