Name: 모델링 및 3 차원 이미징 단체 셀 침략 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-12-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 8 s
Description: 학습하세요 종양 세포의 3D 매트릭스 침윤 메커니즘을 Matrigel 트랜스웰 시스템과 공초점 현미경을 활용하여 연구하는 방법을. 이 기법은 정량적 및 정성적 데이터를 동시에 제공하여 암 진행 연구에 필수적인 도구입니다.

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이 연구에 대한 자금은 암 연구 영국에서이다.

1. 형광 단백질과 세포의 Retroviral 라벨링 <ol><li> 0.25 X 10 6 세포에 따라 잘 6 잘 밖으로 플레이트 retroviral 포장 셀 (예 : 피닉스) 10% 태아 소 혈청 (FBS) / DMEM에 요리. </li><li> 48시간 나중에 retroviral DNA와 Transfect 세포 세포는 제조 업체의 지시에 따라 Effectene를 사용하여. </li><li> 나중에 중간 24시간로 두 번 우물 린스 후 10% 잘마다 FBS / DMEM의 1.5 ML를 추가합니다. </li><li> pipetting 2 ML의 microcentrifuge 튜브로 전송하여 중간 48시간 나중에 조직 문화에 패키지 바이러스를 수집합니다. </li><li> 펠렛 모든 세포로 5 분 1,600 rpm으로 원심 분리기. </li><li> -80에서 깨끗한 튜브에 뜨는하고 저장 제거 ° C. </li><li> retrovirally transduced하는 세포 6 잘 요리 잘 당 1.5 × 10 5 세포에서 밖으로 도금 37 ° C 하룻밤에 humidified 배양기에 배치됩니다. </li><li> 그 다음날, 세포와 광고에서 미디어를 제거D 각 잘 4 μl polybrene (2 MG / ML)와 보충 바이러스 주식 1 ML. 인큐베이터에서 번호판을 교체하십시오. </li><li> 5~6시간에 대한 부화 다음 각 잘 ~ 2 ML에게 10% FBS / DMEM을 추가하고 플레이트는 ° C inbubator 밤새 37 대체됩니다. </li><li> 그 다음날, 미디어를 교체하고 적절한 선택 미디어를 추가하기 전에 세포를 24 시간을 허용합니다. </li><li> 합류 (성장 세포의 비율과 retroviral 형질 도입의 효율성에 달려있는,하지만 일반적으로 4-14일에서 소요) 때, 참고로 비 transduced 사용하는 형광 세포에 대한 세포 및 정렬 trypsinize와 함께 수집하고 수영장 세포 형광 -80시 비 transduced 셀 및 동결 aliquots보다 큰 ° C 나중에 사용하기 위해. </li></ol> 2. 역 Matrigel의 침공 분석 <ol><li> 얼음이 천천히 (그림 1A)에 완료 Matrigel (즉, 성장 요인을 포함)의 나누어지는을 녹여. </li><li> 얼음 차가운 PBS에 일단 사인을 알아낼 수 없을, 희석 Matrigel 1시 1분 (다른 추가와 함께이전 희석하기 위해 PBS에 2 배 농도에서 치료, 그림 1B). 쉽게 중합 전에 Matrigel을 처리할 수 있도록하려면 모든 plasticware (예 : 팁, 튜브 등) 얼음 차가운해야합니다. </li><li> uncoated 많은 8 미크론 구멍 6.5 mm 직경이 같은 24 물론 조직 문화 판의 우물에 필요한 Transwells로 넣은 후 조심스럽게 우물에 희석 Matrigel 100 μl를 피펫과 37 ~ 30 분 대한 부화 휴가 ° C가 응고하기 (그림 1C). </li><li> 이 기간 동안 준비 하나 이상의 찬란 - 라벨이 자신의 정상적인 성장의 각 사전 처리 조건 (E. g. siRNA, 약물 치료)에서 세포 라인에 따라 ML 당 4-1 사이 × 10 5 세포에서 세포 정지를 중간 (그림 1D). </li><li> Matrigel은 필터 (그림 1E)의 위를 향하게 아래쪽에 Transwells와 세포 현탁액의 피펫 100 μl 반전, 확정했을 때. </li><li> 조심스럽게 24 잘 조직의 기본으로 Transwells을 커버문화 플레이트, 세포 현탁액 (그림 1 층)의 각 소적 교신. </li><li> 세포 부착 (그림 1G)에 대한 허용 4 시간 동안 거꾸로 상태로 접시를 품어. </li><li> 이번 다음, 접시 오른쪽 접속 설정 및 2 × 1 ML 혈청 무료 매체 (그림 2A)에 순차 수영 각 Transwell 씻는다. </li><li> (그림 2B) 잘 필요한 의약품이나 치료를 포함하는 3 번째 Transwells를 남겨주세요. </li><li> 부드럽게 경화 Matrigel / PBS 혼합물 위에 Transwell에 (25 NG / ML에서 E. g. EGF) FBS / DMEM 플러스 chemoattractant 10 % 100 μl를 피펫, 37 3-5일 위해 뚜껑과 부화를 교체 ° C와 5 % CO 2 (그림 2C). </li></ol> 3. 