Name: 쥐의 레이저 도플러 Flowmetry 안내와 허혈성 뇌졸중에 대한 엔도 테린-1 유도 중간 뇌 동맥 폐색 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-02-16T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: 학습하세요 쥐의 레이저 도플러 유량측정을 활용한 엔도테린-1 유도 중간 뇌동맥 폐색 모델로 허혈성 뇌졸중 연구 방법을 익히세요. 이 프로토콜은 덜 침습적인 수술 기법과 혈류 모니터링 절차를 상세히 설명합니다.

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이 작품은 미국 심장 협회 상급 동남아 계열 (09GRNT2060421), 미국 의학 협회에서와 플로리다 임상 병진 과학 연구소의 대학에서 보조금에 의해 지원되었다. 아담 메카는 NIH / NINDS, NRSA predoctoral 동료 (F30 NS-060335)입니다. 로버트 Regenhardt은 고혈압의 플로리다 종합 교육 프로그램의 대학 (T32 HL-083810)에서 predoctoral 교제 지원을 받았습니다.

이 프로토콜은 플로리다 대학 기관 동물 케어 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 승인되고 준수는 &quot;케어에 대한 가이드 및 실험실 동물의 사용&quot;(여덟째 판, 과학 국립 아카데미, 2011)되었다. 자료 <ol><li> 동물 : 수술시 250~300그램 무게 여덟 주 된, 남성, Sprague Dawley 쥐 (찰스 강 (Charles River)의 농장, 윌 밍턴, 미국 MA,). </li><li> 마취 <ol class="lalpha"><li> 흡입 마취 시스템 (VetEquip 주식회사, Pleasanton, CA, USA) </li><li> Isoflurane 마취 (박스터의 조제, 디어 필드, IL, USA) </li></ol></li><li> Stereotaxic 시스템 (데이비드 Kopf 기기, Tujunga, CA, USA) <ol class="lalpha"><li> 작은 동물 stereotaxic 시스템 </li><li> 쥐에 대한 비 파열 귀 바 </li><li> 쥐에 대한 가스 마취 헤드 홀더 </li></ol></li><li> 온도 조절<ol class="lalpha"><li> BAT-12 microprobe 온도계 (세계 정밀 계측기, 주식회사, 사라 소타, FL, USA) </li><li> T / PUMP, TP600 열 담요 (Gaymar 산업 주식회사, 오차드 파크, NY, USA) </li></ol></li><li> 수술기구 <ol class="lalpha"><li> 메스 핸들과 # 11 블레이드 아이리스 포셉, Graefe 포셉, 드라이버 겸자의 견인기,, 26 게이지 바늘 beveled (세계 정밀 계측기, 주식회사, 사라 소타, FL, USA)을 갖춘 10 μl 주사기 </li><li> Micromotor 훈련과 stereotaxic 홀더, 전형적인 Stereotaxic 주입기 (Stoelting, 우드 데일, IL, USA) </li><li> 1.0 mm 원형 드릴 버, 1.0 mm 역 콘 드릴 버 (Roboz 외과 인스트루먼트 (주), 주식회사, 게이스 버그, MD, USA) </li></ol></li><li> 외과 용품 <ol class="lalpha"><li> 2.4 mm 축 길이, 21 게이지 가이드 캐뉼라 [긴 받침대 아래에 4mm]와 캐뉼라 더미 (플라스틱 하나 로어 노크와 함께 나사에게 0-80 X 32분의 3 마운트, VA, USA) </li><li> 제트 의치 아크릴, 액체 (랭 치과 제조 유한 주식회사, 휠링, IL, USA) </li><li> 3.0 나일론 봉합 (오아시스 (Oasis), Mettawa, IL, USA) </li><li> 면봉, Puralube 눈 연고 (피셔 과학, 피츠버그, PA, USA) </li><li> 전기 헤어 가위 (Oster, 섭리, RI, USA) </li></ol></li><li> 화학 제품 <ol class="lalpha"><li> 엔도 테린-1 (미국 펩타이드, 서니 베일, CA, USA) </li><li> Chlorhexidine 2% (Agrilabs, 세인트 조셉, MO, USA) </li><li> Buprenorphine HCL (Hospira 주식회사, 레이크 포레스트, IL, USA) </li></ol></li><li> 시각화 장비 <ol class="lalpha"><li> 수술 현미경 (Seiler 악기 및 제조, 세인트 루이스, MO, USA) </li><li> 광섬유 조명기 (TechniQuip 공사, 리버모어, CA, USA) </li></ol></li><li> 레이저 도플러 flowmetry 시스템 (ADInstruments 주식회사, 콜로라도 스프링스, CO, USA) <ol class="lalpha"><li> 세인트andard 연필 프로브 </li><li> 프로브 홀더 </li><li> 혈액 유량계 </li><li> LabChart 7 Powerlab 30분의 4 </li></ol></li><li> 경색 볼륨 측정 <ol class="lalpha"><li> 쥐 뇌 매트릭스 (Zivic - 밀러 연구실., 주식회사, 앨리슨 공원, PA, USA) </li><li> 2,3,5 - triphenyltetrazolium 염화은 (시그마 - 알드리치 (주) 세인트 루이스, MO, USA) PBS에 0.​​05 %로 희석 </li><li> 평판 스캐너 (엡손 정보를 완벽 V30, 엡손 아메리카, 주식회사, 롱 비치, CA, USA) </li><li> 이미지 J 소프트웨어 (ImageJ 1.42q 소프트웨어, 건강의 미국 국립 연구소, 베데스다, MA, USA) </li></ol></li></ol> 1. 