루게릭병에 대한 마우스 모델 (ALS)의 임상 시험 및 척수 제거

루게릭병 (ALS)에 대한 마우스 모델은 임상 및 behaviorally 면밀히 검토합니다. 동반 immunohistological 분석을위한 전제 조건으로서 척수의 준비가 상세하게 그려져 있습니다.

안녕하세요, 제 이름은 Lar Turner입니다. 저는 독일 University of Ingham의 신경학과에서 박사 후 과정을 밟고 있습니다. 안녕하세요, 제 이름은 Lin Gunda입니다.

저는 의대생이고 이 연구실에서 논문 작업을 하고 있습니다. 오늘 우리는 위축성 측삭 경화증의 이끼 모델인 SODG 93의 임상 테스트를 보여드리겠습니다. 또한 이른바 로터 테스트를 통한 모터 기능 테스트를 시연하고 추가로 면역 로직 분석을 수행하기 위해 매달린 와이어 그립을 사용한 또 다른 모터 기능 테스트를 시연할 것입니다.

a s 마우스의 기능 테스트 후 필요한 절차는 척수, STIC 신경 및 비복근을 제거하는 것으로 구성됩니다. 우리는 이러한 수술 절차를 자세히 보여주고자 하며, 마지막에는 몇 가지 모범적인 면역 논리 결과를 제시하고자 합니다. 자, 이제 먼저 임상 테스트부터 시작하겠습니다.

이것은 우리의 임상 분류 시스템에서 근육 떨림이나 Parsis와 같은 임상 증상을 보이지 않는 자유 이동 야생형 MOE입니다. 그것은 4점입니다. 이것은 형질전환 A LS moe입니다.

초기 질병 단계에서는 오른쪽 사지의 심한 떨림을 보여 SCORE 3 E로 분류됩니다.심각한 보행 이상은 이 동물을 Score 2로 분류합니다. 적어도 하나의 뒷다리를 끌면 교수형 와이어 테스트에서 임상 점수 1로 분류되며, 조잡한 근육 갈비뼈 강도가 평가됩니다. 각 마우스는 CustomMade 와이어에 놓고 빨대로 덮인 버튼 위에서 조심스럽게 거꾸로 뒤집습니다.

최소 180초씩 3회 연속 트레이닝 후 낙상까지의 대기 시간을 측정했습니다. 각 마우스는 최대 180초 동안 거꾸로 된 뚜껑을 잡을 수 있는 최대 3번의 시도가 주어지며, 가장 긴 시간은 오른쪽의 흰색 와이어 타입 마우스와 비교하여 기록됩니다. 왼쪽의 플라크 형질전환 마우스는 매우 약하고 최대값에 도달하기 전에 뚜껑에서 떨어집니다.

로터 로드 장치는 모터 조정, 균형 및 모터 학습 능력을 측정하는 데 사용됩니다. 좋은 성능을 발휘하기 위해서는 감각 운동 협응의 높은 수치가 필요합니다. 컴퓨터로 제어되는 모터 구동 회전 스핀들과 5m용 5개의 레인으로 구성됩니다.

마우스의 결함은 바닥 플라스틱 플레이트의 압력에 의해 자동으로 감지됩니다. 분당 15 라운드의 일정한 속도로 최소 180 초씩 3 회 연속 훈련 한 후 동물이 회전하는 부패에 머물 수있는 시간을 측정합니다. 각 동물은 세 번의 시도를 거치며 넘어지지 않는 가장 긴 대기 시간이 기록됩니다.

왼쪽의 건강한 와일드 타입 모스는 로터 로드에서 어려움 없이 달리고 있습니다. 대조적으로, 우측의 형질전환 a s mo는 로터 로드에 남아 있는 것조차 심각한 문제가 있으며 뒤에서 관찰된 후 잠시 후 미끄러집니다. 왼쪽 retre 마우스의 심각한 실행 어려움을 볼 수 있습니다.

건강한 와이어 탭 마우스와 비교하여 로터 로드 속도를 따라갈 수 없으며 HIN 팔다리로 위로 밀 수 없습니다. 척수에 대한 면역화학적 분석을 수행하기 위해서는 동물을 희생해야 합니다. 동물 실험의 올바른 수행을 위해 항상 현지 지침을 엄격하게 준수하는 것이 매우 중요합니다.

이러한 맥락에서, 척추와 그 주변 조직에 대한 매우 단순화된 개요에서는 주요 해부학적 구조가 묘사됩니다. 우리는 동물을 배쪽에 놓고 등쪽 주머니에서 근육을 준비하기 시작할 것입니다. 근육 조직을 제거한 후 척수를 둘러싸고 있는 척추에 접근합니다.

