Name: 항체 배열을 사용하여 수용체 티로신 키나제 인산화의 프로파일 변경 - 광고 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-09-27T11:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 16 s
Description: 배우세요 Human Phospho-RTK 배열을 사용하여 암 세포주에서 수용체 티로신 키나제 인산화 변화를 다중 분석하는 방법. 이 기법은 표적 치료제 효능 평가와 세포 신호 전달 메커니즘 연구에 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

이 작품은 R &amp; D 시스템즈가 추진하는 사업

1. 샘플 준비 <ol><li> 인간 Phospho-RTK 어레이 데이터 시트에있는 지침에 따라 치료, 리간드는 치료, 또는 방지제와 리간드 치료 세포 lysates를 수집합니다. 용해 버퍼는이 키트에 최적화되었습니다. 다른 용해 버퍼의 대체는 배열의 마지막 성능에 영향을 미칠 수 있습니다. proteolytic 샘플 저하를 방지하기 위해, 10 μg / ML Aprotinin, 10 μg / ML 류 펩틴, 10 μg / ML Pepstatin 각 사용에 대한 신선한 각각의 세포 lysate 준비에 필요한 용해 버퍼의 양을 추가합니다. </li><li> Lysate 농도는 bicinchoninic 산 (BCA) 분석을 사용하여 측정해야합니다. 샘플 농도는 경험적으로 최적의 감도 및 낮은 배경에 맞게 변경 될 수 있습니다. lysate의 100-300 μg의 범위는 초기 시작 지점으로하는 것이 좋습니다. </li><li> 샘플의 동결 / 해동 사이클은 피해야합니다 그리고 lysates의 적절한 저장 용량은 최적의 성능을 위해 필요합니다. 얼음에 냉동 lysate 샘플을 해동. </li></ol><ol><li> 사용하기 전에 실온에 모든 키트 구성 요소를 가져와. 절차를 수행하는 동안 오염을 방지하기 위해 장갑을 착용하십시오. </li><li> 사용되는 4 - 그럼 멀티 요리의 각 잘에 배열 버퍼 1 피펫 2.0 ML. 배열 버퍼 1 블록 버퍼 역할을합니다. </li><li> 평면 팁 핀셋 사용하여 4 음 ​​다중 요리의 잘의 보호 시트와 장소 사이에서 사용되는 각 멤브레인을 제거합니다. 배열 번호는 위쪽으로 직면해야한다. </li><li> 배열 버퍼 1 접촉시, 장소에서 청색 색소가 사라집니다하지만, 캡처 항체들은 특정 위치에 유지됩니다. </li><li> 흔들 플랫폼에서 1 시간에 품다. 동양은 트레이, 각 배열 바위 끝은 잘에 종료하는 것을. 배열의 표면은 완전히 침수와 블록 버퍼에 포함해야합니다. </li><li> 멤브레인 차단 있지만, 배열 버퍼 1 1.5 ML의 최종 볼륨에 세포 lysate의 원하는 수량을 희석. </li> &lt;리&gt; 기음의 배열 4 - 그럼 다중 접시의 우물에서 버퍼 1과 희석 lysate 솔루션을 추가 할 수 있습니다. 4 - 그게 다 음식에 뚜껑을 놓으십시오. <li> 흔들 플랫폼에 2-8 ° C에서 하루 아침에 품다. 최적의 감도가 필요하지 않은 경우 짧은 배양 시간 사용할 수 있습니다. </li><li> 조심스럽게 1X 워시 버퍼의 20 ML과 개별 플라스틱 용기에 4 - 그럼 멀티 요리와 장소에서 각 멤브레인을 제거합니다. 4 - 그럼 멀티 요리는 세척 단계를 완료하는 데 사용할 수 없습니다. deionized 또는 증류수와 함께 4 - 그럼 여러 요리를 씻어 완전히 건조 시키십시오. </li><li> 흔들 플랫폼 흔드는 10 분에 1X 워시 버퍼 각 멤브레인을 씻으십시오. 3 세차의 총을 두 번 반복합니다. </li><li> 유리 병의 라벨에 희석 요소를 사용하여 두 1X 배열 버퍼에 반 phospho-티로신 - 고추 냉이 퍼 옥시 데이즈 (HRP) 감지 버퍼를 희석. 4 - 그럼 멀티 요리의 각도에 희석 솔루션의 피펫 2.0 ML. </li><li> 신중은 세탁 컨테이너의 각 멤브레인을 제거합니다.막에서 분출과 희석 방지 phospho-티로신-HRP을 포함하는 4 자 다 요리에 막 돌려 초과 버퍼를 허용합니다. 뚜껑과 함께 우물을 다룹니다. </li><li> 흔들 플랫폼에 상온에서 2 시간에 품다. </li><li> 이전에 설명 된대로 각 배열을 씻으십시오. </li><li> 중단없이 나머지 단계를 완료합니다. 신중은 세탁 컨테이너의 각 멤브레인을 제거합니다. 초과 버퍼가 흡수 종이로 하단 가장자리를 blotting하여 멤브레인의 배수 할 수 있습니다. 최대 직면하고있는 식별 번호와 플라스틱 시트 프로텍터에 각 멤브레인을 배치합니다. </li><li> 준비된 Chemi 시약의 피펫 한 ML은 각 막에 고르게 섞는다. 