사전 수술 단계 <ol><li> 수술에 앞서, 쥐가 물과 쥐 수유에 무료로 액세스 할 수있는 12시 12분 어두운 / 밝은주기에 따라 자리 잡고 있습니다. </li><li> 마취는 뒤쪽 동물의 발자국이 핀치에 인출 더 이상 쥐까지 유도 챔버 100 % O 2 기체 혼합물의 4% isoflurane으로 유도하고 있습니다. </li><li>발효 기술은 멸균 장갑, 멸균 수술 악기 및 살균 수술 드레이프 (11)의 사용을 포함하여이 절차를 수행하는 동안 유지되어야합니다. </li><li> 머리의 왕관은 전기 헤어 가위로 면도 있습니다. </li><li> 쥐가 온도 조절 운영면 (열 담요)에 누워 흡수 패드에서 발생하기 쉬운 위치에 배치됩니다. </li><li> 머리는 가스 마취 얼굴 마스크의 위치로 시작 stereotactic 장치에 저장됩니다. </li><li> 다음으로 귀 바는 삽입 강화하고 있습니다. </li><li> 절차 마취 동안 백퍼센트 O 2 기체 혼합물에서 isoflurane 2퍼센트로 유지됩니다. </li><li> 윤활유 안과 연고는 양쪽 눈에 적용되며, 눈꺼풀이 수술하는 동안 눈 건조를 방지하기 위해 폐쇄됩니다. </li><li> 직장 온도 프로브는 ± 0.5은 ° C. 37 일정한 동물 코어 온도를 유지하기 위해 삽입 </li><li> stereotaxic에 단단히 개최 된 머리장치 외과 영역은 2 % chlorhexidine과 염분을 세 번 교대로 세안합니다. </li></ol> 2. 외과 단계 <ol><li> 메스를 사용 중간 선 절개는 귀 (우수한 nuchal 라인) 사이에 눈의 가장 꼬리 부분 (nasion)에서 개관 놓인 피부에 이루어집니다. </li><li> 피부는 3 다음 불독 겸자 측면 후퇴하고 있습니다. </li><li> 결합 조직은 여러 구조는 명확하게 볼 수 있도록 건조 면봉을 사용하여 두개골에서 제거됩니다. 이러한 bregma, 코로나 봉합, 오른쪽 측면 두개골 능선 등이 있습니다. 면봉은 수술 현장에서 피를 제거하는 데 사용됩니다. </li><li> 수술 현미경을 사용하여 bregma이 위치하고 있으며, 1.0 mm의 원형 드릴 버가 bregma에서 청산하고 나면 아무것도 남지 될 때까지 stereotaxic manipulators가 조정됩니다. </li><li> 드릴 버 그 다음 1.6 mm 앞쪽과 bregma에 측면 5.2 mm로 이동합니다. </li><li> 두개골을 관통 버 구멍이 cann에 교련입니다울라 배치 (그림 1). 초과 파편과 피가 지속적으로 면봉을 사용하여 지워집니다. </li></ol> 이 시점에서, 가이드 캐뉼라를 삽입 할 수 있습니다 (7 단계) 또는 버 구멍을 통해 직접 동부 표준시-1 주입은 (16 단계로 바로 진행합니다)을 수행 할 수 있습니다. <ol start="7"><li> 3 장착 나사에 대한 다음 버 구멍 1.0 mm 역 콘 드릴 버 (그림 1)를 사용하여 두개골의 부분적인 두께를 뚫고있다. 한 홀은 코로나 봉합과 시상 봉합에 측면 1-2mm에 앞 1-2밀리미터에 대해 각 정면 뼈에 구멍을 뚫었 있습니​​다. 한 홀은 코로나 봉합 및 가이드 캐뉼라 버 홀에 ipsilateral 시상 봉합에 측면 2-3mm에 뒤 2~3mm에 대해 정수리 뼈에 구멍을 뚫었 있습니​​다. 세 0-80 X 32분의 3 장착 나사는 이러한 버 구멍에 배치되어 캐뉼라에 쥐고 시멘트에 대한 지원을 제공합니다. 나사는 경질의 문제를 손상하지로 2 ~ 3 회전하므로 고급이어야합니다. </lI&gt; <li> 가이드 캐뉼라는 stereotaxic 캐뉼라 홀더에 배치되어 있으며 bregma이 자리 잡고 있습니다. </li><li> 가이드 캐뉼라는 bregma에서 청산하고 나면 아무것도 남지 될 때까지 stereotaxic manipulators가 조정됩니다. 캐뉼라는 1.6 mm 앞쪽과 bregma에 측면 5.2 mm에 위치한 버 구멍으로 이동됩니다. </li><li> 마지막으로, 가이드 캐뉼라는 bregma에 복부 4.5 mm의 마지막 끝의 위치와 버 구멍으로 낮아합니다. </li><li> 레이저 도플러 흐름 프로브 배치 (선택 사항) <ol class="lalpha"><li> LDF를 사용하여 뇌성 혈액의 흐름을 모니터링하기 위해, 프로브 홀더는 치과 시멘트와 가이드 캐뉼라 affixing하기 전에 위치로 배치 할 수 있습니다. </li><li> 프로브 홀더베이스는 작은 쐐기 모양 탭을 제외하고 받침대와 플러시 손질하고 있습니다. </li><li> 프로브 홀더는 다음 가이드 캐뉼라를 뒤쪽과 medially 지향 탭 (그림 1)과 측면 두개골 능선 바로 안쪽에 위치해 있습니다. </li><li> 프로브 홀더 및 guide 캐뉼라는 치과 시멘트를 사용하여 함께 부착되어 있습니다. </li></ol></li><li> 치과 시멘트 그런 다음 장소에서 캐뉼라를 확보하는 데 사용됩니다. 시멘트는 세 개의 나사와 접촉하고 캐뉼라의 전체 기반을 둘러싸고 있습니다. </li><li> 시멘트 전에 캐뉼라 소유자의 제거에 완전히 건조해야합니다. 이 약 5 분 정도 소요됩니다. </li></ol> 다음 단계 후, 수술 절개를 폐쇄 할 수 있으며 캐뉼라 더미는 가이드 캐뉼라로 실수 할 수 있습니다. 또한, 동부 표준시-1 유도 MCAO는 캐뉼라 주입 수술에서 회복 기간 후 쥐에서 수행 할 수 있습니다. 이 방법의 경우, 단계 19 다음을 수행 할 수 있어야하며 단계 14-18은 나중에 수행 할 수 있습니다. 같은 수술하는 동안 가이드 캐뉼라 주입 및 ET-1 주사를 수행하려면 단계 14 다음 수행해야합니다. <ol start="14"><li> 주입 주사기는 동부 표준시 - 1로드 (PBS 80 μM로 희석) 한 후 stereotaxic 분사기에 장착되어 있습니다. </li><li>바늘 끝이 가이드 캐뉼라의 가장자리에 청산하고 나면 아무것도 남지 될 때까지 stereotaxic manipulators가 조정됩니다. </li><li> 바늘 끝이 가이드 캐뉼라의 가장자리에 복부 17.2 mm의 위치에 가이드 캐뉼라를 통해 인하된다. 가이드 캐뉼라를 사용하지 않는 경우, 바늘 끝이 bregma에서 청산하고 나면 아무것도 남지과 bregma에 복부 위치 8.7 mm로 버 구멍을 통해 인하된다. </li><li> 80 μM ET1 3 μl은 분 당 1 μl의 속도로 주입된다. </li><li> 주입 천천히 제거 후 완전하고 후 주사기은 3 분 동안 자리에 남아 있습니다. </li><li> 절개는 3.0 나일론 봉합사와 캐뉼라 더미가 캐뉼라로 엉망입니다과 함께 문을 닫습니다. </li><li> 적절한 진통제의 복용 (0.05-0.1 밀리그램 / kg에서 즉, buprenorphine)은 복구 기간 동안 통증과 불편 함을 최소화하기 위해 수술 후에 사용되어야합니다. </li><li> 쥐가 수술 방에서 제거하고 부드러운 음식과 물을 무료로, 쉽게 접근 저체온증을 방지하기 위해 따뜻한, 드라이 복구 영역에 배치됩니다. </리&gt; </ol>

