산만 Osteogenesis, 또는 임계 크기의 결함의 치유는 Intramembranous 골화을 평가하기위한 Rigidly 안정 골절 만들기

이 절차의 전반적인 목표는 안정화된 골절 치유, 주의 산만, 골형성 및 분절 갭 결손의 치유를 분석하는 데 사용할 수 있는 외부에 고정된 경골을 만드는 것입니다. 먼저, 멸균 곤충 핀을 경골의 근위 및 원위 부분에 삽입한 다음 고리를 멸균 곤충 핀에 고정하여 고정 장치의 고리를 배치하고 제자리에 고정합니다. 다음으로, 경골의 중간 골절에 골절 또는 절골술을 만듭니다 절차의 마지막 단계에서는 근위 및 원위 고리를 완전히 안정화하기 위해 세 번째 나사산 막대를 삽입합니다.

궁극적으로 골절 치유, 산만함, 골형성 및 뼈 생착의 메커니즘을 보여주는 결과를 X-ray 조직학 및 분자 분석을 통해 얻을 수 있습니다. 이 절차를 시연하는 것은 캘리포니아 대학교 샌프란시스코 샌프란시스코 종합 병원의 선임 연구원인 Dr.Diane과 Y Yuu, 박사후 연구원 Dr.Chelsea Baney가 맡을 것입니다. 골격 재생을 위한 정형외과 외상 연구소 실험실: 맞춤형으로 설계된 외부 고정 장치를 조립하는 것으로 시작하십시오.

고정 프레임은 3개의 스테인리스강 나사산 막대, 8개의 육각 너트 및 17개의 일치하는 볼트로 고정된 2개의 알루미늄 링으로 만들어집니다. 근위 링을 만들기 위해 파괴당 두 개의 알루미늄 링이 필요하며, 근위 링은 4개의 육각 너트와 일치하는 볼트를 적절한 구멍에 느슨하게 나사로 고정합니다. 원위 링을 완전히 조이지 않고 4 개의 너트와 볼트를 다시 조이려면 12시와 6시 방향에 위치한 구멍의 원위 링에 고정 장치를 고정시킬 두 개의 긴 나사산 막대를 놓고 2 개의 육각 너트로 부착하십시오.

원하는 연령의 생쥐를 케타민과 마이네의 복강 내 주사로 마취합니다. 그리고 발가락 꼬집음 테스트를 사용하여 완전한 마취를 확인합니다. 머리카락을 제거하고 방부제로 씻은 후 눈 윤활제를 바르고 나머지 절차를 위해 마우스를 가열 패드에 올려 놓습니다.

너트가 원위를 향하도록 하여 근위 링을 다리에 놓고 링을 무릎 관절 위로 움직입니다. 4개의 0.25mm 멸균 곤충 핀을 드릴에 부착하고 뼈를 뚫어 왼쪽 경골의 근위 및 원위 형이상학적 구조를 고정합니다. 핀을 경골의 장축에 수직이고 서로 90도로 향하게 하여 근위 핀과 원위 핀 사이에 최소 10mm를 남겨둡니다.

핀을 근위 링에 고정하고 경골을 알루미늄 링 내 중앙에 위치시킵니다. 두 번째 링을 원위 핀 아래에 배치합니다. 두 개의 막대를 근위 링에 고정한 다음 육각 너트를 사용하여 핀을 링에 고정합니다.

이전과 마찬가지로 적절한 장치로 3점 굽힘으로 횡방향 파괴를 만듭니다. 블록을 가로질러 경골의 우편 측면 표면을 놓습니다. 드롭 암을 따라 미리 결정된 높이로 무게를 올리고 경골의 전외측과 접촉하도록 무게를 떨어뜨립니다.

둔기 골절을 일으키려면 X-ray로 골절을 확인하십시오. 다음으로, 마지막 스테인레스 스틸 나사산 막대를 말단 끝에서 시작하여 링에 부착합니다. 막대를 삽입하고 너트를 말단 링에 끼워 막대를 고정합니다.

그런 다음 근위 링이 맨 위에 위치하도록 막대에 다른 너트를 끼웁니다. 두 개의 링이 동일한 거리에 있고 핀에 무리가 가지 않는지 확인하십시오. 세 번째 너트 투여로 근위 링을 막대에 고정합니다.

역마취에 aamaz all을 추가하고 진통제를 위해 부프레노르핀을 추가하고 동물이 반응하고 보행할 수 있을 때까지 동물을 모니터링합니다. 그런 다음 진통을 위해 부프레노르핀을 피하 주사하고 다시 4시간 후에 표준 산만 골형성을 위해 투여합니다. 이 모델을 사용하여 고정기를 경골에 놓고 골절을 일으키고 5일의 잠복기 동안 그대로 둡니다.

5일 후, 안정화 막대에서 너트를 돌려 주의를 산만하게 하는 골형성을 수행합니다. 7일 동안 매일 1/4 회전. 동물은 추가 진통제의 필요성에 대해 수술 후 면밀히 모니터링됩니다.

뼈 브리징은 10일까지 관찰되며, 완전한 통합은 산만함이 완료된 후 27일까지 관찰됩니다. 마취제를 투여하고 제모제로 털을 제거하고 방부제로 피부를 청소한 후 앞에서 설명한 대로 고정 장치를 적용합니다. 해부 현미경 아래에 마우스를 놓고 내측 경골을 시각화한 다음 메스에 숫자 10 칼날로 5-7mm 절개를 만듭니다.

경골의 중간 골관절을 노출시키기 위해 근육을 부드럽게 절제하고 분리합니다. 가위 끝을 사용하여 3mm 길이의 경골 부분을 천천히 잘라내고, 큰 기계적 힘으로 뼈가 옮겨지지 않도록 주의합니다. 그런 다음 집게로 남아 있는 뼈 조각을 제거합니다.

수술 부위에 뼈 조각이 있는지 검사한 후 경골의 무딘 끝 부분 주변의 근육을 교체합니다. 6.0 폴리 모노필라멘트 2-3회 봉합사로 절개 부위를 봉합한 후 3번째 봉합사를 삽입하여 외부 고정기를 안정화합니다. 앞서 살펴본 바와 같이, 역마취는 진통제를 투여하고 동물의 통증을 계속 모니터링합니다.

앞서 설명한 바와 같이, 적절하게 적용되었을 때, 외부 고정장치는 골절 후 촬영한 방사선 사진에서 볼 수 있듯이 폐쇄 경골 골절의 매우 견고한 안정성을 제공하며, 이 방법을 사용하여 안정화된 화살촉 골절에 의해 표시된 잘 정렬된 뼈 분절과 함께 이 방법을 사용하여 주로 원막 내 골화를 통해 치유되며, 안정화된 골절은 골절 부위에 새로운 뼈를 보여줍니다. 이와 대조적으로, 골절이 안정되지 않으면 골절 틈새에 큰 연골 굳은살이 형성되고, 이는 발병 후 연골내 골화 과정을 통해 뼈로 대체됩니다. 이 기술은 정형외과 분야의 연구자들이 생쥐의 안정적인 골절 치유 메커니즘을 탐구할 수 있는 길을 열었습니다.