Name: 엔도 테린-1 유도 중간 뇌 동맥 폐색 동안 중동 뇌동맥을 시각화하기 위해 두개골 창 활용 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-02-22T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 43 s
Description: 학습하세요 측두골 개창술을 이용한 두개골 창 기법으로 쥐 중동 뇌동맥을 시각화하는 방법을. 엔도테린-1 유도 폐색 시 혈관 직경 변화를 정량화하여 뇌혈관 반응성을 실시간으로 분석할 수 있습니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이 작품은 미국 심장 협회 상급 동남아 계열 (09GRNT2060421), 미국 의학 협회에서와 플로리다 임상 병진 과학 연구소의 대학에서 보조금에 의해 지원되었다. 아담 메카는 NIH / NINDS, NRSA predoctoral 동료 (F30 NS-060335)입니다. 로버트 Regenhardt은 고혈압의 플로리다 종합 교육 프로그램의 대학 (T32 HL-083810)에서 predoctoral 교제 지원을 받았습니다.

이 프로토콜은 플로리다 대학 기관 동물 케어 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 승인되고 준수는 &quot;케어에 대한 가이드 및 실험실 동물의 사용&quot;(여덟째 판, 과학 국립 아카데미, 2011)되었다. 자료 <ol><li> 동물 : 수술시 250~300그램 무게 여덟 주 된, 남성, Sprague Dawley 쥐 (찰스 강 (Charles River)의 농장, 윌 밍턴, 미국 MA,). </li><li> 마취 <ol class="lalpha"><li> 흡입 마취 시스템 (VetEquip 주식회사, Pleasanton, CA, USA) </li><li> Isoflurane 마취 (박스터의 조제, 디어 필드, IL, USA) </li></ol></li><li> Stereotaxic 시스템 (데이비드 Kopf 기기, Tujunga, CA, USA) <ol class="lalpha"><li> 작은 동물 stereotaxic 시스템 </li><li> 쥐에 대한 비 파열 귀 바 </li><li> 쥐에 대한 가스 마취 헤드 홀더 </li></ol></li><li> 온도 조절 <ol class="lalpha"><li> BAT-12 microprobe 온도계 (세계정밀 기기 주식회사, 사라 소타, FL, USA) </li><li> T / PUMP, TP600 열 담요 (Gaymar 산업 주식회사, 오차드 파크, NY, USA) </li></ol></li><li> 수술기구 <ol class="lalpha"><li> Metzenbaum 가위, 아이리스 포셉, 겸자의 견인기, 26 게이지 beveled 바늘, Bovie 소작 키트 (세계 정밀 계측기, 주식회사, 사라 소타, FL, USA)을 갖춘 10 μl 주사기 </li><li> Micromotor 드릴 (Stoelting, 우드 데일, IL, USA) </li><li> 0.8 mm 원형 드릴 버 (Roboz 외과 인스트루먼트 (주), 주식회사, 게이스 버그, MD, USA) </li><li> STORZ 본 Suturing 집게 (Bausch Lomb과 주식회사, 로체스터, NY, USA) </li></ol></li><li> 외과 용품 <ol class="lalpha"><li> 3.0 나일론 봉합 (오아시스 (Oasis), Mettawa, IL, USA) </li><li> 면봉, Puralube 눈 연고 (피셔 과학, 피츠버그, PA, USA) </li><li> 외과 포인트와 스트립 (Medtronic Xomed 주식회사, 잭슨빌, FL, USA) </li><li> 전기 헤어 가위 (Oster, 섭리, RI, USA) </li></ol></lI&gt; <li> 화학 제품 <ol class="lalpha"><li> 엔도 테린-1 (미국 펩타이드, 서니 베일, CA, USA) </li><li> Chlorhexidine 2% (Agrilabs, 세인트 조셉, MO, USA) </li></ol></li><li> 시각화 장비 <ol