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신경과학
0 조회수 • 2:44 분 • August 7th, 2025
구속된 척추 및 구근 근위축증 또는 SBMA에 영향을 받은 마우스로 시작하십시오.
꼬리를 청소하고 따뜻하게 하여 정맥을 확장하십시오.
SBMA는 돌연변이 AR mRNA를 생성하는 돌연변이 안드로겐 수용체 또는 AR 유전자에 의해 발생합니다.
이 mRNA는 신호 전달을 손상시키고 근육 약화를 초래하는 운동 뉴런에서 독성 단백질을 합성합니다.
다음으로, 치료용 microRNA를 암호화하는 플라스미드가 있는 재조합 아데노 관련 바이러스 또는 AAV 벡터가 들어 있는 주사기를 사용합니다.
바늘을 꼬리 정맥에 삽입하고 용액을 주입합니다.
이제 출혈을 멈추기 위해 압력을 가한 다음 마우스를 케이지로 되돌립니다.
일단 순환되면 바이러스 벡터는 근육 기능을 제어하는 운동 뉴런에 도달합니다.
바이러스는 엔도사이토시스를 통해 세포에 들어가 플라스미드를 방출합니다.
플라스미드는 돌연변이 AR mRNA에 상보적인 서열을 가진 성숙한 마이크로RNA를 생성합니다.
이러한 마이크로RNA는 AR mRNA에 결합하여 분해를 유발합니다.
이는 독성 단백질 축적을 억제하고 신경근 기능을 개선하는 데 도움이 됩니다.
AAV 마이크로RNA 플라스미드 스톡을 밀리리터당 10-100조 게놈의 바이러스 부하를 포함하는 100-200-마이크로리터 분취량으로 나눕니다. 그런 다음 분취량 1개를 주사기에 넣고 27-30 게이지 바늘을 부착합니다.
이제 표준 마우스 고정 장치를 사용하여 꼬리가 노출된 상태로 마우스를 고정합니다. 그런 다음 70% 알코올로 꼬리를 청소하고 꼬리 아래에 따뜻한 패드를 약 30초 동안 놓아 혈관 확장을 증가시킵니다. 이제 꼬리의 말단 부분에서 바늘을 꼬리 정맥에 삽입하여 경사를 위로 향하게 하고 약 15도 정도의 얕은 각도로 삽입합니다.
그런 다음 바이러스를 주입하고 바늘을 제거하기 전에 몇 초간 기다리십시오. 바늘을 제거한 후 두 손가락을 사용하여 적당한 압력을 가하여 출혈을 멈춥니다. 그런 다음 동물을 집 우리로 돌려보냅니다.