Name: 다른 동물 모델에서 NADPH 산화 효소 활동의 Bioluminescence 영상 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-22T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 42 s
Description: 배우세요 NADPH 산화 효소 유래 활성산소종을 생체 내에서 실시간으로 모니터링하는 최소 침습적 생체영상 기법을. 세 가지 염증성 마우스 모델에서 ROS 동역학을 연구하여 염증 질환의 치료 전략 수립에 기여합니다.

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이 작품은 NIH RO1 AI079253 및 보훈학과로 운영되었습니다.

1. 동물 모델 <ol><li> 마우스 : p47 phox-/를 사용하여 - 마우스와 연령 및 성별 - 일치 C57BL6/DBA 마우스입니다. 기관 동물 케어 및 사용위원회의 실험에 대한 승인을 얻습니다. </li><li> 마취 : 마취를 유도하기 위해 지속적인 isoflurane 관리 시스템을 사용합니다. vaporizer 시스템 (VetEquip)는 (2-3 %) isoflurane으로 가득합니다. 쥐가 외부 자극에 대한 응답으로 호흡, 운동, 그리고 각막 반사를 관찰하여 완전히 anesthetized되어 있는지 확인. </li><li> 수술 절차 : 70 %의 에탄올과 수술 영역 (benchtop)을 씻어. 멸균 장갑과 깨끗한 수술 가운과 마스크를 착용하십시오. 머리를 클리핑하고 절개가 이루어집니다 영역에 70 %의 에탄올과 교류 betadine을 적용하여 마우스를 준비합니다. 멸균 표면에 수술을 수행하고 멸균 악기를 사용합니다. 모니터 마우스는 사후 operatively까지 깨어 자유롭게 이동. </li><li> Intratracheal zymosan 관리 <ol><li> 마취를 관리로 1.2에 설명되어 있습니다. </li><li> betadine과 70 %의 에탄올과 수술 영역 (목) 소독 및 수술 절개로 기관을 쉽게받을 수 있습니다. </li><li> 피어스 27 게이지 바늘로기도하고 멸균 PBS에 용해 0.5 μg / μl 솔루션을 (25g 마우스에 대한 총 판매량 50 μl)를 사용하여 1 μg / g의 용량에 zymosan (세인트 루이스, MO)를 주입. </li><li> 닫기 쥐 목 무균 조건 하에서 5-0 멸균 실크 봉합과 상처. </li><li> 4 시간, 24 시간 후 이미지. </li></ol></li><li> Cecal 결합과 주사 <ol><li> 1.2에 설명 된대로 마취를 관리 할 수​​ 있습니다. </li><li> 수술 영역 (복부)에 머리를 클립하고 betadine과 70 % 에탄올로 소독. </li><li> 중간 선 개복술을 수행하고이게 맹장을 식별합니다. </li><li> 4-0 실크 봉합사와 21 게이지 바늘 중 하나를 패스 결합으로 말초 찔린이게 맹장과 노출이게 맹장의 말초 50 %를 Ligate. </li><li> 4-0 멸균 실크 봉합과 절개를 닫습니다. </li><li> 4 시간 후 이미지와24 시간. </li></ol></li><li> 구강 탄소 tetrachloride (CCL 4) 관리 <ol><li> 1.2에 설명 된대로 마취를 관리 할 수​​ 있습니다. </li><li> 구두 gavage으로 옥수수 기름에 용해 CCL 네 (2 μg / g, 세인트 루이스, MO)를 관리 할 수 있습니다. CCl4 행정 절차는 IBC / EHS 정책에 따라 지정된 지역에서 수행해야합니다. </li><li> 4 시간, 24 시간 후 이미지. </li></ol></li></ol> 2. 