막 당 Chemi 시약 믹스 미만의 1 ML을 사용하면 불완전 막 보도 될 수 있습니다. Chemi 시약 1과 2에 대한 몇 가지 높은 강도 chemiluminescent 시약의 대체는 시약에 따라 증가 배경이나 감소 신호 중 하나가 발생할 수 있습니다. </li><li> 조심스럽게 플라스틱으로 커버시트 보호. 부드럽게 공기 방울을 부드럽게하고 Chemi 시약 믹스는 각 막의 모든 구석 구석에 골고루 분포되어 있는지 확인합니다. 1 분에 품다. </li><li> 위치 종이 상단과 세포막을 포함하는 플라스틱 시트 프로텍터의 양쪽에 수건을주의 깊게 초과 Chemi 시약 믹스을 짜낸 후에 사용합니다. </li><li> 상단 플라스틱 시트 프로텍터를 제거하고 신중하게 흡수 실험실 남아있는 Chemi 시약 믹스를 가릴 수있는 멤브레인의 상단에 닦아 놓여 있었다. </li><li> 하단 플라스틱 시트 프로텍터에 세포막을 남겨두면, 플라스틱 랩은 부드럽게 공기 방울을 부드럽게 관리하고있는 멤브레인을 다룹니다. 멤브레인 및 시트 보호가 완전히 포장되도록 시트 수호자의 뒤로 초과 플라스틱 랩으로 감싸. </li><li> 방사성 동위 원소 검출에 사용되지 않은 autoradiography 영화 카세트에 최대 직면하고있는 식별 번호와 세포막을 놓으십시오. </li><li> 1-10 분 동안 코닥 BioMax 라이트 필름에 노출. 다중 노출은 recomm 아르종료되었습니다. 또한, 이미지 등의 Carestream 건강으로 chemiluminescence 호환 영상을 사용하여 수집 될 수 있습니다 이미지 역 4000MM PRO. </li></ol> 3. 데이터 분석 <ol><li> 개발 영화에서 본 긍정적 인 신호를 신속하게 배열 이미지에 투명 오버레이를 배치하고이 목적 모서리에 인쇄 참조 명소 쌍으로 정렬하여 식별 할 수 있습니다. 배열에 날인 된 식별 번호는 왼쪽 측면에 배치했다한다. 컨트롤과 캡처 항체의 위치는 인간 Phospho-RTK 어레이 데이터 시트의 부록에 나열됩니다. </li><li> 개발 필름에 픽셀 밀도는 같은 엡손의 완벽 V750 PRO로 전송 모드 스캐너를 사용하여 수집 할 수 있습니다. </li><li> 적절한 이미지 분석 소프트웨어 프로그램을 사용하여 배열의 각 지점에서 픽셀 밀도를 분석 할 수있는 템플릿을 만듭니다. 호환 프로그램은 GE에서 ImageQuant 또는 ArrayVision 소프트웨어, 서양 비전 sof를 포함프로파일 배열, BioRad 수량 하나 어도비 포토샵, NIH ImageJ, 그리고 단백질 간단한 AlphaView를 프로테옴 할 특정 템플릿을 사용 tware. </li><li> Microsoft Excel과 같은 프로그램에서 조작을위한 스프레드 시트 파일에 신호 값을 보냅니다. </li><li> 각 RTK를 대표하는 중복 장소 쌍의 평균 신호 (픽셀 밀도)를 확인합니다. </li><li> 각 지점에서 평균 배경 신호를 뺍니다. 배열 또는 배경 값으로 부정적인 제어 장소의 명확한 영역에서 신호를 사용합니다. </li><li> 샘플 사이의 RTK의 인산화 수준의 상대적 변화를 결정하기 위해 서로 다른 배열에 해당하는 신호를 비교합니다. </li></ol> 4. 대표 결과 이 프로토콜은 인간 Phospho-RTK 배열이 RTK의 인산화에 리간드 자극과 억제제의 효과를 차단하는 데 사용할 수 있습니다 방법을 보여줍니다. 그림 1에서 데이터는 100 NG로 치료, 치료했다 MDA-MB-453 세포에 표시됩니다5 분, 또는 알려진 ErbB 가족 억제제 전에 HRGβ1 치료에 8-11으로 사전 처리를위한 / ML rhNRG-β1/HRG-β1 (HRG-β1). 억제 실험 세포는 1 μM HDS 029, 200 nm의 PD 153,035, 또는 세 시간 동안 200 nm의 SFM에서 PD 158,780와 incubated되었습니다. 각 배열은 lysate 100 μg과 incubated되었습니다. 인산화의 증가는 ErbB2, ErbB3에 대한 관찰, 그리고 ErbB4 캡처 명소 HRG-β1과 치료 세포를 비교 MDA-MB-453 세포를 취급하고 있습니다. 이전 HRG-β1 부화에 세 ErbB 가족 선택적 억제제로 세포의 치료는 ErbB2의 감소, ErbB3 및 ErbB4 인산화를 일으켰습니다. 그림 2에서, 데이터는 RTK FGF의 R2를 overexpress 것으로 알려진 카토 III 셀에 표시됩니다. 실험의 집합에, 카토 III 세포는 이전에 치료 100 NG / ML rhFGF 산성 (FGF)와 1 μg / ML 헤파린, 또는 FGF R 선택적 억제제 12-15과 pretreated로 치료, 치료했다FGF 및 헤파린. 억제제 PD173074, PD 161,570, 그리고 PD 166,285는 1 μm의 농도에서 사용하고 혈청 무료 미디어 3 시간의 카토 III 세포와 incubated되었습니다. EGF R 및 치료 가토 III 세포에서 FGF의 R2 모두의 제정 인산화, FGF의 R2의 인산화의 증가가 있지만 FGF 치료에 관찰되었다. PD 173,074으로 세포를 잠복기, PD 161,570, 또는 PD 166,285이 FGF R2와 EGF R의 인산화를 감소하게되었습니다. 