Name: 루게릭병에 대한 마우스 모델 (ALS)의 임상 시험 및 척수 제거 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 35 s
Description: 배우세요 SOD1 G93A 마우스 모델을 이용한 루게릭병(ALS) 임상 시험 및 척수 제거 방법을. 회전봉 테스트와 매달림 테스트로 운동 기능을 평가하고 면역조직화학 분석을 위한 척수 절제술을 익히세요.

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아주 대학교 의과 Göttingen의 Forschungsförderungsprogramm로부터 보조금 지원을 받았습니다. PL과 MB가 브레인 (CMPB), Göttingen의 분자 생리학을위한 DFG 연구 센터에 의해 지원되었다. 저자는 오디오 및 비디오 편집에 대한 도움말 videography 및 Birgit Liebau와 도움 닥터 라스 Tatenhorst 감사드립니다.

동물 잭슨 연구실 (# 002726) 1에서 구입했다. 그들은 임상 점수와 모터 기능 (rotarod 시험)과 근력 (선 검사를 교수형)의 테스트를 받게됩니다. 이 모든 테스트 및 동물 나중에 살해 척수를 준비하기 위하여는 동물 실험의 적절한 행위에 대해 현지 가이드와 매우 가까이에 따라서 수행되었습니다. 1. 임상 점수 이외에도 체중 마우스에 대한 평가에서는 다음 4 포인트 채점 방식 2 모터 적자의 흔적을 검사하고 있습니다 : 4 점 : 정상 (모터 기능 장애의 흔적) 3 점 : 꼬리로 정지했을 때 뒷다리 사지 떨림이 분명 있습니다 2 점 : 걸음걸이의 이상이 흐릅니다 1 포인트 : 최소 하나의 뒷다리로 드래그 0 점 : 대칭마비 자체가 오른쪽으로 무능력 또는 최대 체중의 20 %의 손실,이 경우 동물이 즉시 euthanized하고 실험이 종료된 2. 운동 기능의 테스트 및 근력 철사를 교수형에 처하는 이번 테스트는 근력 3, 4를 평가하는 데 사용됩니다. 모든 동물은 적어도 하루나 이틀 rotarod 테스트 후이 테스트를 수행합니다. 각 마우스가 0.8 cm의 간격으로 맞춤 와이어 뚜껑에 위치하고 조심스럽게 뒤집어졌다되며, 지푸라기 위에 60cm가 바닥을 커버. 적어도 180의 세 가지 연속 번 훈련하면 빠질 수있는 대기 시간이 측정됩니다. 각 마우스는 180 s의 최대 및 긴 기간이 녹화되는 동안 거꾸로 뚜껑을 보관하는 방법은 세 시도까지 주어집니다. Rotarod 테스트 3, 4 학습을 측정하는 데 사용되었다. 좋은 성능 sensorimotor 조정의 높은 수준을 필요로합니다. 기계는 시험 동물에 대한 distractive 자극을 피하기 위해 조용하고 비 교란 환경에 배치해야합니다. 그것은 다섯 쥐를위한 컴퓨터 제어 모터 구동 회전 스핀들 다섯 골목길로 구성되어 있습니다. 생쥐의 폭포는 하단에있는 플라스틱 접시에 압력에 의해 자동으로 감지됩니다. 15 RPM 짐승이 회전 막대에 남아있을 수있는 시간을 일정한 속도로 적어도 180의 세 가지 연속 시간에 대한 교육이 측정되면. 각 동물은 전도가 기록됩니다없이 3 시련과 긴 대기 시간을 거쳐. 모터 조정에 큰 차이의 대부분이 기간에 감지되기​​ 때문에 180 s의 시간은 컷 - 오프 시간으로 선택됩니다. 3. 척수 준비 <ol class="lalpha"><li> 동물 지방 지침에 따라 CO 2 insufflation에 의해 살해되는 즉시 4 % paraformaldehyde 용액 다음 PBS 용액으로 transcardially perfused있다. </li><li> 희생 마우스의 척수를 준비하기 위해서는 마우스의 뒷면을 폭로하기 위해 동물들은 작업 테이블에 배치되고 사지가 측면에 고정되어 있습니다. </li><li> 70 % 에탄올 용액과 짧은 세차는 절개의 사이트를 청소하고 헤어 코트를 flattens. </li><li> 그러면 피부가 중간 라인에 날카로운 메스로 베인있다. 