발광 생물 이미지를 취득 <ol><li> 발광 모드로 설정 IVIS 200 (Xenogen 공사, 알라 메다, CA) 이미징 시스템을 초기화하고, 전하 결합 소자 (CCD) 잠글 온도 기다립니다. </li><li> 노출 시간, binning (중간) 및 F / 정지 (8) 설정을 선택합니다. </li><li> 정상적인 체온을 유지하기 위해 온수 무대에서 이미징 챔버에서 위로 향한 위치에 배치 마우스. 쥐가 IVIS 이미징 챔버에있는 동안 코 콘을 통해 1.2에 설명 된대로 마취를 관리 할 수​​ 있습니다. </li><li> L-012를 관리<html> (20 μg / g) 이미지에 대해 선택한 각 시점에서 역 궤도 분사를 통해 intravenously 멸균 PBS (10 μg / μl)에 용해. </li><li> L-012 주입 후 2 분에 시작 이미지를 캡처합니다. 우리는 일반적으로 40 초 노출을 사용합니다. </li></ol> 3. 관심 지역을 사용하여 데이터 분석 <ol><li> 생활 이미지 소프트웨어에게 v.4.2을 (Xenogen 공사, 알라 메다, CA)를 사용하여 데이터를 분석합니다. </li><li> 이미지를 열고 관심 툴의 지역 측정을 선택합니다. </li><li> 가슴 또는 / 및 마우스의 사진 이미지 위에 의사 색 디지털 이미지 (광자 검출을 대표하는) 오버레이 한 ​​후 복부 이상 관심 모양과 크기의 지역을 선택합니다. </li><li> 관심 지역에서 신호 강도 (광자 플럭스)를 정량화. </li></ol> 4. 통계 <ol><li> 개인 시간 지점에서 Bonferroni 사후 테스트를 양방향 ANOVA를 수행하는 통계 분석 소프트웨어 패키지를 사용합니다. </li></ol>tle &quot;&gt; 5. 대표 결과 Zymosan는 프로 염증성 효모 세포벽 제품 및 NADPH 산화 효소 3의 강력한 활성입니다. 우리는 이전에 해당 intratracheal zymosan는보다 강력한 neutrophilic 폐 염증과 p47 phox-/에서 프로 염증성 시토 킨 생산을 유도했다 - 마우스에게 1 wildtype에 비해. zymosan 도전 다음 마우스 - 여기, 우리의 목표는 wildtype와 p47 phox-/의 폐에 ROS 생성을 비교하는 것이 었습니다. 4 H 및 24 시간에서 마우스 - 4 시간에서 intratracheal zymosan 관리 한 후, 우리는 기준뿐만 아니라 p47 phox-/에 비해 wildtype의 광자 방출의 증가에 비해 wildtype 쥐 가슴 광자 방출에 상당한 증가를 관찰했다. 반면, p47 phox-/에서 bioluminescence 신호 - 마우스 zymosan 처리 (Fig.1 AB) 이후 4 시간에서 기본 수준에서 유지. 따라서, NADPH 산화 효소는 B에 나타납니다전자 zy​​mosan 관리에 따라 폐의 ROS 생성의 주요 소스. 다음, 우리는 CLP 유발 패혈증 모델에서 ROS 생산도 평가합니다. 패혈증은 급성 폐 손상 (ALI)과 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS) 4, 5 등의 최종 장기 손상과 관련된 생명을 위협하는 증후군이다. ROS로 인한 부상은 패혈증 유발 다중 장기 부전을 유도하는 중요한 요소로 간주되었습니다. 우리는 ROS가 크게 가슴 (4 시간) 이상 및 기준에 비해 wildtype 쥐 CLP에 따라 복부 (24 시간) 이상 증가 된 것으로 나타났습니다. 그러나, p47 phox-/에서 ROS 수준 - 마우스는 시간 포인트 (Fig.2 AC) 모두에서 기본 수준과 비슷했다. 