얼룩 및 시각화 <ol><li> 형광 단백질을 표현하는 세포는 사전 공촛점 현미경하려면 다음 단계를 건너뛸 수 있습니다 </li><li> 신선한 24 잘 요리와 4 μm의의 피펫 1 ML에서 Matrigel, 장소 Transwells를 침해 이미지가 아닌 형광 세포Calcein는 측면을 통해 누설하고 상단과 하단에서 얼룩 수 있도록, 각 Matrigel 플러그 상단에 얼룩 솔루션입니다. Calcein AM (calcein의 아세 톡시 메틸 에스테르)는 얼룩이 전체 전지 그린 라이브 세포 염색이며 고정이 필요하지 않습니다. </li><li> 37 1 시간 품어 ° C 5 % CO의 포인트 세포가 완전히 스테인드 및 공촛점 현미경으로 몇 군데 준비하는 2 humidified 분위기. </li><li> 또는, Matrigel을 침해하지 않는 형광등 전지는 고정 및 3.9-3.5에서 아래에 설명된대로 스테인드 수 있습니다. </li><li> 신선한 24 잘 플레이트 각 Transwell을 전송합니다. 오버레이 4% para-formaldehyde/0.2 % 트리톤 X - 100 1 ML. </li><li> 0.5 시간 동안 실온에서 품어. </li><li> 정착액을 제거하고 1 ML PBS로 3 회 씻는다. </li><li> 100 μg / ML RNase를 사용하여 30 분 RNase 처리와 세포질 RNA를 제거합니다. PBS로 2 번 씻으십시오. </li><li> 시각화를위한 PBS에 희석 0.01 밀리그램 / ML Propidium 요오드화물의 (PI)을 추가하고 DA의 실온에서 떠나0.5 시간 RK. PBS로 3 회 씻는다. 이 단계에서, PI는 transwell 적어도 1 개월 어두운 실온에서 보관 수 있습니다 얼룩. </li><li> 공촛점 현미경으로 정밀 이미징 방법을 사용할 수있는 리소스에 의존하고 있습니다. 비 침지 20 X 객관적이고 광학 섹션에게 matrigel 플러그의 바닥에서 모든 10-15 μm의를 캡처 이상의 대형 coverslip에 잔류 PBS의 소량 (어떤 거품이 존재하지 않습니다 확인)로 거꾸로 공촛점 현미경, 장소 Transwell을 사용합니다. 개별 광학 조각은 침략의 범위 (그림 3A)를 수치 또는 Volocity 적절한 소프트웨어 (그림 3B)를 사용하여 3 차원 물체에 빌드하는 데 사용할 수 있습니다. </li></ol> 4. 대표 결과 광학 조각의 Z 시리즈의 예제는 그림 3A에 표시됩니다. 이 경우, 전지가 Calcein 오전 물들일되었으며 필터에서 최대 침해 세포의 숫자는 거리와 감소 볼 수 있습니다. 에의 부량vasion는 Calcein의 비율은 각 간격에서 이상 자세한 고정 / 얼룩 방법을 사용하여 각 위치에서 PI 긍정적인 핵 계산에 의해 부정적인 픽셀 긍정 픽셀 오전 분석하여이 작업을 수행할 수 있습니다. Calcein 중 하나 장점은 얼룩 AM 세포 침공의 3 차원 reconstructions는 침략의 모드 (그림 3B)의 시각적 묘사를 제공 같은 Volocity와 같은 소프트웨어를 사용하여 조립하실 수 있습니다. 세포는 형광 단백질의 표현에 의해 표시하는 경우에는 다음 각 색상 세포의 위치는 어느쪽으로 (그림 3C) 또는 재구성 (그림 3D)를 통해 조각하여 볼, 3 차원 reconstructions에 시각하실 수 있습니다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/3525/3525fig1.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 1"> 그림 1. 역 침해 분석 설정에 관련된 단계 도식 다이어그램. A) Matrigel ECM 얼음이 해동. B) Matrigel은 PBS 두번 최종 농도가 언제 약물 치료를 포함하는와 1시 1분을 희석 수 있습니다. C) Transwell 삽입은 multiwell 접시에 배치하고, Matrigel은 각에 pipetted 수 있습니다. D) 셀 정지가 원하는 농도에했다. E) Matrigel이 설정되면, 접시는 거꾸로하여 제거, 세포는 Transwell 삽입의 아래쪽 필터에 도금입니다. F) 거꾸로 위치에서 multiwall 판은주의 깊게 세포 현탁액과 접촉하고, Transwell 삽입 위에 배치됩니다. G) 세포는 4 시간 동안 필터 준수 사용할 수 있습니다. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/3525/3525fig2.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 침공 반전 분석을위한 설계도 다이어그램의 지속. 세포가 붙어있다) 일단, 두 번 풀어 세포를 제거하는 혈청이없는 미디어로 각 Transwell을 찍어. B) 장소가 필요한 최종 잘 들어있는 미디어 플러스 트리 트먼트로 Transwell을 빨기도 했죠. C) 미디어 필요한 트리 트먼트 chemoattractant (예 : 10% 태아 소 혈청)이있는가 신중하게 Matrigel에 계층입니다. 엔트 "&gt; <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/3525/3525fig3.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 3"> 그림 3. 인버스 침해 분석 결과의 대표 이미지. A) Calcein 물들일 세포의 광학 섹션 공촛점 현미경으로 15 μm의 간격으로 촬영 Matrigel을 침해입니다. 측면에서 볼 공촛점 Z - 시리즈 이미지의 스택에서 세포 침공의 3 차원 재건의 B) 재건. 참조 10 Reprinted. 측면에서 볼 Matrigel을 침해 GFP 및 RFP - 라벨 세포 C) 3 차원 재건. GFP 및 RFP - 라벨 세포의 3 차원 재건을 통해 D) 광학 조각. 참조 10 Reprinted.