<ol><li>Stroke--1989. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+on+stroke+prevention%2C+diagnosis%2C+and+therapy.+Report+of+the+WHO+Task+Force+on+Stroke+and+other+Cerebrovascular+Disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Recommendations on stroke prevention, diagnosis, and therapy. Report of the WHO Task Force on Stroke and other Cerebrovascular Disorders.</a> Stroke. 20, 1407-1431 (1989).</li>
<li>Lloyd-Jones, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+disease+and+stroke+statistics--2009+update%3A+a+report+from+the+American+Heart+Association+Statistics+Committee+and+Stroke+Statistics+Subcommittee%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart disease and stroke statistics--2009 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee.</a> Circulation. 119, 480-486 (2009).</li>
<li>Mohr, J. P., Gautier, J. C., Hier, D., Stein, R. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMohr%2C+JP+%22Stroke%3A+pathophysiology%2C+diagnosis%2C+and+management%22">Stroke: pathophysiology, diagnosis, and management</a>. Barnett, H. J. M., Stein, B. M., Mohr, J. P., Yatsu, F. M. , Churchill Livingstone. New York. 377-450 (1986).</li>
<li>Robinson, M. J., Macrae, I. M., Todd, M., Reid, J. L., McCulloch, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+of+local+cerebral+blood+flow+to+pathological+levels+by+endothelin-1+applied+to+the+middle+cerebral+artery+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Reduction of local cerebral blood flow to pathological levels by endothelin-1 applied to the middle cerebral artery in the rat.</a> Neurosci. Lett. 118, 269-272 (1990).</li>
<li>Sharkey, J., Ritchie, I. M., Kelly, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perivascular+microapplication+of+endothelin-1%3A+a+new+model+of+focal+cerebral+ischaemia+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Perivascular microapplication of endothelin-1: a new model of focal cerebral ischaemia in the rat.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 13, 865-871 (1993).</li>
<li>O'Neill, M. J., Clemens, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+of+focal+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Protoc.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Rodent models of focal cerebral ischemia.</a> Curr. Protoc. Neurosci. Chapter 9 (Unit 9), (2001).</li>
<li>Mecca, A. P., O'Connor, T. E., Katovich, M. J., Sumners, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candesartan+pretreatment+is+cerebroprotective+in+a+rat+model+of+endothelin-1-induced+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Candesartan pretreatment is cerebroprotective in a rat model of endothelin-1-induced middle cerebral artery occlusion.</a> Exp. Physiol. 94, 937-946 (2009).</li>
<li>Braeuninger, S., Kleinschnitz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+of+focal+cerebral+ischemia%3A+procedural+pitfalls+and+translational+problems%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Transl.+Stroke+Med%22%5BJournal%5D)">Rodent models of focal cerebral ischemia: procedural pitfalls and translational problems.</a> Exp. Transl. Stroke Med. 1, 8(2009).</li>
<li>Tomsick, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+thrombolysis+for+acute+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vasc.+Interv.+Radiol%22%5BJournal%5D)">Intravenous thrombolysis for acute ischemic stroke.</a> J. Vasc. Interv. Radiol. 15, 67-76 (2004).</li>
<li>Olsen, T. S., Lassen, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dynamic+concept+of+middle+cerebral+artery+occlusion+and+cerebral+infarction+in+the+acute+state+based+on+interpreting+severe+hyperemia+as+a+sign+of+embolic+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">A dynamic concept of middle cerebral artery occlusion and cerebral infarction in the acute state based on interpreting severe hyperemia as a sign of embolic migration.</a> Stroke. 15, 458-468 (1984).</li>
<li>Pritchett-Corning, K. R., Luo, Y., Mulder, G. B., White, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+rodent+surgery+for+the+new+surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Principles of rodent surgery for the new surgeon.</a> J. Vis. Exp. (47), e2586(2011).</li>
<li>Gonzalez, C. L., Kolb, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+different+models+of+stroke+on+behaviour+and+brain+morphology%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A comparison of different models of stroke on behaviour and brain morphology.</a> Eur. J. Neurosci. 18, 1950-1962 (2003).</li>
<li>Ansari, S., Azari, H., McConnell, D. J., Afzal, A., Mocco, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraluminal+middle+cerebral+artery+occlusion+%28MCAO%29+model+for+ischemic+stroke+with+laser+doppler+flowmetry+guidance+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke with laser doppler flowmetry guidance in mice.</a> J. Vis. Exp. (51), e2879(2011).</li>
<li>Sharkey, J., Butcher, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+of+an+experimental+model+of+stroke+produced+by+intracerebral+microinjection+of+endothelin-1+adjacent+to+the+rat+middle+cerebral+artery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Characterisation of an experimental model of stroke produced by intracerebral microinjection of endothelin-1 adjacent to the rat middle cerebral artery.</a> J. Neurosci. Methods. 60, 125-131 (1995).</li>
<li>Macrae, I. M., Robinson, M. J., Graham, D. I., Reid, J. L., McCulloch, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelin-1-induced+reductions+in+cerebral+blood+flow%3A+dose+dependency%2C+time+course%2C+and+neuropathological+consequences%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Endothelin-1-induced reductions in cerebral blood flow: dose dependency, time course, and neuropathological consequences.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 13, 276-284 (1993).</li>
<li>Mecca, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebroprotection+by+angiotensin-%281-7%29+in+endothelin-1-induced+ischaemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cerebroprotection by angiotensin-(1-7) in endothelin-1-induced ischaemic stroke.</a> Exp. Physiol. 96 (1-7), 1084-1096 (2011).</li>
<li>Fisher, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+of+the+stroke+therapy+academic+industry+roundtable+preclinical+recommendations%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Update of the stroke therapy academic industry roundtable preclinical recommendations.</a> Stroke. 40, 2244-2250 (2009).</li>
</ol>