이러한 결과는 CLP 유발 패혈증 마우스 모델에서 ROS 생성이 산화 효소에 의존 NADPH입니다 보여줍니다. 마지막으로, 우리는 CCL 4 유발 간 손상 모드에서 ROS 생산을 감지하는 발광 생물 이미징을 사용하여리터. CCL 4 간세포 괴사가 발생하고, 급성 간 손상과 간 섬유증 6을 모두 모델링하는 데 사용되었습니다. CCL 4 행정에 따라 4 H의 마우스 - 염증과 부상 이전에 설명 모델에 대조적으로, 우리는 복부에서 ROS 생산 (35 %) p47 phox-/에서 기준이 지남에 따라 증가하는 겸손 것으로 나타났습니다. 마우스 (Fig.3 AB) - 그러나, 4 - 유도 ROS 생성 CCL의 크기는 p47 phox-/에서보다 wildtype 쥐 훨씬 더했습니다. 이러한 데이터는 모두 p47 phox 함유 NADPH 산화 효소에 의존하고 독립적 인 ROS 생성은 급성 CCL 4 유발 간 손상에서 발생하는 것이 좋습니다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/3925/3925fig1.jpg" /> zymosan 치료 후 폐의 그림 1. ROS 생산. A) 대표 bioluminescenROS 생산의 CE 이미지. 마우스 및 복부 발광이 zymosan 치료에 의해 ​​변경되지 - 가슴뿐만 아니라, 발광는 wildtype와 p47 phox-/ 모두의 복부 이상 감지 값입니다. wildtype 및 p47 phox-/의 가슴에서 B) 광자 카운트 - zymosan의 (IT) intratracheal 단일 분사 한 후 마우스. Bioluminescence 이미징은 기본, 4 H,, 24 H에서 수행되었다. 가슴 관심 지역의 발광은 지정된 의사 색 척도를 이용하여 확인되었다. 결과는 의미로 제공됩니다 ± SE, N = 6-9 그룹 당, * = P &lt;0.05. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3925/3925fig1large.jpg" target="_blank">큰 그림을 보시려면 여기를 클릭하세요</a> . <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/3925/3925fig2.jpg" /> 그림 2. ROS 감지는 다음 CLP. ROS 생산, B의 A) 대표 bioluminescence 이미징) 광자 가슴에서 카운트 wildtype와 p47 phox-/의 복부에서 C) 광자 카운트 - 기준에서 마우스, 4 시간, 그리고 CLP 후 24 시간. 결과는 의미로 제공됩니다 ± SE, N = 그룹 당 4-5, * = P &lt;0.05. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3925/3925fig2large.jpg" target="_blank">큰 그림을 보시려면 여기를 클릭하세요</a> . <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/3925/3925fig3.jpg" /> CCL 후 복부 4 유발 간 손상의 그림 3. ROS 생산. 구두 CCL 네 치료 후 기준선에서 마우스, 4 시간, 24 시간 - ROS 생산 및 wildtype와 p47 phox-/의 복부에서 B) 광자 카운트의 A) 대표 bioluminescence 이미징. . N = 4-5 당 그룹, * = P &lt;0.05, 결과는 의미 ± SE로 표시됩니다 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3925/3925fig3large.jpg" target="_blank">보시려면 여기를 클릭하세요 큰 그림</a> </&gt;.