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</ol>

저자는 공개 아무것도 없어.

Matrigel의 침공 assays는 전통적으로 chemoattractant 유발 운동성와 세포외 기질 단백질의 레이어로하고 하단에있는 필터를 통해 배치 전지로 설정되었습니다. Invasiveness는 필터의 아래쪽에 계산 될 수 얼마나 많은 세포의 기능으로 득점했다. 위에서 설명한 &quot;반전&quot;침략 분석과 함께 약간의 차이가 거의가 있지만, 그들이 Matrigel 통해 이동하고 침입 세포를 시각화하여 확인할 수 침략의 프로세스에 대한 상당히 자세한 정보가 있습니다. 예를 들어, 이외에 선도적인 비교 집단 침공 (그림 3C 및 3D)에 세포를 따라이 방법을 사용하여 검사 다르게 표시된 세포를 시각화 수있는 것은 세포가 단백질 수준 또는 subcellular 배포 스테인드, permeabilized, 고정 후 몇 군데 수 있습니다 . 이 방법의 해결 능력은 형광의 기준 신호 강도에 의해 제한됩니다NT 단백질은 두 개 이상의 색상이 몇 군데로했다 특히, 세포 이미징 장치의 감도를 표현. 염료 침묵 (DQ) 콜라겐 (p...

