마우스 모델에서 청력 회복을 위한 바이러스 벡터 기반 유전자 치료

JoVE Encyclopedia of Experiments

신경과학

0 조회수 • 3:53 분 • August 7th, 2025

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유전적 청력 손실이 있는 마취된 쥐 강아지를 예로 들어 보겠습니다.

이 상태에서 내이의 유모 세포에는 글루타메이트 수송체가 부족하여 글루타메이트가 소포로 포장되어 방출되는 것을 방지합니다.

이것은 청각 신경으로의 소리 신호 전달을 방해합니다.

쥐의 왼쪽 귀 뒤를 면도하고 소독한 후 눈 연고를 바릅니다.

목을 펴고 절개를 합니다.

지방 조직과 근육을 수축시켜 측두골을 노출시킵니다.

측두골의 일부인 고막 수포를 천공하고 개구부를 넓혀 내이의 얇은 장벽인 둥근 창막 또는 RWM을 노출시킵니다.

RWM에 구멍을 뚫고 치료 유전자를 운반하는 아데노 관련 바이러스 벡터를 주입합니다.

바이러스 입자는 확산되어 유모 세포로 들어갑니다.

유모 세포 내부에서 바이러스 입자는 유전 물질을 핵으로 전달하여 글루타메이트 수송체 생성을 유발합니다.

이를 통해 글루타메이트를 포장하고 방출하여 청각 신경에 대한 소리 신호를 복원할 수 있습니다.

발가락 꼬집음으로 마취를 확인한 후, 왼쪽 귀 후 부위를 면도하고 생후 10-12일째 마우스의 피부를 70% 에탄올과 포비돈 요오드로 소독한다. 그런 다음 보호 안과 연고로 눈을 덮고 목을 뻗은 동물을 가열 패드 위에 놓습니다. 수술 준비가 완료되면 작은 가위로 피하 조직을 절개하여 귀 후 근육을 노출시킵니다. 지방 조직을 절개 부위 뒤쪽으로 후퇴시킨 후 절개 부위에 수직으로 근육을 오른쪽과 왼쪽으로 분리합니다.

측두골을 노출시키기 위해. 25게이지 바늘을 사용하여 고막 수포를 천공합니다. 구멍을 확장하고 달팽이관의 기저 회전에 접근할 수 있도록 필요에 따라 집게로 뼈를 다시 벗겨냅니다.

그런 다음 골골 동맥과 둥근 창막을 시각화할 수 있도록 구멍을 충분히 넓힙니다. 붕규산 모세관 피펫으로 중앙의 둥근 창 멤브레인을 부드럽게 뚫습니다. 멸균 여과지로 둥근 창 멤브레인을 말리십시오. 그런 다음 유출액이 안정화될 때까지 5-10분 동안 기다리십시오.

이 단계에서 피펫을 잡고 전진할 때 원형 창 멤브레인 천공을 가능한 한 작게 만들 때 주의하십시오. 현미경 용도에 따라 피펫을 손이나 마이크로 매니퓰레이터로 잡을 수 있습니다. 여기에서 볼 수 있듯이 현미경이 마우스에 너무 가까워서 마이크로 매니퓰레이터를 사용할 수 없기 때문에 피펫을 손으로 잡습니다.

이제 1-2마이크로리터의 바이러스를 직경 15마이크로미터의 팁이 있는 당긴 유리 피펫에 끌어당기고 이전에 둥근 창 멤브레인에 만든 것과 동일한 구멍을 통해 바이러스를 고막에 미세 주입합니다.

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마지막 업데이트: 15 8월 2026