감각 축삭 재생을 촉진하기 위한 마우스 등근 신경절의 전기천공 매개 형질감염

감각 뉴런 세포체를 포함하는 노출된 L4 및 L5 후근 신경절을 가진 마취된 마우스를 취하십시오.

축삭 재생을 조절하는 형광단 태그가 부착된 RNA 구조물과 추적 염료를 미세주입 피펫에 로드합니다.

혼합물을 DRG에 주입합니다.

전기천공 전극을 사용하여 DRG에 전기 펄스를 적용합니다.

이는 감각 뉴런 세포체의 막을 파괴하여 구조물이 세포질에 들어갈 수 있도록 하는 기공을 생성하여 형질감염을 촉진합니다.

절개 부위를 봉합하고 마우스가 회복되도록 합니다.

며칠 후 마우스를 다시 마취하고 고정합니다.

왼쪽 정중선 측면을 절개합니다. 좌골 신경을 노출시키기 위해 근육을 해부합니다.

신경을 부수어 감각 뉴런 축삭을 손상시킵니다. 봉합사 매듭으로 부위를 표시하십시오.

절개 부위를 봉합하고 마우스가 회복되도록 합니다.

형질감염된 구조물은 DRG 감각 뉴런 세포체의 mRNA를 표적으로 삼아 단백질 생산을 일시적으로 조절하여 손상 후 감각 축삭 재생을 향상시킵니다.

DRG 주입의 경우 DNA 플라스미드 또는 RNA 올리고를 유리 모세관 피펫에 로드합니다. 그런 다음 모세관 유리 피펫의 팁을 DRG에 조심스럽게 삽입합니다. 그리고 세포내 미세주입 디스펜스 시스템을 사용하여 DNA 플라스미드 또는 RNA 올리고의 1마이크로리터 용액을 점차적으로 주입합니다.

전기천공의 경우 전극으로 대상 DRG를 부드럽게 꼬집고 전기천공 시스템으로 5제곱 전기 펄스를 가합니다. 그런 다음 근육을 닫은 다음 나일론 봉합사로 피부층을 닫습니다. DRG 전기천공 2-3일 후 마우스를 복강내 마취하고 코르크판에 팔다리를 테이프로 붙인 후 정중선을 따라 왼쪽으로 0.5cm 1cm 절개합니다.

다음으로 대둔근과 이상근과 같은 근육을 세로로 절단합니다. 그런 다음 대좌골공과 좌골 노치 사이의 좌골 신경 부분을 노출시킵니다. 미세수술 겸자로 12초 동안 신경을 분쇄하고 나일론 신경외막 봉합사로 압착 부위를 표시합니다. 그런 다음 나일론 봉합사로 근육과 피부층을 봉합합니다.