<table border="1"><tbody><tr><th> 시약의 이름 </th><th> 회사 </th><th> 카탈로그 번호 </th></tr><tr><td> DMEM (Dulbecco의 변형 이글 배지) </td><td> GIBCO </td><td> 21,969 </td></tr><tr><td> 태아 소 혈청 </td><td> PAA </td><td> A15 - 101 </td></tr><tr><td> 페니실린의 스트렙토 마이신 </td><td> GIBCO </td><td> 15,140 </td></tr><tr><td> 200 MM L - 글루타민 (100x) </td><td> GIBCO </td><td> 25050-032 </td></tr><tr><td> Puromycin </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> P8833 </td></tr><tr><td> 0.05 % 트립신 EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) </td><td> GIBCO </td><td> 25,300 </td></tr><tr><td> Polybrene </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> AL - 118 </td></tr><tr><td> Lipofectamine 2,000 시약 </td><td> Invitrogen </td><td> 11668019 </td></tr><tr><td> 6.5mm Transwells, 8.0 μm의 기공 크기 </td><td> 코닝 </td><td> 3422 </td></tr><tr><td> 완료 Matrigel </td><td> BD Biosciences </td><td> 354,234 </td></tr> &lt;TR&gt; <td> Calcein AM </td><td> Invitrogen </td><td> C1430 </td></tr><tr><td> RNase </td><td> Qiagen </td><td> 19,101 </td></tr><tr><td> Propidium 요오드화물의 </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> P4864 </td></tr><tr><td> 공촛점 microcope </td><td> Leica </td><td> SP2MP </td></tr></tbody></table>

모델링 및 3 차원 이미징 단체 셀 침략

Modeling and Imaging 3-Dimensional Collective Cell Invasion

암 강한 악의의 정의 특징은 침략과 전이 1입니다. 일부 암 (E. g. glioma 2) 건강한 조직을 주변에 지방 침공에서 질환과 사망의 근본 원인입니다. 다른 암에 대한 (E. g. 유방, 폐, 등.) 그것이 종양 세포가 일차 종양 질량의 이동 말초 사이트를 식민지 궁극적으로 기관 고장에 기여하는, 전이의 과정입니다, 그건 결국 병적 상태에 이르게하고 사망률 3. 그것은 침략과 전이는 암 사망자 4의 90 %에 대한 책임 것으로 추정되었습니다. 그 결과, 개선 진단과 치료 5 목적에 대한 분자 프로세스와 침략과 전이의 중요한 단백질 중재자을 식별에 강렬한 관심이있다. 암 과학자에 대한 도전은 충분히의 생체내 상황과 유사한 침공 assays을 개발하는 것입니다정확한 질병 모델링 6 설정하려면 다음과 같이하십시오. 2 차원 세포 운동성의 assays은 침략의 유익에 대해서만 부분입니다 또한 중요한 요소이다 계정 세포외 기질 (ECM) 단백질 리모델링 고려하지 않습니다. 최근 연구는 종양 세포 침공에 대한 우리의 이해를 세련되고 각 세포는 길쭉한 또는 반올림 모드 7 이동할 수 밝혔다. 또한, 암 8 확산에 특히 상피 특성을 유지하는 것을 매우 차별화된 종양의 세포가 긴, 시트와 클러스터로 나눠야하는 공동 침략의 기여보다 감사를,,, 거기되었습니다. 우리는 집단 침략 10 후보 단백질의 공헌을 조사를위한 세련된 방법 9 현재. 특히, 다른 형광 단백질을 표현하는 세포 공학 별도의 수영장으로, 그것은 molecularly 활동과 protei을 해부하다 할 수 있습니다NS는 다음과 세포에 필요한 그 간의 주요 세포에 필요합니다. RNAi의 사용은 실험적으로 개별 셀 침공뿐 아니라 공동 침략의 다른 위치에 관련된 프로세스를 분해하는 분자 도구를 제공합니다. 이 절차에서는 찬란 - 레이블 세포의 혼합물은 이전 Matrigel ECM 단백질 가득 Transwell 삽입의 하단에 도금되어 다음 필터를 통하여 Matrigel에 &quot;이상&quot;을 침공 수있었습니다. 입체 표현으로, 공촛점 이미징에서 얻은 Z 시리즈 이미지 스택의 재건 위치를 선도하는 대 다음에 찬란 - 레이블 세포의 표현의 총칭 침해 가닥 및 분석의 시각화를위한 수 있습니다.

입체 세포외 매트릭스에 종양 세포 침공의 모델이 더 반영<em&gt; 생체내에</em2 차원의 운동성 assays보다&gt; 상황. 찬란 - 라벨 세포, 침략 모드와 세포를 선도 대 다음의 뚜렷한 공헌에 대한 자세한 정보 공촛점 이미지와 함께 매트릭스 침공 assays를 사용하는 것은 얻을 수 있습니다.