이러한 억제제는 FGF R 가족 구성원의 인산화에 영향을 미칠 알려져 있지만, 이러한 결과는 억제제의 특정 농도가이 경우에 해당 EGF R과 같은 다른 RTKs에있을 수 있습니다 효과를 모니터링하기위한 인간 Phospho-RTK 배열의 유틸리티를 보여줍니다. <img alt="그림 1" fo:content-width="4.5in" fo:src="/files/ftp_upload/4199/4199fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/4199/4199fig1.jpg" data-altupdatedat="1784610006000" data-alt="그림 1"> 1 그림. recep의 유도와 억제유방암 세포에서 티로신 키나제 토르의 인산화. 프로테옴 프로파일 러 인간 Phospho-RTK 배열 및 해당 히스토그램 프로파일의 배열 이미지는 표시됩니다. MDA-MB-453 세포는 치료 또는 RTK 억제제는 NRG-β1/HRG-β1 치료를 다음과 처리했다. 배열은 MDA-MB-453 세포에 키나제 인산화에 억제제의 효과를 모니터링하기 위해 사용되었다. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/4199/4199fig1large.jpg" target="_blank">큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오</a> . <img alt="그림 2" fo:content-width="4.5in" fo:src="/files/ftp_upload/4199/4199fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/4199/4199fig2.jpg" data-altupdatedat="1784610006000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 프로테옴 프로파일 러 인간 Phospho-RTK 배열 및 해당 히스토그램 프로필에서 유도 및 위 암 세포의 수용체 티로신 키나제 인산화의 억제. 배열 이미지가 표시됩니다. 카토 III 전지는 unt했다reated 또는 FGF 산성 및 헤파린 치료를 다음 RTK 억제제로 치료하는 것은. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/4199/4199fig2large.jpg" target="_blank">큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오</a> . 참조 <ol><li> Henriksson, ML, Edin, S., Dahlin, AM, Oldenborg, PA, Oberg, A., 반 Guelpen, B., Rutegard, J., Stenling, R., &amp; Palmqvist은 R. 대장 암 세포는 결과 옆에 섬유 아세포를 활성화 FGF1/FGFR3 신호와 증가 침략 인치인가. J. Pathol. 178, 1387-1394 (2011). </li><li> 모리시​​타, A., 공, J., 노무라, T., 요시다, H., Izuishi, K., 스즈키, Y., Kushida, Y., Haba, R., D' Armiento, J., &amp; 마사키, T. 단백질 배열의 사용은 인간의 대장 암 치료에 대한 타겟팅 수용체 티로신 kinases를 식별합니다. INT. J. Oncol. 37, 829-835 (2010). </li><li> Agaram, NP, Laquaglia, MP, Ustun, B., 구오, T., 웡, GC, Socci, ND, 마키, RG,소아 위장 stromal 종양의 DeMatteo, RP, Besmer, P., &amp; Antonescu, CR 분자 특성. Clin. 암 해상도. 14, 3204-3215 (2008). </li><li> Stommel, JM, Kimmelman, AC, 잉, H., Nabioullin, R., Ponugoti, AH, Wiedemeyer, R., Stegh, AH, Bradner, JE, 리곤, KL, 브레넌, C., 친, L., &amp; DePinho는 수용체 티로신 kinases의의 RA의 Coactivation 타겟팅 요법에 종양 세포의 반응에 영향을 미칩니다. 과학. 318, 287-290 (2007). </li><li> Agarwal, S., Zerillo, C., Kolmakova, J., 크리스텐슨, JG, 해리스, 종이, Rimm, DL, DiGiovanna, MP, &amp; 스턴,에 대한 저항과 constitutively 활성화 간세포 성장 인자 수용체의 DF 협회 (메트로폴리스) 비 작은 세포 폐암 세포에서 이중 EGFR/Her2 억제제. BR. J. 