피부가 양쪽으로 뻗어있다 절단 촉진하기 위해서. 다리 근육이 준비되어야한다면, 그들의 피부도 베인되어야한다. </li><li> 피부 절개가 완료되면, 그것은 신체의 기본 천박한 근막을 노출하기위한 족집게 한 켤레로 떨어지게된다. </li><li> 목과 nuchal 인대의 근육은 CA를 제거해야하고 있습니다refully 준비했습니다. 깊이 및 장애 척수 절개하지 않도록주의하십시오. 어깨 근육은 또한 더 나은 척추 칼럼을 폭로하기 위해 제거할 수 있습니다. </li><li> 그런 다음 paravertebral 근육은 전체 척추 칼럼에서 제거됩니다. </li><li> 척추 열의 여러 laminectomies가 수행되어야 할 여는 위해서. 하나는 atlanto - 후두 관절의 사이트에서 상부 두개 부분부터 시작합니다. </li><li> 그것은 상단이 사지의 고정을 제거하고 첫 번째 척추의 laminectomy를 수행할 수 있도록 더 목을 overstretch하는 것이 가장 쉽습니다. 이러한 노출된 자궁 경부 척수를 건드리지 않고 끌려나됩니다. </li><li> 더 많은 척추 먼저 직각 가위로 양쪽에서 척추 아치를 끊어 버렸네 후 지느러미 프로세스에 당기에 의해 제거됩니다. 척추의 나머지 측면 부분 척수 이후 완전한 제거를 촉진하기 위하여 제거되어야한다. </li><li> 요추 spina의 해부 랜드마크내 코드는 또한 자궁 경부 척수에 존재 부풀어 오름이다. </li><li> 전체 척수의 laminectomy을 완료하는 것이, 당신은 또한 복부 뿌리를 가로로 쪼개다과 meninges의 경질의 mater에서 척수를 풀어 있는지 확인합니다. </li><li> 그러면 경추 척수는 cranially 끝내 척수를 제거하기 시작합니다. </li><li> 마지막으로 척수도 완전히 공개하기 말초 cauda equina-에서 절단한다. </li><li> 궁극적으로, 척수는 하룻밤 만에 postfixating 솔루션 (예 : 4 % paraformaldehyde)에 위치하고 있으며 추가로 처리할 수 있습니다. 우리는 보통 immunohistological 분석을 위해 준비하는 척수를 cryosection. </li></ol> 4. 대표 결과 척수 준비의 기술이 비디오 기사의 초점을 나타냅니다. 그것은 나중에 조직 sectioning 및 궁극적으로 spina의 immunohistological 분석을 위해 필수적인 전제 조건이다내가 코드 섹션. 최종 결과의 예를 들어, wildtype의 마우스 요추 척수 (wt)의 앞부분은 호른 지역과 잔디 G93A transgene (TG)의 immunohistochemical 검사 결과는 마우스가 시연된다. 모터 뉴런은 기본 백신 채팅 항체와 이차 항체 Cy3와 후속 형광 라벨로 확인할 수 있습니다. 또한, DAPI (4,6-diamidino-2-phenylindole)과 핵 반대 얼룩은 (그림 1) 수행되었습니다. <img src="/files/ftp_upload/3936/3936fig1.jpg" alt="그림 1" /> 그림 1. 안티 채팅 항체 (적색)과 wildtype (wt)의 마우스 요추 척수 앞부분 호른 (왼쪽)과의 DAPI (파란색)에 의한 세포의 핵 반대 얼룩과 motoneurons의 면역을 시각화 형광등 photomicrographs 잔디 G93A 형질 전환 (TG) (오른쪽) 1백30일의 나이에 마우스. 스케일 바 : 40 μm의. 의 immunohistochemical 분석으로잔디 G93A 마우스는 본 문서의 주 범위 아닌 이러한 유전자 변형 생쥐가 특성화되어있는 원래의 게시 및 추가 참고 1, 5, 6에서 치료 접근법을 공부 더 최근의 것들을 참조하시기 바랍니다. 치료 효과는 명확하게 정의된 immunohistological 수준에 차별한다면 양적 평가 알고리즘 stereological 소프트웨어 (예를 들어 7 참조)에서 지원 적용되어야합니다.