암 악성도의 결정적인 특징은 침습과 전이입니다 1. 일부 암(예: 신경교종 2)의 경우, 주변의 건강한 조직으로의 국소 침습이...

본 실험 시스템은 특정 단백질이 침습 과정에 기여하는 바를 규명하는 것을 목적으로 합니다. 우선 관심 있는 형광 단백질을 이용하여 세포에 레트로바이러스 형성물을 형질전환시키십시오. 또한 트랜스웰 인서트에 매트리젤 단백질의 3D 매트릭스를 형성하고, 적절한 희석 배율로 세포 현탁액을 준비하십시오.Matrigel 트랜스웰(transwell) 시스템을 사용하여 테스트 약물 또는 처리에 따른 화학 유인 물질로의 세포 이동 반응을 측정하고, 공초점 현미경을 통해 세포 침습을 시각화하고 분석하십시오. 최종적으로, 이 결과는 3차원 단백질 매트릭스로의 세포 침습 정도와 양상을 결정할 수 있습니다. 기존의 전통적인 Transwell 침습 분석과 같은 방법 대비 이 기술의 강점은 3차원 단백질 매트릭스로의 세포 침습에 대해 정량적 및 정성적 데이터를 모두 도출할 수 있다는 것입니다.제 공동 연구자인 Diane Creighton이 10% FBS가 함유된 DMEM에서 레트로바이러스 패키징 세포를 48시간 동안 배양하는 방법을 시연하겠습니다. 제조사의 지침에 따라 레트로바이러스 DNA를 세포에 형질전환합니다. 24시간 동안 배양한 후, 웰을 배지로 두 번 헹구고, 웰당 1.5 milliliters의 10% FBS-DMEM을 첨가한 뒤 48시간 동안 배양하여 패키징된 Retrovirus를 수집합니다.조직 배양 배지를 2 mL 마이크로 원심분리 튜브에 옮기고, 원심분리하여 세포를 침전시킨 후 상층액을 깨끗한 튜브에 수집합니다. 이 레트로바이러스 스톡을 -80 °C에서 보관하십시오. 이제 레트로바이러스로 형질전환할 세포의 경우, 하룻밤 동안 배양한 배지를 제거하고 polygreen이 첨가된 레트로바이러스 스톡 1 mL를 추가합니다.6시간의 배양 후, 웰에 10%F-B-S-D-M-E-M 2 mL를 첨가하고 플레이트를 37 °C 배양기에 넣습니다. 다음 날 배지를 보충하고, 24시간 후에 적절한 선택 배지를 첨가합니다. 세포가 합류(confluent)되면 세포를 수확하고, 비형질전환 세포를 대조군으로 하여 형광 기반의 세포 분리를 수행합니다. 비형질전환 세포보다 형광이 강한 세포를 수집하여 향후 사용을 위해 -80 °C에서 분주하여 냉동 보관합니다.이 방법은 시각화를 위해 형광 단백질의 발현에 의존하며, 개별 세포의 기여도에 대한 통찰력을 얻을 수 있게 합니다. Matrigel을 얼음 위에서 녹인 후, 차가운 PBS로 1:1 희석합니다. 이제 코팅되지 않은 transwell을 24웰 조직 배양 플레이트에 삽입하십시오.그런 다음 희석된 matri gel 100 µL를 웰에 조심스럽게 피펫팅하고 37 °C에서 응고시킵니다. 그동안 일반 배양액에 형광 표지된 세포 현탁액을 준비합니다. matri gel이 응고되면 트랜스웰을 뒤집고 필터의 출력 방향 하단면에 세포 현탁액 100 µL를 피펫팅합니다.24-웰 조직 배양 플레이트의 바닥면을 사용하여 각 세포 현탁액 방울에 접촉하도록 트랜스웰을 조심스럽게 덮습니다. 세포가 부착될 수 있도록 플레이트를 뒤집힌 상태로 4시간 동안 배양합니다. 이제 플레이트를 다시 바로 세우고, 각 트랜스웰을 1 mL의 무혈청 배지에 두 번 담가 세척합니다.그 다음, 약물이나 처리 시약이 포함된 세 번째 웰에 트랜스웰을 배치합니다. 응고된 matrigel PBS 혼합물 위의 트랜스웰에 화학 유인 물질이 포함된 배지 100 µL를 피펫으로 조심스럽게 넣습니다. Matrigel로 침습하는 비형광 세포를 이미지화하기 위해 37 °C, 5% CO₂ 조건에서 3~5일 동안 배양합니다.새 24웰 플레이트에 트랜스웰을 배치하고, 각 Matrigel 플러그 상단에 4 µM calcium AM 용액 1 mL를 피펫으로 분주하여 용액이 측면으로 흘러내려 상하단 모두 염색되도록 합니다. 5% CO₂ 습윤 분위기의 37 °C에서 1시간 동안 배양합니다. 그 다음, 공초점 현미경으로 이미지를 촬영합니다.이 첫 번째 라이프스타일 염색 방법은 침습 모드의 시각화를 가능하게 합니다. 각 트랜스웰을 새로운 24웰 플레이트로 옮기고, 4% paraform aldehyde와 0.2% triton X 100 1 mL를 덮은 후 실온에서 30분 동안 배양합니다. 1 mL의 PBS로 3회 세척한 후, 시각화를 위해 0.01 mg/mL 농도의 RNAs A를 30분 동안 처리하고 PBS로 2회 세척합니다.PBS로 희석한 Propidium iodide를 처리하고 암실 내 상온에서 30분 동안 방치합니다. PBS로 3회 세척합니다. 이 단계에서 Propidium iodide로 염색된 transwell은 암실 내 상온에서 최소 한 달 동안 보관할 수 있습니다.두 번째 세포 염색 방법은 고정이 필요하지만, 침습 정도를 더 빠르게 정량화할 수 있습니다. 소량의 잔류 PBS가 담긴 transwell을 대형 커버슬립 위에 올리고, 비침강 20배 대물렌즈가 장착된 도립 공초점 현미경을 사용하여 matrigel 플러그 바닥부터 10~15 micron 간격으로 광학 단면을 캡처합니다. 개별 광학 슬라이스를 사용하여 침습 범위를 정량화하십시오. 또한 velocity와 같은 적절한 소프트웨어를 사용하여 해당 광학 슬라이스 시리즈로부터 3차원 객체를 구축하십시오. 세포는 calcium am으로 염색되었습니다.예상대로, 필터 위로 침투하는 세포의 수는 거리와 함께 감소합니다. 이러한 침투는 정량화가 가능합니다. 세포 침투의 3차원 재구성을 통해 침투 방식에 대한 시각적 묘사를 제공할 수 있습니다.세포가 형광 단백질의 발현으로 표지된 경우, 이 측면 보기에서와 같이 각 색상 세포의 위치를 3차원 재구성 이미지로 시각화할 수 있습니다. 또한, 재구성된 이미지의 단면을 통해 분자적 메커니즘에 대한 통찰을 얻을 수 있습니다. 이 영상을 시청한 후에는 표준 방법으로는 얻을 수 없는 침습 과정에 대한 더 많은 정보를 얻기 위해 이 세포 침습 분석법을 사용하는 방법을 충분히 이해하게 될 것입니다.