암. 100, 941-949 (2009). </li><li> Dewaele, BM, Floris, G., Finalet - Ferreiro, J., 플레쳐, CD, Coindre, JM, Guillou, L., Hogendoorn, PC, 워즈니악, A., Vanspauwen, V., Schoffski, P., Marynen, P., Vandenbergh, P., Sciot, R., &amp; Debiec - Rychter, M. 공동 활성화 PDGFRA와 EGFR은 내막 육종의 잠재적 인 치료 대상입니다. 암 해상도가. 70, 7304-7314 (2010). </li><li> 윤 YK, 김, HP, 한, SW, 허, HS, 오, DY, 인스턴트 메시지, SA, 탕, YJ, &amp; 김, EGFR 및 MEK1 / 2 억제제 TY의 조합은 억제 EGFR/HER3-dependent의 시너지 효과를 보여줍니다 인간의 위 암세포의 AKT 활성화. 몰. 암 군터. 8 2526년부터 2536년까지 (2009). </li><li> 튀김, DW, 넬슨, JM, Slintak, V., 헬렌 켈러, PR, Rewcastle, GW, 데니, WA, 저우, H., &amp; 교량, 4 AJ 생화학 및 antiproliferative 등록 - 아르곤 (하시죠) ylamino] pyridopyrimidines, 강력한 및 특정 표피 성장 인자 수용체 티로신 키나제의 억제제의 새로운 화학 클래스입니다. Biochem. Pharmacol. 54, 877-887 (1997). </li><li> 보스,M., Mendelsohn, J., 김, YM, Albanell, J., 프라이, DW, &amp; Baselga, J. PD153035, 티로신 키나제 억제제는 표피 성장 인자 수용체 활성화를 방지하고 수용체에 암 세포의 성장을 억제 번호 - 종속 방식. Clin. 암 해상도. 3, 2099-2106 (1997). </li><li> 산보 나온 것처럼, SW, Kansra, S., Peshick, S., 프라이, DW, 레오폴드, WR, Wiesen, JF, Sibilia, M., 장, T., Werb, Z., Derynck, R., 바그너, EF, 및 장로, 정상 및 악성 keratinocytes에 비해 피부에 ErbB 수용체 티로신 kinases의 JT 차등 활용 및 현지화가. Neoplasia. 3, 339-350 (2001). </li><li> Klutchko, SR, 저우, H., 겨울, RT, 트란, TP, 다리, AJ, Althau, IW, Amato, DM, 엘리엇, WL, 미드, 프라이 MA, 로버츠, BJ, DW, 곤잘레스, AJ, 하비 , PJ, 넬슨, JM, 셔우드, V., 한, 홍콩, 속도, G., Smaill, JB, 데니, WA, &amp; Showalter, HD의 티로신 키나제의 억제제. 19. 6 으니까 말인데티로신 키나제 수용체의 ErbB 가족의 돌이킬 수 억제제 등 4 anilinoquinazolines 및 4 anilinopyrido [3,4-D] pyrimidines의 nyamides. J. 메드. 화학. 49 1475-1485 (2006). </li><li> Kunii, K., 데이비스, L., Gorenstein, J., 해치, H., 야시로, M., 디 Bacco, A., Elbi, C., &amp; Lutterbach, B. FGFR2 - 증폭 위 암 세포 라인 FGFR2이 필요합니다 그리고 Erbb3의 성장과 생존을 위해 신호. 암 해상도. 68, 2340년부터 2348년까지 (2008). </li><li> 저우, W., 허, W. 맥 더못, U., Dutt, A., 시안 (西安), W., Ficarro, SB, 장, J., Sharma, SV, 브루, J., Meyerson, M., Settleman, J . &amp; 그레이, NS 공유 결합 FGFR 억제제를 만드는 구조 - 가이드 서비스입니다. 화학. Biol. 17 285-295 (2010). </li><li> PD 161,570의 FGF-1 수용체 티로신 키나제 활동 Batley, BL, 도허티, AM, Hamby, JM, 루, GH, 헬렌 켈러, P., Dahring, TK, 황, O., Crickard, K., &amp; Panek RL 억제 , 새로운 단백질- 티로신 키나제의 억제제. 생활 문화. 62 143-150 (1998). </li><li> Panek, RL, 루 GH, Klutchko, SR, Batley, BL, Darhing, TK, Hamby, JM, Hallak, H., 도허티, AM, &amp; Keiser, PD 166,285의 체외 약리 특성에 JA, 새로운 nanomolar 강력하고 광범위하게 활성 단백질 티로신 키나제의 억제제. J. Pharmacol. 특급. 군터. 283, 1433년부터 1444년까지 (1997). </li></ol>