<ol><li>Segal, B., Han, W., Bushey, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NADPH+oxidase+limits+innate+immune+response+in+the+lungs+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">NADPH oxidase limits innate immune response in the lungs in mice.</a> PLoS ONE. 5, e9631(2010).</li>
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<li>Pollock, J. D., Williams, D. A., Gifford, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+X-linked+chronic+granulomatous+disease%2C+an+inherited+defect+in+phagocyte+superoxide+production%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Genet%22%5BJournal%5D)">Mouse model of X-linked chronic granulomatous disease, an inherited defect in phagocyte superoxide production.</a> Nat. Genet. 9, 202-209 (1995).</li>
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<li>Kielland, A., Blom, T., Nandakumar, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+reactive+oxygen+and+nitrogen+species+in+inflammation+using+the+luminescent+probe+L-012%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radic.+Biol.+Med%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of reactive oxygen and nitrogen species in inflammation using the luminescent probe L-012.</a> Free Radic. Biol. Med. 47, 760-766 (2009).</li>
</ol>

관심 없음 충돌이 선언 없습니다.

생활 동물 반응성 산소 종의 &quot;실시간&quot;측정 (ROS)는 형광등과 chemiluminescent 프로브를 사용하여 달성 될 수있다. 형광 프로브가 약 신호 대 잡음 비율 12 문제에서 고통 있지만, 설명 된 이미징 기술은 루미놀 기반의 기판 L-012와 ROS의 화학 반응에 따라 발광을 검출에 대한 더 많은 문자를 구분합니다. 모든 발광 생물 이미징 기술과 마찬가지로,이 방법론은 기관과 조직에 의해 파장에 의존 광 흡수와 산란에 의해 제한됩니다. 마우스 -이 실험은 wildtype와 p47 phox-/에서 ROS의 측정을 위해 적절한 실험 조건을 확립에 초점을 맞추고 있었다. 이러한 유전자 변형 마우스의 사용은 ROS는 다른 경로에 의해 생성 된 ROS에서 p47 phox 함유 NADPH 산화 효소에 의해 생성 된 차별화 할 수있게. ...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 코멘트 </td></tr><tr><td> L-012 </td><td> 와코 화학 물질 USA 주식회사 </td><td> 120-04891 </td><td></td></tr><tr><td> Zymosan </td><td> 시그마, 세인트 루이스, MO </td><td> Z4250 </td><td></td></tr><tr><td> 탄소 tetrachloride </td><td> 시그마, 세인트 루이스, MO </td><td> 289116 </td><td></td></tr></tbody></table>