<ol><li>Gurney, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+neuron+degeneration+in+mice+that+express+a+human+Cu%2C+Zn+superoxide+dismutase+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu, Zn superoxide dismutase mutation.</a> Science. 264 (5166), 1772-1775 (1994).</li>
<li>Weydt, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+disease+onset+and+progression+in+the+SOD1+mouse+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Assessing disease onset and progression in the SOD1 mouse model of ALS.</a> Neuroreport. 14 (7), 1051-1054 (2003).</li>
<li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+phenotyping+strategies+for+mutant+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Behavioral phenotyping strategies for mutant mice.</a> Neuron. 57 (6), 809-818 (2008).</li>
<li>Miana-Mena, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+methods+to+characterize+the+G93A+mouse+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Amyotroph.+Lateral+Scler.+Other+Motor+Neuron+Disord%22%5BJournal%5D)">Optimal methods to characterize the G93A mouse model of ALS.</a> Amyotroph. Lateral Scler. Other Motor Neuron Disord. 6 (1), 55-62 (2005).</li>
<li>Zhong, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activated+protein+C+therapy+slows+ALS-like+disease+in+mice+by+transcriptionally+inhibiting+SOD1+in+motor+neurons+and+microglia+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Activated protein C therapy slows ALS-like disease in mice by transcriptionally inhibiting SOD1 in motor neurons and microglia cells.</a> J. Clin. Invest. 119 (11), 3437-3449 (2009).</li>
<li>Pitzer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Granulocyte-colony+stimulating+factor+improves+outcome+in+a+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Granulocyte-colony stimulating factor improves outcome in a mouse model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Brain. 131 (Pt. 12), 3335-3347 (2008).</li>
<li>Gowing, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ablation+of+proliferating+microglia+does+not+affect+motor+neuron+degeneration+in+amyotrophic+lateral+sclerosis+caused+by+mutant+superoxide+dismutase%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Ablation of proliferating microglia does not affect motor neuron degeneration in amyotrophic lateral sclerosis caused by mutant superoxide dismutase.</a> J. Neurosci. 28 (41), 10234-10244 (2008).</li>
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<li>Turner, B. J., Talbot, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenics%2C+toxicity+and+therapeutics+in+rodent+models+of+mutant+SOD1-mediated+familial+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Transgenics, toxicity and therapeutics in rodent models of mutant SOD1-mediated familial ALS.</a> Prog Neurobiol. 85 (1), 94-134 (2008).</li>
<li>Corse, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+testing+of+neuroprotective+neurotrophic+factors+in+a+model+of+chronic+motor+neuron+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Preclinical testing of neuroprotective neurotrophic factors in a model of chronic motor neuron degeneration.</a> Neurobiol Dis. 6 (5), 335-346 (1999).</li>
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<li>Boillee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Onset+and+progression+in+inherited+ALS+determined+by+motor+neurons+and+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Onset and progression in inherited ALS determined by motor neurons and microglia.</a> Science. 5778 (3), 1389-1392 (2006).</li>
</ol>

관심의 어떠한 충돌 선언 없습니다.