관심 없음 충돌이 선언 없습니다.

동부 표준시-1 유도 MCAO는 정기적으로 여러 쥐 종자에 사용되는 실험 허혈성 뇌졸중의 오래된 모델입니다. 이 모델 5, 14을 사용하면 이러한 쥐 변형, 동물 연령, 체온, 마취 방법, 그리고 연산자 전문 등 많은 변수가 경색 권 증가 다양성 될 수 있습니다. 그러나, 몇 가지 조사는이 모델의 장점은 상대적으로 비 침습적 방식, 동부 표준시 - 1 뇌성 혈액 흐름의 선량 반응, 그리고 의식 쥐 14, 15 동부 표준시-1의 주입에 의해 모두 마취를 방지 할 수있는 능력을 포함하는 것으로 나타났습니다. 그것은 문학에서 사용 쥐 변형 및 나이에 많은 차이가 있다는 것을 주목할이며 다른 stereotaxic 좌표가이 변수에 따라보고되는 놀라운 일이 아닙니다. 우리 프로토콜에 사용되는 좌표는 팔주 세의 남자 Sprague Dawley 쥐에 최적화되어 있습니다. 이 변형, 성별, 또는 연령에서 조금이라도 벗어나면 가능성이 intracerebral이 주입 필요합니다염료 이온이 절차의 유효 기간...