다른 동물 모델에서 nadph 산화 효소 활동의 bioluminescence 영상

Bioluminescence Imaging of NADPH Oxidase Activity in Different Animal Models

NADPH 산화 효소는 항균 및 항 곰팡이 호스트 방어를 mediates 중요한 효소이다. 항균 호스트 방어에서의 역할뿐만 아니라, NADPH 산화 효소는 염증 반응 1 변조 중요한 신호 기능이 있습니다. 따라서, NADPH 산화 효소 파생 ROS 생성의 &quot;실시간&quot;동역학에 측정 할 수있는 방법의 개발은 방위, 염증, 그리고 부상을 개최 할 관련 메커니즘을 이해하는 중요한 연구 도구가 될 것으로 예상된다. 만성 granulomatous 질환 (CGD)는 심각한 감염과 과도한 염증을 특징으로 NADPH 산화 효소의 상속 장애입니다. 식세포 NADPH 산화 효소의 활성화는 cytosolic subunits (p47 phox, p67 phox, 그리고 p40 phox)과 막에 바인딩 flavocytochrome (gp91 phox와 P22 phox heterodimer로 구성)에 RAC의 translocation이 필요합니다. 손실CGD에서 이러한 NADPH 산화 효소 구성 요소 결과의의 기능 변이. CGD 환자와 마찬가지로, gp91 phox - 결함 마우스와 p47 phox - 결함 마우스에 결함이 식세포 NADPH 산화 효소 활동 및 장애인 호스트 방어 13, 14가 있습니다. 위에 설명 된 NADPH 산화 효소의 구성 요소가 포함 phagocytes,뿐만 아니라 다른 세포 유형의 다양한 NADPH 산화 효소의 다른 isoforms을 표현한다. 여기, 우리는 생활 마우스에서 ROS 생산을 수량화하고 염증과 부상의 모델에서 ROS 생성에 NADPH 산화 효소의 노력이 윤곽을 그리다 할 수있는 방법을 설명합니다. 이 방법은 전하 결합 소자 (CCD)에 의해 기록되어 발광을 방출하기 위해 L-012 (루미놀의 아날로그)와 반응 ROS에 기반을두고 있습니다. L-012 프로브의 원래 설명에, L-012에 따라 달라 chemiluminescence은 완전히이 반응에서 검색된 메인 ROS는 슈퍼이라고 표시, 초과 산화물의 dismutase에 의해 폐지되었다산화물 음이온 15. 후속 연구는 L-012은 반응성 질소 종 16, 17 등 다른 자유 래디칼을 감지 할 수 것으로 나타났습니다. Kielland 외. 17 phorbol myristate 아세테이트, NADPH 산화 효소의 강력한 활성,의 주제 응용 프로그램이 발광 프로브 L-012를 사용하여 마우스에서 발견 할 수 산화 효소에 의존 ROS 생성을 NADPH는 생각이 들어서 보여 주었다. 이 모델에서, 그들은 L-012-의존 발광는 p47 phox - 결핍 생쥐에서 폐지 된 것으로 나타났다. 우리는 wildtype 마우스와 NADPH 산화 효소 - 결함 p47 phox-/에서 ROS 생성 비교 - 다음과 같은 세 가지 모델의 생쥐 2 : zymosan, NADPH 산화 효소를 활성화 할 수 있습니다 벽 파생 제품 프로 염증 곰팡이 세포의 1) intratracheal 관리, 2) cecal 결합과 주사 (CLP), 보조 급성 폐 염증과 부상으로 간 복부 패혈증의 모델, 그리고 3) 구두 탄소 tetrachloride에게(CCL 4) ROS에 의존 간 부상의 모델입니다. 이 모델은 특히 각각, 비 전염성 염증, polymicrobial 패혈증 및 독소 유발 장기 부상의 맥락에서 NADPH 산화 효소에 의존 ROS 생성을 평가하는 선정되었다. p47에 wildtype 마우스에 bioluminescence을 비교 phox-/ - 마우스 우리는이 모델의 발광 생물 신호에 p47 phox 함유 NADPH 산화 효소에 의해 생성 된 ROS의 특정 공헌을 윤곽을 그리다 수 있습니다. p47에 비해 wildtype 쥐 증가 ROS 수준을 보여 Bioluminescence 이미징 결과는 phox-/ - 마우스는 NADPH 산화 효소는 염증 자극에 대한 응답으로 ROS 생성의 주요 원천입니다 지적했다. 이 방법은 생체 내 염증 동안 ROS 생성의 &quot;실시간&quot;모니터링을위한 최소한 침해 접근 방식을 제공합니다.

NADPH 산화 효소가 phagocytes에서 반응성 산소 종의 주요 소스 (ROS)입니다. 때문에 ROS의 임시 자연의, 그것은 생활 동물의 ROS 수준을 측정하고 모니터링하기가 어렵습니다. 생활 쥐 ROS의 일련 정량화하기위한 최소한 침입 방법 설명되어 있습니다.

다른 동물 모델에서 NADPH 산화 효소 활동의 Bioluminescence 영상

NADPH 산화효소는 항균 및 항진균 숙주 방어를 매개하는 핵심 효소입니다. 항균 숙주 방어에서의 역할 외에도, NADPH...