동물을 희생시키고 용액을 함유한 파라폼 높이로 관류한 후 척수를 제거할 수 있습니다. 동물을 수술대에 놓고 전체 팔다리를 측면에 고정하고 마우스의 뒷면을 노출시킵니다. 동물을 적셔 털을 평평하게 하고 다음과 같은 피부 절개를 용이하게 합니다.

이를 위해 날카로운 메스가 사용됩니다. 피부를 양쪽으로 펴도록 주의하세요. 다리 근육을 쉽게 절단할 수 있도록 준비해야 합니다.

그들의 피부도 절개해야 합니다. 피부 절개가 완료된 후 부드럽게 옆으로 당깁니다. 족집게로 다리 근육과 좌골 신경을 제거한 후 척수에 계속 접근하고 동물을 새 수술대에 올려 놓았습니다.

이제 두개골 목, 근육 및 척추를 쉽게 식별할 수 있습니다. 이러한 모든 구조를 식별하면 다음 단계로 쉽게 진행할 수 있습니다. 목의 근육과 인대를 제거해야 합니다.

너무 깊게 절개하지 않도록 주의하고 척추를 이끌지 않도록 주의합니다. 다음 단계에서는 척추주위를 노출시키기 위해 척추주위 근육을 완전히 제거합니다. 척추에 접근하려면 몇 가지 ectomis를 수행해야 합니다.

우리는 대서양 후두 관절을 포함한 척추의 경추 부분에서 시작합니다. 후판 절제술을 수행하려면 척추체에서 모든 척추 과정을 제거할 수 있도록 척추궁을 절단해야 합니다. 앞서 설명했듯이 후판 절제술은 척추궁을 절단하는 것으로 시작합니다.

그런 다음 라이나를 빼낼 수 있습니다. 다시 말하지만, 더 많은 ral을 제거해야 하므로 척수에 병변이 생기지 않도록 주의하십시오. 각진 가위를 사용하고 한 번에 양쪽의 여러 척추 아치를 삽입하는 것이 매우 도움이 됩니다.

그런 다음 등쪽 돌기를 당겨 척추 층과 클로즈업을 완전히 제거합니다. 가위는 척추관 측면에서 가장 옆으로 조심스럽게 삽입해야 합니다. 척추의 나머지 측면 부분은 나중에 척수를 완전히 제거할 수 있도록

척수의 해부학적 랜드마크는 소위 경추 및 요추 중심관(cervical and lumbar esencia)입니다. 전체 척수의 외절제술을 마쳤으면 척수의 모든 복부 뿌리를 절제하고 수막의 내막에서 분리해야 합니다. 다음으로 경추 척수를 절단합니다.

두개골 및 제거가 다시 시작됩니다. 이 조직에 해를 끼치지 않도록 척수를 매우 조심스럽게 만지면 나중에 면역 화학 분석에 심각한 제한을 줄 수 있습니다. 척수 제거는 흉부 수준에서 더 계속되고 요추 부분으로 진행됩니다.

이번에는 코드 에퀴나의 측면에서 마지막으로 다시 절단됩니다. 이제 우리는 그것을 완전히 해제 할 수 있습니다. 여기에서 RAL 열의 원래 위치 바로 옆에 척수가 배치된 것을 볼 수 있습니다.

궁극적으로 Paraform Hyde 포스트 고정 솔루션에 배치됩니다. 척수 면역조직화학 분석의 전형적인 예로, 콜린, 아세틸 전이효소를 인식하는 항체를 적용하여 척수 전각의 운동 뉴런을 식별할 수 있습니다. 여기에서 건강한 야생형 동물에서 많은 수의 운동 뉴런을 볼 수 있습니다.

대조적으로, 말기에 형질전환 LS 동물은 전방 뿔에서 훨씬 적은 수의 운동 뉴런을 나타냅니다. 이 비디오 기사를 보면서 SODG 93의 기본 임상 검사를 배웠어야 합니다. 위축성 측삭 경화증의 마우스 모델.

두 가지 모터 동작 테스트, 즉 로터 테스트와 매달린 와이어 테스트가 시연되었습니다. 기본 운동 기능을 평가할 수 있는 좋은 가능성을 제공합니다. 이 검사는 수행하기 쉽고, 모터 결함을 감지하는 데 민감하며, 시간 효율적입니다.

이 비디오의 주요 부분은 척수 준비 기술을 시연하는 것으로 구성되어 있습니다. 이것은 물론 다른 마우스 질병 모델에도 적용될 수 있으며 척수의 질병 병리학에 대한 향후 면역화학적 분석을 위한 필수 단계입니다. 시청해 주셔서 감사합니다.

이 동영상 기사가 향후 실험에 도움이 되기를 바랍니다.