인간 Phospho-RTK는 RTK의 인산화의 심사 변경 서양 immunoprecipitation (IP)와 같은 전통적인 방법에 경제적 빠른 대안입니다. 이 방법 사용, 42 phospho-RTKs의 상대적 수준은 MDA-MB-453 또는 카토 III 세포 lysate의 단일 샘플을 사용하여 동시에 상영되었다. 또한,이 배열 분석이 방법이 훨씬 더 시간이 효율적인 다중 IP-서부를 수행하는 것보다, 2.5 시간 체험 시간을 필요합니다. chemiluminescence 검출 방법을 채용함으로써, 일반적으로 서양 데이터를 수집하는 데 사용됩니다 어떤 외의 특수 장비가 필요 없습니다. 배열은 민감하고 리간드와 억제제 치료 모두에 의한 인산화의 변화를 비교하는 데 사용할 수 있습니다. 이 방법은 외부 대상 RTKs에 억제 선택성의 평가를 할 수 있습니다. 긍정적 조회수가 더 이러한 엘리사와 같은 양적 분석을 사용하여 평가 될 수 있습니다. 효과적으로 변경 화면에 배열을 고용하려면인산화에 주요 실험 가이드 라인 준수해야합니다. 첫째, 실험 적절한 제어 샘플을 포함해야합니다. 예를 들어, 이러한 실험에 MDA-MB-453 또는 카토 III lysates에 억제제의 효과가 같은 날에 준비 lysate 샘플에서 측정되었습니다. 같은 실험에서 수집 만이 배열 데이터는 샘플 처리의 차이, 배양 시간, pipet 기술, 또는 세탁 기술로 인해 신호의 변화를 최소화하기 위해 분석해야합니다. 캡처 항체가 병렬 동질성을 가지고 선택하지 한 이후 같은 막에 두 analytes 사이의 비교 신호 강도는 권장하지 않습니다.