SOD1 (G93A) 유전자 마우스 모델은 인간 루게릭병 8 비교 진보 motoneuron 손실의 질병 과정을 연구하는 귀중한 동물 모델입니다. 다른 치료 패러다임의 다양한는이 모델로 평가하고 나중에 인간 임상 연구 8-10에서 테스트하기위한 기초를 대표하고있다. 이러한 생쥐의 실험적 치료 연구에 큰 차이를 감지할 수있게하기 위해서는 최소 24 쓰레기 - 검색된 성별 균형 동일한 유전적 배경 생쥐를 포함하고 두 눈을 멀게 디자인 8을 따르도록 저명한 중요하다. 인간의 임상 연구에 비하면, 하나의 균일한 종점 기준이 선택되어야합니다. 여기에서 가장 일반적으로 사용되는 하나의 측면에 배치되고 이후에 30 초 내에 자체 오른쪽에있는 동물의 무능력이다. 이 기준에 도달하면 동물이 희생되고 있으며 수명 시간은 생존의 시간으로 기록됩니다. TreatmeNT 연구는 presymptomatic 임상 상태에서 시작할 수 있습니다 (생...

<table border="1"><tbody><tr><td></td><td> 제조 </td><td> 주문 정보 </td></tr><tr><td> 행동 검사 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 마우스를위한 로타로드 </td><td> 우고 Basile, Comerio, 이탈리아 </td><td> # 47600 </td></tr><tr><td> 와이어 장치를 교수형에 처하는 </td><td> 맞춤 양복 </td><td></td></tr><tr><td colspan="3"></td></tr><tr><td> 척수 준비 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 작업 테이블 작동 램프 보호 장갑 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 측면에 직각 &#39;아이리스&#39;가위, </td><td> 파인 과학 도구, 하이 델베르크, 독일 </td><td> 14063-09 </td></tr><tr><td> Cohan-Vannas 봄 가위, 스트레이트 </td><td> 파인 과학 도구, 하이 델베르크, 독일 </td><td> 15000-10 </td&gt; </tr><tr><td> 마이크로 포셉 </td><td> 해머커, Solingen, 독일 </td><td> HWC 111-10 </td></tr><tr><td> 메스 &quot;präzisa 플러스&quot; </td><td> Dahlhausen, 쾰른, 독일 </td><td> 11.000.00.510, 무화과 10 </td></tr></tbody></table>

루게릭병에 대한 마우스 모델 (als)의 임상 시험 및 척수 제거

Clinical Testing and Spinal Cord Removal in a Mouse Model for Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS)

루게릭병 (ALS)은 motoneurons의 진보적인 퇴보로 인한 치명적인 neurodegenerative 무질서이다. 발병의 피크는 산발적 질환과 가족성 질환 50 년 주위 육십년 주변입니다. 그 진보 과정으로 인해 환자의 50 %가 증상 발병 후 30 개월 이내에 죽어. 이 질병에 대한 새로운 치료 옵션을 평가하기 위해, ALS의 유전적 마우스 모델 같은 SOD1 (G93A) 돌연변이와 같은 잔디 유전자의 돌연변이 인간 가족을 바탕으로 생성되었습니다. 모델 평가해야 할 가장 중요한 측면은 전반적인 생존, 임상 과정과 운동 기능입니다. 여기서 우리가 임상 평가를 보여주는 두 개의 행동 모터 테스트 전도가 표시되고 모든 매개 변수에 대한 양적 채점 시스템을 제공합니다. ALS 마우스 모델의 심층적인 분석은 일반적으로 척수의 immunohistochemical 시험을 필요로하기 때문에, 우리는 어떻게 적용 자세하게 그 준비를 입증rsal laminectomy 방법. 모범 histological 연구 결과는 증명하고 있습니다. ALS의 마우스 모델에 관한 연구에 묘사된 시험 방법의 포괄적인 응용 프로그램은 연구자들이 안정적으로 나중에 인간 임상 실험을위한 기초를 제공할 수있는 미래의 치료 옵션을 테스트할 수 있도록합니다.