<table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td><ol><li> 동물 : 수술시 250~300그램 무게 여덟 주 된, 남성, Sprague Dawley 쥐 (찰스 강 (Charles River)의 농장, 윌 밍턴, 미국 MA,). </li><li> 마취 <ol class="lalpha"><li> 흡입 마취 시스템 (VetEquip 주식회사, Pleasanton, CA, USA) </li><li> Isoflurane 마취 (박스터의 조제, 디어 필드, IL, USA) </li></ol></li><li> Stereotaxic 시스템 (데이비드 Kopf 기기, Tujunga, CA, USA) <ol class="lalpha"><li> 작은 동물 stereotaxic 시스템 </li><li> 쥐에 대한 비 파열 귀 바 </li><li> 쥐에 대한 가스 마취 헤드 홀더 </li></ol></li><li> 온도 조절 <ol class="lalpha"><li> BAT-12 microprobe 온도계 (세계 정밀 계측기, 주식회사, 사라 소타, FL, USA) </li><li> T / PUMP, TP600 열 담요 (Gaymar 산업 주식회사, 오차드 파크, NY, USA) </li></ol></li><li> 수술기구 <ol class="lalpha"><li> 메스 핸들과 # 11 블레이드 아이리스 포셉, Graefe 포셉, 드라이버 겸자의 견인기,, 26 게이지 바늘 beveled (세계 정밀 계측기, 주식회사, 사라 소타, FL, USA)을 갖춘 10 μl 주사기 </li><li> Micromotor 훈련과 stereotaxic 홀더, 전형적인 Stereotaxic 주입기 (Stoelting, 우드 데일, IL, USA) </li><li> 1.0 mm 원형 드릴 버, 1.0 mm 역 콘 드릴 버 (Roboz 외과 인스트루먼트 (주), 주식회사, 게이스 버그, MD, USA) </li></ol></li><li> 외과 용품 <ol class="lalpha"><li> 2.4 mm 축 길이, 21 게이지 가이드 캐뉼라 [긴 받침대 아래에 4mm]와 캐뉼라 더미 (플라스틱 하나 로어 노크, VA, USA)와 나사에게 0-80 X 32분의 3 마운트 </li><li> 제트 의치 아크릴, 액체 (랭 치과 제조 유한 주식회사, 휠링, IL, USA) </li><li> 3.0 나일론 봉합 (오아시스 (Oasis), Mettawa, IL, USA) </li><li> 면봉, Puralube 눈 연고 (피셔 ScientifiC, 피츠버그, PA, USA) </li><li> 전기 헤어 가위 (Oster, 섭리, RI, USA) </li></ol></li><li> 화학 제품 <ol class="lalpha"><li> 엔도 테린-1 (미국 펩타이드, 서니 베일, CA, USA) </li><li> Chlorhexidine 2% (Agrilabs, 세인트 조셉, MO, USA) </li><li> Buprenorphine HCL (Hospira 주식회사, 레이크 포레스트, IL, USA) </li></ol></li><li> 시각화 장비 <ol class="lalpha"><li> 수술 현미경 (Seiler 악기 및 제조, 세인트 루이스, MO, USA) </li><li> 광섬유 조명기 (TechniQuip 공사, 리버모어, CA, USA) </li></ol></li><li> 레이저 도플러 flowmetry 시스템 (ADInstruments 주식회사, 콜로라도 스프링스, CO, USA) <ol class="lalpha"><li> 표준 연필 프로브 </li><li> 프로브 홀더 </li><li> 혈액 유량계 </li><li> LabChart 7 Powerlab 30분의 4 </li></ol></li><li> 경색 볼륨 측정 <ol class="lalpha"><li> 쥐의 뇌매트릭스 (Zivic - 밀러 연구실., 주식회사, 앨리슨 공원, PA, USA) </li><li> 2,3,5 - triphenyltetrazolium 염화은 (시그마 - 알드리치 (주) 세인트 루이스, MO, USA) PBS에 0.​​05 %로 희석 </li><li> 평판 스캐너 (엡손 정보를 완벽 V30, 엡손 아메리카, 주식회사, 롱 비치, CA, USA) </li><li> 이미지 J 소프트웨어 (ImageJ 1.42q 소프트웨어, 건강의 미국 국립 연구소, 베데스다, MA, USA) </li></ol></li></ol></td></tr></tbody></table>