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의학

침입형 유체의 흐름은 고체 종양에서 상승되며 종양 세포 침공을 조절하실 수 있습니다. 여기에서 우리는 매트릭스에 포함된 세포에 침입형 유체 흐름을 적용한 다음 세포 침입에 미치는 영향을 측정할 수있는 기법을 설명합니다. 이 기술은 쉽게 다른 시스템을 연구하는 데 적용할 수 있습니다.

종양 세포 침략에 중간 유체 흐름의 효과를 측정하는 세 가지 차원 세포 배양 모델

출처: Guyon, J., et al. 교모세포종에 대한 3D 스페로이드 모델. J. Vis. Exp. (2020)이 비디오는 종양 세포 침입의 3차원 스페로이드 모델의 생성을 보여줍니다. 스페로이드는 인간의 뇌종양 세포에서 형성되며 콜라겐 매트릭스에 내장되어 있습니다. 스페로이드 말초의 종양 세포는 침습적 표현형을 채택하여 프로테아제를 분비하여 콜라겐을 분해하고 전진하여 주변 기질을 침범합니다.

종양세포 침입의 3차원 스페로이드 모델 생성

이 문서는 찬란 추가 수정 및 3D 세포 배양의 라이브 영상 모두에 사용할 수 있습니다 콜라겐 레이블을하는 방법을 제시한다. 우리는 또한 3D 환경에서 배양 세포의 내생 세포 골격 단백질을 시각화하기 위해 최적화 된 프로토콜을 제공합니다.