루게릭병 (ALS)에 대한 마우스 모델은 임상 및 behaviorally 면밀히 검토합니다. 동반 immunohistological 분석을위한 전제 조건으로서 척수의 준비가 상세하게 그려져 있습니다.

루게릭병에 대한 마우스 모델 (ALS)의 임상 시험 및 척수 제거

근위축성 측삭 경화증(ALS)은 운동 신경세포의 점진적인 퇴행을 초래하는 치명적인 신경퇴행성 질환입니다. 발병 정점은 60세 전후이며...

안녕하세요, 제 이름은 Lar Turner입니다. 저는 독일 Ingham 대학교 신경과에서 박사후 연구원으로 근무하고 있습니다. 안녕하세요, 제 이름은 Lin Gunda입니다.저는 의대생이며 이 실험실에서 학위 논문 작업을 진행하고 있습니다. 오늘은 근위축성 측삭 경화증의 마우스 모델인 SODG 93의 임상 시험 과정을 보여드리겠습니다. 더불어, 소위 로터 테스트라고 불리는 운동 기능 테스트와 더불어, 면역학적 분석을 수행하기 위한 또 다른 운동 기능 테스트인 매달린 와이어 그립 테스트를 시연하겠습니다.a s 마우스의 기능성 테스트를 마친 후, 척수, STIC 신경 및 비복근(gastroc muscle)을 제거하는 필수 절차가 이어집니다. 본 영상에서는 이러한 외과적 절차를 상세히 보여드리고, 마지막으로 몇 가지 전형적인 면역 조직학적 결과물을 제시하고자 합니다. 그럼, 먼저 임상 테스트부터 시작하겠습니다.이 개체는 근육 떨림이나 마비와 같은 임상적 증상을 보이지 않는, 자유롭게 움직이는 야생형 MOE이며, 이는 당사의 임상 분류 체계에서 4점에 해당합니다. 그리고 이것은 형질전환 ALS MOE입니다.질병의 초기 단계에서, 우측 뒷다리에 심한 떨림이 나타나며 이는 SCORE 3 E로 분류됩니다. 심한 보행 이상이 있는 동물은 score 2로 분류합니다. 최소 하나 이상의 뒷다리를 끄는 경우는 임상 점수 1로 분류합니다. Hanging wire test에서는 조잡한 근육 움켜쥐기 강도를 평가합니다. 각 마우스는 맞춤 제작된 와이어 위에 놓이며, 짚으로 덮인 버튼 위에서 조심스럽게 거꾸로 뒤집어집니다.최소 180초 동안 세 번 연속으로 훈련시킨 후, 낙하까지 걸리는 잠복기를 측정합니다. 각 마우스는 역전된 뚜껑을 최대 180초 동안 붙잡을 수 있도록 최대 세 번의 시도를 부여하며, 가장 긴 시간이 기록됩니다. 오른쪽에 있는 백색 와이어 유형의 마우스와 비교했을 때, 왼쪽에 있는 플라크 형질전환 마우스는 매우 약하며 최대 시간에 도달하기 전에 뚜껑에서 떨어집니다.로터 로드(Rotor rod) 장치는 운동 조정 능력, 균형 감각 및 운동 학습 능력을 측정하는 데 사용됩니다. 우수한 수행 능력을 보이려면 높은 수준의 감각 운동 조정 능력이 필요합니다. 이 장치는 컴퓨터로 제어되는 모터 구동 회전축과 5마리의 마우스를 위한 5개의 레인으로 구성되어 있습니다.생쥐의 낙하 여부는 바닥의 플라스틱 플레이트에 가해지는 압력을 통해 자동으로 감지됩니다. 분당 15회전의 일정한 속도로 최소 180초 동안 3회 연속으로 훈련시킨 후, 동물이 회전하는 로타로드 위에서 버틸 수 있는 시간을 측정합니다. 각 동물에 대해 3회 시도를 실시하며, 추락 전까지의 가장 긴 잠복 시간을 기록합니다.왼쪽에 있는 건강한 야생형 생쥐는 로터 로드 위에서 무리 없이 달리고 있습니다. 이와 대조적으로, 오른쪽에 있는 형질전환 a s mo 생쥐는 로터 로드 위에 머무는 것조차 매우 어려워하며, 뒤에서 관찰했을 때 잠시 후 미끄러져 떨어집니다. 왼쪽 retre 생쥐의 심각한 보행 장애를 확인할 수 있습니다.건강한 대조군 쥐와 비교했을 때, 해당 쥐는 로타로드(rotor rod) 속도를 따라가지 못하며 HIN 사지로 위쪽을 밀어내지 못합니다. 척수의 면역화학적 분석을 수행하기 위해 동물을 희생시켜야 합니다. 동물 실험의 적절한 수행을 위한 지역 가이드라인을 항상 엄격히 준수하는 것이 매우 중요합니다.이 과정에서는 척추와 그 주변 조직에 대한 매우 단순화된 개요를 통해 주요 해부학적 구조를 묘사합니다. 