쥐의 레이저 도플러 flowmetry 안내와 허혈성 뇌졸중에 대한 엔도 테린-1 유도 중간 뇌 동맥 폐색 모델

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

뇌졸중은 2009 년 1, 2에 미국에서 추정 70,000,000,000달러 비용이, 장애 세계에서 사망의 세 번째 주요 원인의 최고의 원인입니다. 대뇌 국소 빈혈의 여러 모델은 뇌졸중의 인간의 조건을 모방하기 위해 개발되었습니다. 그것은 중간 대뇌 동맥 (MCA) 영역 3 허혈성 손상에서 모든 스트로크 결과의 80 %에있는을 제안하고 있습니다. 1990 년대 초, 엔도 테린-1 (동부 표준시 - 1) (4) craniotomy 후 MCA의 표면에 직접 인접를 적용하여 국소 빈혈을 유발하는 데 사용되었다. 나중에,이 모델은 초점 뇌성 국소 빈혈을 생산하기 위해 MCA에 동부 표준시-1 인접의 stereotaxic 주사를 사용하여 5 바뀌 었습니다. 이 모델의 주요 장점은 신속하게 절차를 수행 할 수있는 능력, 동부 표준시 - 1의 복용량을 변경하여 동맥 수축을 제어 할 수있는 기능 제공, 뇌에 혈액을 공급뿐만 아니라 점차적으로 reperfusi extracranial 혈관을 조작 할 필요없이 포함가격에있는 더 밀접하게 5-7 인간 reperfusion을 모방 한 것이 었지요. 한편, 동부 표준시-1 모델은 craniotomy의 필요성뿐만 아니라, 뇌졸중 볼륨 8 높은 가변성을 포함 단점이 있습니다. 이 변화는 동부 표준시-1 주입하는 동안 대뇌 국소 빈혈을 확인하기 위해 레이저 도플러 flowmetry (LDF)의 사용을 줄일 수 있습니다. 스트로크 변화에 영향을 미칠 요소는 주입과 동부 표준시-1의 배치의 정밀도가 6을 사용하여 포함되어 있습니다. 또 다른 중요한 고려 사항은 비록 reperfusion 인간 뇌졸중의 일반적인 발생 점입니다, 동부 표준시-1 유도 MCAO에 대한 가림의 기간은 밀접하게 인간 뇌졸중으로 많은 환자가 폐색 9에 따라 일 시간 동안 부분 reperfusion을 가지고있는 것을 모방해서는 안됩니다 10. 이 프로토콜은 상세 쥐의 허혈성 뇌졸중에 대한 동부 표준시-1 유도 MCAO 모델에 대해 설명합니다. 또한 절차를 통해 특별 고려 사항과 잠재적 인 단점에 관심을 끌기합니다.

1. 포스트 사설 신경 평가 동물이 의식을 회복 한 후 테스트 다양한 종류의 균형, 그립 강도, 동물의 발자국 배치, 자세가 비대칭과 등산 계단 등의 신경 결손을 평가하는 데 사용할 수 있습니다. 해바라기 씨 작업은 모터와 경색 볼륨 7, 12 중요한 상관 관계가 감각 기능의 총 평가입니다. 열기와 5 해바라기 씨 소모하는 동안이 작업에는 쥐가 시간이 초과되어 있습니다. 다섯 씨는 비어있는, 건조, 플라스틱 케이지 중 하나를 코너에 배치되어 씨앗을 조작 소요 시간이 기록됩니다. 또한, 모든 씨앗이 열리고 소비 한 후 케이지에서 쉘 조각의 번호가 기록됩니다. 더 신경 적자와 쥐가 씨앗을 열고 소비하는 데 시간이 오래 걸릴 더 많은 조각으로 껍질을 깰 수 있습니다. 이 작업을하지 공식적인 부분이지만, 자주 mishandling와 해바라기 씨의 하락을 관찰하기 쉽다실험 뇌졸중 후 쥐가 s입니다. 이 열 시도하는 동안 껍질 물고 주로 한 앞발, 그리고 효과의 사용이 포...

대뇌 국소 빈혈의 여러 동물 모델은 스트로크의 인간의 조건을 시뮬레이션하기 위해 개발되었습니다. 이 프로토콜은 쥐의 허혈성 뇌졸중에 대한 엔도 테린-1 (동부 표준시-1) 유발 중간 뇌동맥 폐색 (MCAO) 모델에 대해 설명합니다. 또한 중요한 고려 사항, 장점,이 모델의 단점은 설명되어 있습니다.