<table><tbody><tr><td><a href="http://www.rndsystems.com/product_results.aspx?k=ary001" target="_blank">Human Phospho-RTK Array Kit</a></td><td><a href="http://www.rndsystems.com/product_results.aspx?k=ary001" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> R&amp; D Sytems</a></td><td>ARY001</td><td></td></tr><tr><td>아프로티닌</td><td>시그마</td><td>A6279</td><td></td></tr><tr><td>류펩틴</td><td>토크리스</td><td>1167</td><td></td></tr><tr><td>펩스타틴 A</td><td>토크리스</td><td>1190</td><td></td></tr><tr><td>MDA-MB-453 세포</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>카토 III 세포</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><a href="http://www.rndsystems.com/product_results.aspx?k=396-hb" target="_blank">재조합 인간 NRG1-베타 1/HRG1-베타 1 EGF 도메인</a></td><td>R&amp; D 시스템</td><td>396-HB-050</td><td></td></tr><tr><td><a href="http://www.rndsystems.com/product_results.aspx?k=232-fa" target="_blank">재조합 인간 FGF 산성(aa 16-155)</a></td><td>R&amp; D 시스템</td><td>232-FA-025</td><td></td></tr><tr><td>헤파린</td><td>시그마</td><td>H4784</td><td></td></tr><tr><td>HDS 029</td><td>토크리스</td><td>2646</td><td></td></tr><tr><td>PD 153035</td><td>토크리스</td><td>1037</td><td></td></tr><tr><td>PD 158780</td><td>토크리스</td><td>2615</td><td></td></tr><tr><td>PD 173074</td><td>토크리스</td><td>3044</td><td></td></tr><tr><td>PD 161570</td><td>토크리스</td><td>3724</td><td></td></tr><tr><td>PD 166285</td><td>Tocris</td><td>3785</td><td></td></tr><tr><td>BCA 분석</td><td>Pierce</td><td>23225</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수(PBS)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>피펫 및 피펫 팁</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>장갑</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>탈이온수 또는 증류수</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>플랫 팁 핀셋</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>흔들 플랫폼 셰이커</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>마이크로 원심 분리기</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>50ml</td><td></td><td></td>를 담을 수 있는 플라스틱 용기 <td>어레이 세척용</td></tr><tr><td>플라스틱 투명 시트 프로텍터</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>플라스틱 랩</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>흡수성 실험실은</td> 종이 타월을 닦습니다 <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Autoradiography cassette</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>film developer</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kodak BioMax Light Film</td><td>Carestream Health</td><td>178 8207</td><td></td></tr><tr><td>film 현상액</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Image Station 4000MM PRO</td><td>Carestream Health</td><td></td><td>Chemiluminescence imager는 필름 및 필름 대신 사용할 수 있습니다. 개발자.</td></tr><tr><td>Epson Perfection 스캐너</td><td>Epson</td><td>V750 PRO</td><td>전송 모드가 가능한 투명 어댑터가 있는 평판 스캐너</td></tr><tr><td>이미지 분석 소프트웨어</td><td>GE, WesternVision, BioRad, Adobe, NIH, Protein Simple 등</td><td></td><td>ImageQuant, ArrayVision, Western Vision, Quantity One, Photoshop, ImageJ, AlphaView 또는 기타 호환 프로그램</td></tr><tr><td>Microsoft Excel</td><td>Microsoft</td><td></td><td></td></tr><tr><td>이미지 분석 소프트웨어 및 Microsoft Excel을 실행할 수 있는 컴퓨터.</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