동물을 복측이 위로 오게 배치하고 등쪽 주머니의 근육을 준비하기 시작합니다. 근육 조직을 제거한 후, 척수를 둘러싸고 있는 척추에 접근하겠습니다.동물을 희생시키고 파라포름알데히드 함유 용액으로 관류시킨 후, 척수를 적출할 수 있습니다. 동물을 수술대 위에 놓고 뒷다리를 양옆으로 고정하여 마우스의 등 쪽이 노출되게 합니다. 털을 납작하게 눕혀 이후의 피부 절개를 용이하게 하기 위해 동물의 몸을 적십니다.이를 위해 날카로운 메스를 사용합니다. 피부를 양옆으로 팽팽하게 당기도록 주의하십시오. 절단을 용이하게 하기 위해 다리 근육을 준비해야 합니다.피부 또한 절개해야 합니다. 피부 절개가 완료되면, 이를 조심스럽게 옆으로 당깁니다. 핀셋을 사용하여 다리 근육과 좌골 신경을 제거한 후, 척수를 향해 계속 접근하며 동물을 새로운 수술대 위에 놓습니다.이제 두개골, 목, 근육 및 척주를 쉽게 식별할 수 있습니다. 이러한 모든 구조물을 확인했으므로 다음 단계로 쉽게 진행할 수 있습니다. 목의 근육과 인대를 제거해야 합니다.너무 깊게 절개하여 척주에 손상을 주지 않도록 주의하십시오. 다음 단계에서는 척주를 노출시키기 위해 척추 주변 근육을 완전히 제거합니다. 척주에 접근하기 위해서는 여러 번의 절제술을 수행해야 합니다.환추후두관절을 포함하여 경추 부위부터 시작합니다. 척추궁 절제술을 수행하기 위해서는 추체로부터 모든 척추 돌기를 제거할 수 있도록 척추궁을 절단해야 합니다. 앞서 설명한 바와 같이, 척추궁 절제술은 척추궁을 절단하는 것으로 시작합니다.그 다음 라미나(lamina)를 젖혀냅니다. 이후 더 많은 척추궁을 제거해야 하므로 척수(spinal cord)에 손상을 주지 않도록 다시 한번 주의하십시오. 각도가 진 가위를 사용하여 양측의 여러 척추궁을 한 번에 절개하는 것이 매우 유용합니다.그 다음, 등쪽 돌기를 당겨 척추 후궁을 완전히 제거합니다. 확대 영상을 보시면 가위를 척수강의 가장 외측 부분에 조심스럽게 삽입해야 함을 알 수 있습니다. 이후 척수를 완전히 제거하기 용이하도록 척추의 남은 외측 부분들을 제거해야 합니다.척수의 해부학적 지표는 소위 경수 및 요수 팽대부입니다. 척수 전체의 적출을 마친 후, 척수의 모든 전근을 절단하고 뇌수막의 경막으로부터 척수를 분리하십시오. 다음으로, 경수 부분을 절단합니다.두측으로 향하며 제거 과정을 다시 시작합니다. 이 조직이 손상되면 이후의 면역화학 분석에 심각한 제약이 생길 수 있으므로, 척수를 매우 주의 깊게 다루십시오. 척수 제거는 흉수 수준에서 계속 진행하여 요수 부분까지 이어갑니다.이번에는 마미(cauda equina) 측면을 다시 절단합니다. 이제 이를 완전히 분리할 수 있습니다. 여기 RAL 컬럼 내의 원래 위치 바로 옆에 배치된 척수를 볼 수 있습니다.최종적으로, 시료를 Paraform Hyde 후고정 용액에 넣습니다. 척수 면역조직화학 분석의 전형적인 예로, 척수 전각의 운동 뉴런을 식별하기 위해 choline, acetyl transferase를 인식하는 항체를 적용할 수 있습니다. 여기 건강한 야생형 동물의 수많은 운동 뉴런을 확인할 수 있습니다.반대로, 말기 단계의 ALS 형질전환 동물은 전각(Anterior horn) 내의 운동 뉴런 수가 훨씬 적은 것을 보여줍니다. 이 비디오 논문을 통해 근위축성 측삭 경화증의 마우스 모델인 SOD1 G93의 기본적인 임상 검사 방법을 학습하셨을 것입니다.로터 테스트와 매달린 와이어 테스트라는 두 가지 운동 행동 테스트가 입증되었습니다. 이 테스트들은 기본적인 운동 기능을 평가하는 데 유용한 가능성을 제공합니다. 또한 수행하기 쉽고, 운동 결손 탐지에 민감하며, 시간 효율적입니다.이 영상의 주요 내용은 척수 준비 기술의 시연으로 구성되어 있습니다. 이 방법은 물론 다른 모든 마우스 질병 모델에도 적용할 수 있으며, 추후 척수 내 질병 병리에 대한 면역화학적 분석을 위한 필수적인 단계입니다. 시청해 주셔서 감사합니다.이 비디오 논문이 귀하의 향후 실험에 도움이 되기를 바랍니다.