쥐의 레이저 도플러 Flowmetry 안내와 허혈성 뇌졸중에 대한 엔도 테린-1 유도 중간 뇌 동맥 폐색 모델

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

이 비디오 프로토콜은 쥐에서 레이저 도플러 염증 유도를 사용한 허혈성 뇌졸중에 대한 내피 1 유도 중대뇌동맥 폐색 모델을 설명합니다. 이것은 그림과 같이 여러 랜드마크를 관찰하고 가이드 캐뉼라를 사용하거나 사용하지 않고 버 구멍을 통해 내피 하나를 주입함으로써 달성됩니다. 뇌허혈의 여러 가지 방법이 인간의 뇌졸중 상태를 모델링하기 위해 개발되었습니다.한 가지 모델은 두개골 종양 후 중대뇌동맥에 인접한 뇌뇌에 강력한 혈관 수축 내피 1 또는 81을 주입하는 것입니다. ET 1 스트로크 모델의 주요 장점은 수술을 신속하게 수행할 수 있고 내강내, 필라멘트 유도 중대뇌동맥 폐색과 같은 다른 모델에 비해 덜 침습적이라는 것입니다. 그러나 ET one stroke 모델은 개두술의 필요성과 뇌졸중 용적의 높은 가변성을 포함하여 몇 가지 단점이 있습니다.이 비디오는 쥐의 허혈성 뇌졸중에 대한 ET 1뇌졸중 모델을 단계적으로 보여줍니다. 또한 이 절차의 일반적인 함정과 몇 가지 특별한 고려 사항에 대해서도 설명합니다. 시작하겠습니다.마취는 유도 챔버에서 산소 중 4% ISO 불소로 유도되고 수술 중 2%로 유지됩니다.쥐를 마취한 후 전기 이발기로 정수리에서 머리카락을 제거합니다. 그런 다음 쥐를 정위 장치에 머리를 고정한 상태에서 온도 조절이 가능한 작동 표면에 놓인 거즈 패드 위에 엎드린 자세로 놓습니다. 그런 다음 이어바를 조이고 조정합니다.윤활제 안과 연고는 눈의 건조를 방지하기 위해 양쪽 눈에 도포됩니다. 수술 과정에서 두피는 클로르헥시딘 용액과 멸균 식염수로 세척됩니다. 정중선 절개는 눈의 가장 어린아이 부분 사이에서 귀 사이까지 칼바륨 위에 있는 피부에 이루어집니다.다음으로 피부를 측면으로 후퇴시킵니다. 마른 면봉은 결합 조직을 측면으로 이동하는 데 사용되므로 뼈 랜드마크를 관찰할 수 있습니다. 그런 다음 드릴을 전방 1.6mm, 측면 5.2mm 상대 토레마로 이동합니다.그런 다음 이 위치에 작은 버 구멍을 뚫어 경막을 손상시키지 않고 두개골을 관통해야 합니다. 다음으로, 드릴을 약 3-4mm 떨어진 곳으로 이동하여 세 개의 얕은 구멍을 뚫습니다. 이는 3개의 장착 앵커 나사의 배치 역할을 하며, 가이드 캐뉼라의 시멘트 고정을 지지하는 3개의 장착 나사를 부분적으로 조입니다.스테인리스 스틸 21 게이지 가이드입니다. 그런 다음 캐뉼라를 bgma 아래 4.5mm의 버 구멍에 삽입합니다. 그런 다음 레이저 도플러 측광 프로브 홀더를 가이드 캐뉼라 바로 뒤쪽과 측면 두개골 내측에 배치합니다.Ridge Dental 시멘트는 캐뉼라와 프로브 홀더를 제자리에 고정하는 데 사용됩니다. 시멘트가 피부를 피하는 세 개의 나사와 모두 접촉하도록 시멘트를 형성하는 것이 중요합니다. 그런 다음 시멘트가 완전히 건조된 후 정위 암 부착물을 제거합니다.중대뇌동맥 혈류를 기록합니다. 그런 다음 레이저 도플러 염증 프로브를 프로브 홀더에 놓습니다. 26 게이지 Hamilton 주사기에는 새로운 80 마이크로몰 내피 주사기가 장전되어 자동 주입 펌프에 장전됩니다.스테레오 어택을 사용하여 Hamilton 주사기 바늘이 가이드 캐뉼라의 가장자리에 닿을 때까지 내립니다. 그런 다음 바늘은 가이드 캐뉼러와 3 마이크로 리터의 내피를 통해 복부로 17.2mm 내려갑니다. 하나는 레이저 도플러 측광법을 사용하여 분당 1마이크로리터의 속도로 주입됩니다.혈류가 기준선에서 50% 이상 감소하는 것을 볼 수 있습니다. 시간이 지나면 점차 기준 값으로 돌아갑니다. 주입이 완료된 후 몇 분 후에 바늘이 가이드 캐뉼라에서 부드럽게 빼냅니다.마지막으로, 상처는 봉합사로 봉합하고 캐뉼라를 덮습니다. 뇌졸중 결손의 정도를 평가하기 위해 다양한 신경학적 검사를 수행할 수 있습니다. 이것은 해바라기씨 먹기 작업의 예입니다.쥐는 5개의 씨앗을 섭취하는 데 걸리는 시간과 남겨진 껍질 조각의 수를 기준으로 평가됩니다. 뇌졸중 결핍이 더 큰 쥐는 씨앗을 더 느리게 소비하고 더 많은 껍질 조각을 남깁니다. 신경학적 검사 외에도 경색 용적은 화면의 주소에서 찾을 수 있는 별도의 비디오 프로토콜에 자세히 설명된 대로 TTC 염색을 사용하여 평가할 수도 있습니다.ET one 유도 중대뇌동맥 폐색은 쥐 종에서 정기적으로 사용되는 허혈성 뇌졸중의 모델입니다. 이 방법은 인간 인간과 더 밀접하게 모방하는 갑작스러운 재관류와 대조적으로 전달되는 ET 1의 용량을 점진적으로 변경하여 동맥 수축을 제어할 수 있습니다. 재관류는 인간 뇌졸중에서 흔하게 발생하지만, ET 1에 의한 중대뇌동맥 폐색에 대한 재관류는 대부분의 환자가 최소한 부분적인 재관류를 겪는 인간 뇌졸중과 밀접하게 모방되지 않을 수 있지만, 폐색 후 몇 시간에서 며칠에 걸쳐 재관류가 이루어집니다.ET 원 스트로크 방법의 또 다른 단점은 쥐 균주, 연령 체중 및 작업자 전문 지식과 같은 많은 변수가 불일치와 경색 볼륨으로 이어질 수 있다는 것입니다. 그러나 이러한 변동성은 ET 1 주입 중 뇌허혈을 확인하기 위해 레이저 도플러 플로우 트리를 사용하여 줄일 수 있습니다. 마지막으로, ET 1에 의한 중대뇌동맥 폐색 중 급격한 수축과 점진적인 재관류는 지주막하 출혈 후 나타나는 혈관 경련을 밀접하게 모방할 수 있습니다.따라서 이 모델은 혈관 경련 발생 중에 발생하는 허혈을 연구하는 데 유용한 도구가 될 수도 있습니다. 이 비디오가 도움이 되었기를 바라며 실험에 행운을 빕니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