3D로 침윤성 암 세포의 세포 골격 조직을 공개

이 문서는 유방암 세포의 침입을 정량화하는 3 차원 (3D) 분석의 사용에 대한 자세한 방법을 제공합니다. 특히, 우리는 세포가 침입 할 때 발생하는 멤브레인 무결성의 손실을 검사하는 등의 분석을 설정하는 데 필요한 절차, 정량화 및 데이터 분석뿐만 아니라 방법에 대해 설명합니다.

3 차원 (3D) 모델을 사용하여 유방암 세포 침윤의 정량화

이 방법은 스페로이드에서 주변 3D 매트릭스로의 암세포 침입을 평가합니다.  스페로이드는 행잉 드롭 배양 방법을 통해 생성된 다음 기저막 재료와 I형 콜라겐으로 구성된 매트릭스에 내장됩니다.  이후에 스페로이드 외부로의 침입이 모니터링됩니다.

암 세포 회전 타원체 분석은 3D 설정에 침략을 평가하기 위해

이 프로토콜 셀 셀 microenvironment를 유지 하면서 3 차원 설정의 마이그레이션 및 침입 기능을 계량 하는 데 사용할 수 있는 반전된 세로 침공 분석 결과를 설명 합니다. 이 분석 결과 희소 한 또는 민감한 세포에 적합 합니다.

위쪽으로 이동: 간단 하 고 유연한 생체 외에서 3 차원 침공 분석 실험 프로토콜

방광 암 침공을 관리 하는 프로세스는 바이오 마커 및 치료 개발을 위한 기회를 나타냅니다. 여기 우리는 종양 spheroids 시간 경과 화상 진 찰, confocal 현미경 검사 법의 3 차원 문화를 통합 하는 방광 암 침공 모델 제시. 이 기술은 침략 과정의 기능을 정의 하 고 치료제 심사에 대 한 유용 합니다.

침공을 공부 하 고 방광 암에서 치료제를 평가 하기 위한 3 차원 셀 문화 시스템

현재 프로토콜 암 세포 마이그레이션 및 실시간으로 단일 플랫폼에서 침입을 조사 하 고, 세포 이동성 및 형태학 연구를 쉽게 재현할 수 및 시간 효율적인 옵션을 제공 하는 통합된 방법을 설명 합니다.

자동된 라이브 셀 이미징 사용 하 여 간단한 마이그레이션/침공 워크플로

종양 미세 환경은 암 성장과 침략의 필수적인 부분입니다. 암의 진행을 모방 하기 위해 생물학적으로 관련 된 인간 매트릭스가 필요 합니다. 이 프로토콜은 인간 평활 근 종 기반 매트릭스를 적용 하 여 시험관 내 3 차원 세 포스 페 로이드 침입 검정에 대 한 개선을 도입 한다. 이 프로토콜은 또한 컴퓨터 기반 세포 침입 분석을 소개 합니다.

3 차원 세 포스 페 로이드 침입 분석에서 완전 한 인간 종양 기반 매트릭스

여기에 제시된 스페로이드 이미징 장치의 제조를 위한 프로토콜이 있습니다. 이 장치는 암 세포 스페로이드의 동적 또는 세로 형광 이미징을 가능하게합니다. 이 프로토콜은 또한 암세포 침입의 분석을 위한 간단한 화상 처리 절차를 제공합니다.

3D 스페로이드 모델에서 암세포 침입의 시간 해결 형광 화상 진찰 및 분석

침습은 암의 발병과 진행에 있어 중요한 생물학적 현상입니다. 이 과정은 비종양 세포와 종양 미세환경의 구성 요소에 의해 영향을 받습니다. 이 연구의 목적은 3차원(3D) 배양을 사용하여 종양 세포 침입을 in vitro 분석하는 대체 방법을 설명하는 것입니다.

3D 배양의 In vitro 세포 침입을 분석하기 위한 대안 전략

학습하세요 종양 세포의 3D 매트릭스 침윤 메커니즘을 Matrigel 트랜스웰 시스템과 공초점 현미경을 활용하여 연구하는 방법을. 이 기법은 정량적 및 정성적 데이터를 동시에 제공하여 암 진행 연구에 필수적인 도구입니다.

모델링 및 3 차원 이미징 단체 셀 침략

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