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신경 전구체 이식은 보호 및 / 또는 척수 상해 (SCI)과 모터 신경 장애, amyotrophic 패스 경화증 (ALS)에 분실 / 역기능 자궁 phrenic 모터 뉴런을 교체 유망 전략이다. 우리는 ALS와 SCI의 쥐 모델에서 자궁 경부 척수 복부 혼까지 셀 전송을위한 프로토콜을 제공합니다.

루게릭병과 외상 척수 상해에서 자궁암 복부 호른를 타겟팅하는 Intraspinal 세포 이식

출처:Pourshafie, N., et al. 설치류의 신경근 질환을 치료하기 위해 재조합 아데노 관련 바이러스 혈청형 9를 사용한 MicroRNA의 전신 전달. J. Vis. Exp. (2018).이 비디오에서 척수 및 구근 근위축증 또는 SBMA 영향을 받은 마우스는 치료용 microRNA를 암호화하는 플라스미드를 운반하는 재조합 AAV(아데노 관련 벡터) 벡터의 꼬리 정맥 주사를 받습니다. 벡터는 돌연변이 AR(안드로겐 수용체)-mRNA(메신저 리보핵산)에 결합하여 분해를 유발하는 마이크로RNA를 생성합니다. 이는 독성 단백질 축적을 줄이고 신경근 기능을 개선하는 데 도움이 됩니다.

척추 및 구근 근위축 마우스 모델에서 재조합 아데노 관련 벡터 주입

이 비디오 프로토콜은 근위축성 측삭 경화증의 형질전환 마우스 모델에서 신경근 결손을 평가하기 위한 민감하고 신뢰할 수 있으며 빠른 방법을 설명합니다.

ALS의 SOD1-G93A 마우스 모델에서 질병의 진행을 평가하기위한 빠른 표현형 신경 채점 시스템

이 기사에서는 신생아 마우스에서 재현 가능한 척수 압박 손상(SCI)을 생성하는 방법에 대해 설명합니다. 이 모델은 자발적인 기능 회복의 기초가 되는 적응 가소성의 메커니즘을 연구하는 데 유리한 플랫폼을 제공합니다.