항체 배열을 사용하여 수용체 티로신 키나제 인산화의 프로파일 변경 - 광고

Profiling Changes in Receptor Tyrosine Kinase Phosphorylation using Antibody Arrays - ADVERTISEMENT

수용체 티로신의 키나제 (RTK) 표현과 인산화의 dysregulation이 자주 암 세포의 개발 및 전이성 확산과 연결되어 있습니다. 1-3 상당한 노력은 특정 RTKs을 타겟팅과 질병 상태와 관련된 비정상 신호 경로를 방해 개발 억제제에 집중되었습니다 . 본 연구의 4-7 목적은 RTK의 인산화에 대한 억제제의 선택 수의 효과를 측정하는 것이 었습니다. 이 연구는 단일 샘플로 동시에 다수의 RTKs에 대한 인산화의 증가 또는 감소를 모니터링 할 수있는 멤브레인 기반의 샌드위치 면역 분석법 인 인간 Phospho-RTK 배열을 사용 하였다. 이 분석에서 모두 phosphorylated과 unphosphorylated RTKs는 lysate 샘플에 존재는 니트로 셀룰로스 막 현미경 슬라이드의 크기에 걸쳐 복제에 인쇄 이산 항체에 의해 캡처됩니다. 세척 후, 배열, 안티 phospho-티로신 - 고추 냉이 퍼 옥시 데이즈 (HRP)와 incubated 아르배열에 캡처 한 phosphorylated RTKs로하는 샌드위치. 두 번째 세척 단계 후, 배열 chemiluminescent 시약과 incubated 수 있습니다. 각 배열 지점에서 생성 신호는 각 캡처 항체에 의해 구속 phospho-단백질의 양에 비례합니다. 이 실험에서, 배열은 MDA-MB-453의 유방암 또는 가토 III 위 암 세포뿐만 아니라, ErbB에 대한 선택적 억제제로 세포의 치료와 관련된 인산화의 감소를 특징하는 하나의 리간드 자극에 따라 인산화의 증가를 측정하는 데 사용 된 또는 FGF R의 가족.

프로테옴 프로파일 항체 어레이는 수많은 immunoprecipitation (IP) 서부을 수행하지 않고 수용체 티로신 키나제의 (RTK) 인산화의 변화에​​ 대한 화면으로 편리하고 비용 효율적인 방법입니다. ARY001 인간 RTK 배열은 chemiluminescence 감지를 사용하여 하나의 샘플에서 여러 RTKs의 질적 측정 할 수 있습니다.

The dysregulation of receptor tyrosine kinase (RTK) expression and phosphorylation is frequently associated with the development and metastatic spread of ...

profiling-changes-receptor-tyrosine-kinase-phosphorylation-using

Without Section

입술 (루시페라제 Immunoprecipitation 시스템)를 수행하는 기술적인 측면이 설명되어 있습니다. 전체 접근 방식은 포유 동물 세포에서 Renilla 루시페라제 (Ruc)에 융합 항원을 인코딩 키메라 유전자 표현이 포함됩니다. 원유 Ruc - 항원 추출물 다음 준비하고, 정화없이 항체를 정할 immunoprecipitation의 assays에 근무하고 있습니다.

루시페라제 Immunoprecipitation 시스템 (입술)에 의해 항체 프로파일

모래 바닥 웨스턴 조직 homogenate 또는 추출 주어진 샘플에서 특정 단백질을 감지하는 데 사용되는 분석 기술입니다.

웨스턴 모래 바닥 : 샘플 준비를 탐지하기 위해

kisspeptin 수용체 (KISS1R)에 돌연변이가 환자의 생식 장애와 관련된 있습니다. 여기 immunoprecipitation과 서양 얼룩에 의한 수용체의 저하 경로를 특성화 KISS1R의 GC 풍부한 순서뿐만 아니라 KISS1R 구조의 사용으로 관심 변이를 소개하는 방법을...

