0 조회수 • 3:33 분 • June 17th, 2025
아데노 관련 바이러스(AAV)와 국소 마취제인 리도카인이 포함된 용액으로 주사기를 채웁니다.
깨어 있는 마우스를 엎드린 자세로 놓고 상체를 덮습니다.
마우스의 골반 거들을 잡고 허리를 면도하여 피부를 노출시킵니다. 요오드와 에탄올로 살균하십시오.
척추 아래쪽의 틈을 찾아 부드럽게 눌러 표시하십시오.
꼬리를 돌려 척추를 정렬하고 주사기를 수직으로 삽입합니다.
꼬리 플릭이 발생할 때까지 각도를 조정하여 뇌척수액 또는 CSF가 흐르는 척수강내 공간으로 바늘이 들어가는지 확인합니다.
균일한 분포를 위해 용액을 천천히 주입합니다.
바이러스 입자는 뉴런에 결합하여 내부로 들어가 유전 물질을 핵으로 방출하여 표적 유전자 발현을 가능하게 합니다.
리도카인은 일시적으로 신경 신호를 차단하여 단기적인 다리 마비를 유발하여 CSF에서 성공적인 전달을 확인합니다.
이 프로토콜은 척수강내 전달을 CNS 질환 치료의 효과적인 방법으로 확립합니다.
시술을 시작하기 전에 27게이지 바늘을 25마이크로리터 해밀턴 주사기에 부착하고 바늘의 경사진 끝을 주사기의 체적 눈금에 맞춘 다음 바이러스 용액의 4 곱하기 10에서 10번째 게놈 사본의 8마이크로리터를 주사기에 조심스럽게 로드합니다.
다음으로, 생후 30-70일, 12-30g의 깨어 있는 쥐를 생물 안전 후드에 엎드린 자세로 침대 위에 놓고 멸균 거즈로 상체를 덮어 쥐를 진정시키고 물리지 않도록 합니다. 한쪽은 엄지손가락으로, 다른 쪽은 검지와 중지로 마우스의 골반 거들을 단단히 잡고 엄지와 검지로 양측 골반 거들 사이의 피부를 팽팽하게 유지한 다음 양측 골반 거들 사이의 털을 면도하고 노출된 피부를 요오드화물 기반 스크럽과 70% 에탄올로 살균합니다.
아데노 관련 바이러스 용액의 직접 척수강내 전달을 위해 양측 골반 거들 사이의 정중선을 따라 추간 공간을 촉진하고 손톱을 사용하여 피부의 움푹 들어간 부분을 눌러 L5에서 L6 추간 공간을 나타냅니다. 꼬리 밑부분을 살짝 부드럽게 돌려 척추의 정중선을 드러내고 바늘의 경사를 동물의 머리 쪽으로 조정합니다. 마우스를 제자리에 단단히 고정한 상태에서 척추의 정중선을 따라 바늘을 정렬하고 주사기를 중앙 시상면에 유지하면서 바늘을 움푹 들어간 곳 중앙에 부드럽고 수직으로 삽입합니다.
바늘이 뼈에 닿으면 각도를 약 30도로 천천히 줄이고 바늘을 추간 공간으로 밀어 넣습니다. 갑작스러운 꼬리 플릭은 경막내 공간에 성공적으로 진입했다는 신호입니다. 바늘이 추간 공간에 들어가면 끝이 단단히 고정된 느낌이 듭니다. 벡터 용액을 주입하고 바늘을 경막내 공간 내에 1분 동안 유지한 후 바늘을 회전시키면서 천천히 빼내어 누출을 최소화합니다.