신생아 마우스 척수 압축 부상 모델

여기에는 β- 아밀로이드증 및 타우 병증 유전자 변형 마우스 모델에서인지 및 기능 운동 행동에 대한 생체 내 효능을 나타내는 화합물을 스크리닝하는데 사용될 수있는 단계적 행동 스크리닝 방법이 기재되어있다. 이 방법은 단기 및 작업 메모리 작업에서 활동을 위해 화합물을 스크리닝하기 위해 최적화됩니다.

아밀로이드 -β 및 타우 신경 병증의 유전자 변형 마우스 모델에서 자발적 교대, 새로운 대상 인식 및 사지 걸림의 평가

신경 유도의 측정 neurodegeneration의 마우스 모델을 평가 하는 유용한 도구 이지만 그것은 자주 hindlimbs에 좌 골 신경을 자극에 적용 됩니다. 여기, 복합 근육 활동 전위 (CMAP) vivo에서 상 완 신경 총에 의해 innervated 마우스 forelimb 근육에서 측정 하는 기술을 설명 합니다.

Vivo에서 모터 신경 퇴보의 마우스 모델에서 앞 발에서 복합 근육 활동 전위의 electrophysiological 측정

이 프로토콜은 척수 손상 연구에 대한 최소한의 부수적 손상과 함께 마우스 모델에서 안정적인 횡부 형 척수 손상을 유도하기위한 정확한 라미네절절제술을 만드는 방법을 설명합니다.

마우스에서 완전한 Transection 형 척수 손상의 유도

여기에 제시된 것은 다양한 정도의 척수 손상 타박상 모델을 정확하게 생성할 수 있는 마우스용 새로운 자동 척수 손상 타박상 장치입니다.

마우스의 Contusive Spinal Cord Injury Model을 위한 자동 임팩터

본 프로토콜은 종양 세포를 추간 공간에 주입하여 척수 신경교종의 재현 가능한 쥐 모델을 개발하는 방법을 설명하며, 연구 및 치료 개발을 위한 보다 효과적이고 덜 침습적인 접근 방식을 제공합니다.

종양 세포를 마우스의 척수에 외과적 이식

폴리글루타민 척수뇌 운동실조증은 CAG 확장으로 인해 응집 가능성이 높은 단백질이 생성되어 발생합니다. 이 프로토콜은 벡터 생성, 입체적 전달, 포함물 및 신경 마커 손실 분석을 설명하여, 신경퇴행성 질환의 기전 조사와 표적 치료제를 평가할 수 있는 통제된 플랫폼을 제공합니다.

렌티바이러스 유발 선관절 병리학을 폴리글루타민 척수소뇌 운동증의 전임상 모델로 활용하다

이 글에서는 성체 마우스에서 CNS 표적 치료제의 테스칼 내 전달 방법을 자세히 설명하며, 프로토콜의 정확성과 반복 주사 허용에 중점을 둡니다. 이 연구에는 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 SOD1-ALS 모델 마우스에서 돌연변이 SOD1 발현을 감소시킨 검증 연구 결과가 포함되어 있어, 신경퇴행성 질환 전임상 연구에서 이 접근법의 유용성을 뒷받침합니다.

SOD1-ASO의 요추 수막내 주사, 인간 SOD1-G93A ALS 마우스에서 정밀한 중추신경계 표적 지정과 예측 효능을 위한 방법

배우세요 SOD1 G93A 마우스 모델을 이용한 루게릭병(ALS) 임상 시험 및 척수 제거 방법을. 회전봉 테스트와 매달림 테스트로 운동 기능을 평가하고 면역조직화학 분석을 위한 척수 절제술을 익히세요.

루게릭병에 대한 마우스 모델 (ALS)의 임상 시험 및 척수 제거

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