생식기 장애와 인간에서 확인된 GC 풍부한 KISS1 수용체 유전자 시퀀스에 돌연변이 돌연변이 유발 및 분석

안달 기반 기자 점점 라이브 세포 키나제와 인산 가수 분해 효소 활동을 모니터링하는 데 사용됩니다. 여기 대상 인산화에서 세포주기 종속 변화를 평가하기 위해 안달 기반의 기자를 사용하는 방법에 대한 방법을 설명합니다.

안달 Ratiometric하여 세포주기를 통해 키나제와 인산 가수 분해 효소 활동을 모니터링

류신 리치 반복 키나제 2 큰 multidomain의 키나제이며, 돌연변이가있는 파킨슨병의 가​​장 흔한 유전적 원인이됩니다. 이 단백질 키나제의 활동 분석은이 단백질의 생물학과 장애를 이해하는 중요한 도구로 입증되었습니다. 본...

LRRK2의 키나제 활동 시금 체외에서</em

무기 표면에 단백질이 아닌 구체적인 흡착을 모니터링하는 고체 nanopores를 사용하는 방법을 설명합니다. 방법은 실시간과 단일 분자 수준에서 탐색할 수 흡착 수있게 저항 펄스의 원칙을 사용합니다. 하나의 단백질 흡착 과정 멀리 평형에서이기 때문에, 우리는 양적 단백질 흡착의 상수 명백한 처음 주문 반응 속도의 결정뿐만 아니라 및 Langmuir 흡착 상수 사용, 합성 nanopores의 병렬 배열의 고용을 제안합니다.

고체 Nanopores와 모니터링 단백질 흡착

우리는 - 수용체 제공 여러 FC의 표현 형광 항원 코팅 구슬과 monocytic 세포 라인을 활용하여 표준의 수용체 사용량과 phagocytic 활동 결정하고, 임상 샘플에서 항원에 특정한 항체의 phagocytic 활동을 결정하기 위해 높은 처리량 흐름 cytometric 분석을 제시 관심의 항원에 대한 재현할 패션.

임상 항체 샘플 Phagocytic 활동 결정

시냅스에서 신경 전달 물질 수용체 클러스터의 풍부한 강력히 시냅스 강도에 영향을 미칩니다. 이 방법에서는 단일 시냅스 해상도로 가로, 세로, 높이로 fluorescently-라벨이 신경 전달 물질 수용체를...

에서 시냅틱 형광의 자동 부량<em&gt; C. elegans</em

우리는 종양 대상 세포와 incubated 때 T 세포의 세포 독성을 측정 할 수있는 단일 셀 높은 처리량 분석을 설명합니다. 이 방법은 spatially 정의 비율에서 T 세포와 대상 세포를 한정하는 하위 nanoliter 우물 (~ 100,000 우물 / 배열)의 조밀 한, 탄성 배열을 사용하고 이펙터 - 대상 활용 및 후속 apoptosis를 모니터링하는 형광 현미경에 연결된다.

T 세포 양적 높은 처리량 단일 세포 세포 독성 분석

우리는 개발 및 저렴한 비용에 즉시 사용할 수 각지에서 만들어진 작은 chemostats의 소형 풋 프린트 배열을 확인. 생리학 및 실험 진화 결과는 큰 볼륨 chemostats과 비슷했다. ministat 배열은 기존 chemostat 실험, 기능 유전체학, 화학 심사 어플리케이션을위한 컴팩트 저렴하고 접근 할 플랫폼을 제공합니다.

다중 Chemostat 배열의 설계 및 사용

배우세요 Human Phospho-RTK 배열을 사용하여 암 세포주에서 수용체 티로신 키나제 인산화 변화를 다중 분석하는 방법. 이 기법은 표적 치료제 효능 평가와 세포 신호 전달 메커니즘 연구에 활용됩니다.

항체 배열을 사용하여 수용체 티로신 키나제 인산화의 프로파일 변경 - 광고

더 많은 동영상 탐색