쥐에서 허혈성 뇌 손상 외과 유도는 뇌졸중 연구 널리 사용되는 모델입니다. 여기서 우리는 중간 대뇌 동맥의 폐색에 의해 초점 대뇌 국소 빈혈의 유도를 보여줍니다. histological 얼룩 및 자기 공명 영상에 의해 발생하는 경색의 시각화도 표시됩니다.

쥐 중간 대뇌 동맥의 폐색의 Endovascular 봉합사에 의해 초점 대뇌 국소 빈혈 모델

intraluminal 중간 대뇌 동맥 폐색 (MCAO) 모델은 실험 허혈성 뇌졸중 모델 중 가장 자주 사용되는 모델입니다. 여기서 우리는 전체 레이저 도플러 flowmetry의 가이드와 함께 상세하게 모델 및 대표 결과를 보여줄 것입니다.

마우스의 레이저 도플러 Flowmetry 안내와 허혈성 뇌졸중에 대한 중간 대뇌 동맥 Intraluminal 폐색 (MCAO) 모델

이 문서는 중간 대뇌 동맥의 근위 부분을보기 위해 시간적 craniectomy를 사용하여 두개의 창문을 통해 쥐 대뇌 동맥을 시각화하는 방법을 설명합니다...

엔도 테린-1 유도 중간 뇌 동맥 폐색 동안 중동 뇌동맥을 시각화하기 위해 두개골 창 활용

뇌 관류 모니터링은 허혈성 뇌졸중 모델의 정확성을 향상시키기 위해 입증되었습니다. 기술적 인 문제는 종종 뇌 혈관 연구에 대해이 필수적 도구의 사용을 제한 할 수 있습니다. 이 비디오에서는 최적화 된 시스템은 쥐의 intraluminal 중간 대뇌 동맥 폐색 동안 단일 또는 다중 사이트 hemodynamic 모니터링을 얻기 위해 표시됩니다.

Intraluminal 중간 대뇌 동맥 폐색의 쥐 뇌졸중 모델에서 뇌 관류 모니터링에 최적화 된 시스템

여기서, 우리는 간단한 봉합사 및 클램프를 사용하여 일시적인 양측 공통 경동맥 폐색에 의한 망막 허혈의 마우스 모델을 설명합니다. 이 모델은 심혈관 비정상으로 인한 망막 허혈의 병리학적 메커니즘을 이해하는 데 유용할 수 있습니다.

과도 양측 공통 경동맥 폐색에 의해 유도된 허혈성 망막 손상의 뮤린 모델

이 프로토콜은 중뇌동맥의 내강 내 폐색을 통한 마우스의 일시적인 국소 대뇌 허혈 모델을 설명합니다. 또한 자기 공명 영상 및 행동 테스트를 사용하여 결과 평가의 예를 보여줍니다.

뇌졸중의 일시적인 중뇌동맥 폐색 모델

현재 프로토콜은 손상을 입히지 않고 뇌 혈관의 해부학적 구조를 보존하는 중대뇌 동맥 폐색/재관류의 쥐 모델을 설명합니다.

대뇌 혈관의 해부학적 구조를 손상시키지 않고 중간 대뇌 동맥 폐색/재관류의 쥐 모델

이 프로토콜은 연구자가 수정된 Longa 외부 경동맥 방법을 사용하여 마우스에서 중뇌동맥 폐색 절차를 수행할 수 있는 단계별 가이드를 제공합니다. 이 기사에 제시된 수정 사항은 중뇌동맥 폐색의 정확도를 높이고 완전한 재관류를 보장하는 것을 목표로 합니다.

완전한 재관류를 위한 Longa Middle Cerebral Artery Occlusion 방법의 최적화

여기에는 레이저 도플러 프로브를 쥐와 생쥐에게 적합한 안와 주위 위치인 중간 대뇌 동맥(MCA)의 원위 영역 위에 두개골에 배치하여 일시적인 MCA 폐색 중 혈류를 평가하는 것이 포함됩니다.

설치류 모델에서 중뇌동맥 폐색 전 대뇌 혈류 모니터링을 위한 레이저 도플러 프로브의 안와 주변 배치

이 프로토콜은 총경동맥을 통한 중뇌동맥 폐색 재관류를 준비하는 과정을 설명합니다.

중뇌동맥 폐색 재관류를 위한 수정된 모델 준비

학습하세요 쥐의 레이저 도플러 유량측정을 활용한 엔도테린-1 유도 중간 뇌동맥 폐색 모델로 허혈성 뇌졸중 연구 방법을 익히세요. 이 프로토콜은 덜 침습적인 수술 기법과 혈류 모니터링 절차를 상세히 설명합니다.

쥐의 레이저 도플러 Flowmetry 안내와 허혈성 뇌졸중에 대한 엔도 테린-1 유도 중간 뇌 동맥 폐색 모델

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