이 실험 절차의 전반적인 목적은 세 가지 서로 다른 염증성 마우스 모델에서 N-A-D-P-H oxidase 유래 활성 산소종(reactive oxygen species) 또는 ROS 생성을 실시간으로 모니터링하기 위한 최소 침습적 방법을 제공하는 것입니다. 첫 번째 모델은 기관 내 Xan 투여로, 전신 마취된 마우스의 기관에 전염증 분자인 Xan을 주입합니다. Xan은 N-A-D-P-H oxidase를 활성화할 수 있는 진균 세포벽 유래 생성물입니다.두 번째 모델은 결찰 및 천공 또는 CLP 모델입니다. 이 모델에서는 마우스의 복부를 절개하고 실크 봉합사로 맹장을 결찰한 후, 바늘로 천공하여 복강 내 패혈증과 그에 따른 2차성 급성 폐 염증 및 손상을 유도합니다. 세 번째 모델은 경구 투여를 통한 사염화탄소 투여 모델입니다.사염화탄소는 간세포 괴사를 유발하며, 급성 간 손상과 간 섬유화 모두를 모델링하는 데 사용될 수 있습니다. 활성산소종(ROS) 생성을 평가하기 위해 모델 마우스를 대상으로 생물발광 이미징을 수행합니다. 결과 데이터는 염증성 자극에 반응하여 NADPH 산화효소가 ROS 생성의 주요 원인임을 나타냅니다.이 기법이 Florence probe와 같은 기존 방법보다 갖는 주요 장점은, 체내 염증 발생 중 RS 생성을 실시간으로 모니터링할 수 있는 최소 침습적 접근 방식을 제공한다는 점입니다. 이 방법은 폐 염증 및 손상에서 RS의 역할과 같이, 숙주 방어 염증 및 손상에 관한 핵심 질문에 답하는 데 도움을 줄 수 있습니다. 저희는 숙주 방어에서 활성 산소종의 역할을 연구하기 시작했을 때 이 방법에 대한 아이디어를 처음 얻었으며, 본 영상에서는 ROS 생성이 나타나는 세 가지 동물 모델 모두에 대해 설명합니다.P 47 Fox 결핍 마우스와 연령 및 성별이 일치하는 C 57 BL six DBA 마우스를 사용하십시오. 기관 내 xin 투여를 위해 기관 동물 관리 및 사용 위원회로부터 실험 승인을 받으십시오. 수술 플랫폼을 70% ethanol로 멸균하고 멸균 패드로 덮으십시오.수술 절차는 깨끗한 수술 가운, 장갑, 마스크를 착용하고 마취용 멸균 기구를 사용하여 수행해야 합니다. 지속적 isof fluorine 투여 시스템의 기화기에 2~3% isof fluorine을 채우고 전원을 켭니다. 그 후 2~3분 뒤에 마우스를 마취 챔버에 넣고, 발가락 꼬집기(toe pinch)를 시행하며 호흡과 움직임을 관찰하

bioluminescence-imaging-nadph-oxidase-activity-different-animal

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

규아 샤, 중국어 번체 치료 피부 스크레이핑은 피하 microvascular 혈액 넘쳐 흐름을 발생합니다. 우리의 bioluminescence 이미징의 프로토콜보고 HO - 1...

규아 샤 프로 시저에 헴 Oxygenase - 1 Upregulation의 Bioluminescence 이미징

여기 우리는 그들의 성장과 전이 동안 전이성 유방암 세포에 표현 반딧불과 renilla 루시 페라 제 효소 모두의 발광 생물 반응을 구축 시각화 및 정량화 할 수있는 방법을...

생체 듀얼 기판 발광 생물 이미징에

발광 생물 세균 이미징<em&gt; 생체 내</em

출처: de Vries, C. R. 외, 만성 Pseudomonas aeruginosa 상처 감염의 지연 접종 모델. J. Vis. 경험 (2020).이 영상은 생체 마우스 모델에서 박테리아 감염 진행을 모니터링하는 생물발광 영상 기법을 시연합니다. luxABCDE 리포터 시스템으로 설계된 병원성 박테리아는 감염 부위에서 빛을 방출하여 대사적으로 활발한 박테리아를 시각화할 수 있게 합니다. 쥐를 시간에 따라 영상화함으로써 연구자들은 비침습적으로 감염 역학을 추적하고 생물발광 신호 강도를 정량화할 수 있습니다.

쥐 박테리아 감염의 생물발광 영상

출처: Valentine, M. E. 외, Pseudomonas aeruginosa 에서 인프레임 유전자 결실 돌연변이 생성과 감염 단순 마우스 모델에서의 병원성 감감 검사. J. Vis. Exp. (2020)이 영상은 생체 쥐 모델에서 박테리아 감염을 모니터링하기 위해 생물발광 기반 영상 기법을 시연합니다. 순차적 생물발광 및 X선 영상은 숙주 전역에 퍼진 감염을 실시간으로 시각화하고 해부학적 위치를 파악할 수 있게 합니다.

생물발광을 이용한 쥐 모델에서 박테리아 감염의 실시간 영상

출처: Weber, R. Z., et al., 마우스 뇌에서 인간 신경 전구 세포의 뇌내 이식 및 생체 내 생물 발광 추적. J. Vis. 경험. (2022년)이 비디오는 마우스 뇌에 주입된 유전자 변형 인간 신경 전구 세포의 생체 내 생물 발광 이미징 방법을 보여줍니다. 이 과정에는 루시페린 주입, 이미징 준비 및 주사 부위에 이식된 세포의 생물 발광 신호 검출이 포함됩니다.

마우스 뇌에서 인간 신경 전구 세포의 생체 내 생물 발광 이미징

우리는 염증 단계를 구별하기위한 비 침습 이미징 방법을 설명합니다. 루미놀의 전신 배달 호중구의 MPO 활동에 의존 급성 염증의 영역을 보여준다. 대조적으로, lucigenin의 주입은 대 식세포에서 Phox 활동에 의존 만성 염증으로 시각화 할 수 있습니다.

생체 내 이미징 방법에 급성 및 만성 염증을 구별하는

모델 유기체인 Caenorhabditis elegans에서 미토콘드리아 억제제의 효과를 생체 내에서 검출하고 잠재적인 강화 화합물을 식별하기 위한 프로토콜이 설명되어 있습니다. 이 프로토콜은 미토콘드리아 기능을 조절하는 화합물에 대한 약물 라이브러리를 스크리닝하는 데 사용할 수 있습니다.

Screenable<em&gt; 생체</em&gt; 형질 전환 발광 생물을 사용 미토콘드리아 변조기에 대한 분석<em&gt; 예쁜 꼬마 선충</em

여기서 우리는 발광 생물 기자를 사용하는 방법을 -imaging 소설 칼슘 2+ 제시한다. 이 방법은 칼슘 결합과 광 자극에 대한 필요성을 제거, 발광 구조물의 융합 GFP-쿼린을 이용한다. 중요한 것은이 방법은 깊은 뇌 구조와 높은 시간 해상도로 긴 연속 촬영, 접근을 허용한다.

발광 생물 칼슘 표시 GFP - 쿼린을 기반으로 생체 기능성 뇌 영상의 접근 방식

신경 줄기/전구 세포는 세포 이벤트의 다른 결과로 이끌어 내는 노치 신호 분대의 각종 표현 역학을 전시합니다. 이러한 동적 발현은 유전자 발현의 급격한 변화를 시각화할 수 있는 매우 민감한 생물 발광 이미징 시스템을 사용하여 정적 분석이 아닌 실시간 모니터링을 통해 밝혀질 수 있습니다.

뮤린 신경 발생 시 노치 신호 역학의 실시간 생물 발광 이미징

생체발광-루시퍼라제 효소에 의해 방출되는 광은 소분자 기질인 루시페린-광감각 단백질을 활성화시키기 위해 이용될 수 있고, 이로써 광 자극에 또 다른 차원을 추가하고 시간적 및 공간적 스케일에 걸쳐 세포에서 다수의 광-매개 기능의 조작을 가능하게 한다.

생체 발광 광유전학 2.0 : 생체 발광을 활용하여 체외 및 생체 내에서 광감각 단백질을 활성화 합니다.

배우세요 NADPH 산화 효소 유래 활성산소종을 생체 내에서 실시간으로 모니터링하는 최소 침습적 생체영상 기법을. 세 가지 염증성 마우스 모델에서 ROS 동역학을 연구하여 염증 질환의 치료 전략 수립에 기여합니다.

다른 동물 모델에서 NADPH 산화 효소 활동의 Bioluminescence 영상

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