class="lalpha"><li> 수술 현미경 (Seiler 악기 및 제조, 세인트 루이스, MO, USA) </li><li> 소니 Handycam HDR-SR12 (소니, 미나토, 도쿄, 일본) </li><li> 광섬유 조명기 (TechniQuip 공사, 리버모어, CA, USA) </li></ol></li><li> 선박 직경의 측정 <ol class="lalpha"><li> VLC 미디어 플레이어 (파리, 프랑스) </li><li> 이미지 J 소프트웨어 (ImageJ 1.42q 소프트웨어, 건강의 미국 국립 연구소, 베데스다, MA, USA) </li></ol></li></ol> 1. 사전 수술 단계 <ol><li> 수술에 앞서, 쥐가 물과 쥐 수유에 무료로 액세스 할 수있는 12시 12분 어두운 / 밝은주기에 따라 자리 잡고 있습니다. </li><li> 마취는 유도 챔버 100 % O 2 기체 혼합물에서 isoflurane 4%을 유도하고 있습니다. </li><li> 까마귀<html> 머리 N은 전기 헤어 가위로 면도 있습니다. </li><li> 쥐가 온도 조절 운영면 (열 담요)과 머리는 가스 마취 얼굴 마스크의 위치로 시작 stereotactic 장치에 배치됩니다에 누워 흡수 패드에 발생하기 쉬운 위치에 배치됩니다. </li><li> 다음으로 귀 바는 삽입 강화하고 있습니다. </li><li> 절차 마취 동안 백퍼센트 O 2 기체 혼합물에서 isoflurane 2퍼센트로 유지됩니다. </li><li> Opthalmic 윤활유 연고는 양쪽 눈에 적용되며, 눈꺼풀이 수술하는 동안 눈 건조를 방지하기 위해 폐쇄됩니다. </li><li> 직장 온도 프로브는 ± 0.5은 ° C. 37 일정한 동물 코어 온도를 유지하기 위해 삽입 </li><li> stereotaxic 장치에 단단히 개최 anesthetized 쥐의 머리와 외과 영역은 chlorhexidine과 염분을 세 번 교대로 세안합니다. </li></ol> 2. 사전 두개골 창 준비 ontent &quot;&gt; 전에 두개골 창을 만들려면, 쥐은 다른 필요한 하드웨어 주입하여 실험을 준비해야하고 필요한 수술 절차를 받아야합니다.이 프로토콜의 경우, 우리는 이전에 엔도 테린-1 (동부 표준시 -에 대한 가이드 캐뉼라를 이식 한 1) 유도 MCAO는 제목 동반자 간행물에 표시되는 &quot;쥐의 레이저 도플러 Flowmetry 안내와 허혈성 뇌졸중에 대한 엔도 테린-1 유도 중간 뇌 동맥 폐색 모델.&quot; 3. 두개골 창 창조 가이드 캐뉼라 또는 실험에 필요한 장비의 배치 후, 두개골 창이 직접 행정 절차를 수행하는 동안 중간 대뇌 동맥의 근위 부분을 시각화 생성됩니다. <ol><li> 첫째, 가위는 medially 시작하여 측면 작업 temporalis 근육 위에 놓인 피부를 절개하는 데 사용됩니다. </li><li> temporalis 근육이 electrocautery를 사용하여 bisected하고 visua 3.0 나일론 봉합사를 사용하여 철회<html> 관자놀이 뼈의 편평 부분을 lize. </li><li> 이 관자놀이 뼈 오프 반영으로 약 3~4mm 광장은 궤도에 꼬리와 광대뼈 프로세스의베이스에 뛰어난 관자놀이 뼈의 편평 부분에 그려집니다. </li><li> 훈련은 점차적으로 관자놀이 뼈에서 무료로 뼈의 설명 부분을 잘라하는 데 사용됩니다. 주의가 경질 또는 대뇌 피질에 손상을 할수 있기 때문에 훈련에 너무 많은 압력을 적용하지 않도록주의해야한다. </li><li> 멸균 식염수에 자주 린스는 수술 분야의 시각화를 개선하고 두개골의 과열 방지하기 위해 수행됩니다. </li><li> 느슨한 구석에서 시작하여, temoporal 뼈 조각은주의 깊게 경질과 관련된 혈관을 찢어하지 않도록하는 동시에 미세 쥐 - 톱니 집게를 사용하여 제거됩니다. </li><li> 경질은 그대로 남아 있으며, 잔해가 멸균 생리를 사용하여 거리에 헹구어 있습니다. </li></ol> 4. 뇌 동맥 수축의 기록 실시간, 동부 표준시-1 유도 MCAO를 진행 쥐에서 이미지를 캡처하는 방법을 보여줍니다하려면 십t &quot;&gt;이 프로토콜에 사용됩니다. <ol><li> vasoactive 화합물의 응용 프로그램에 이전 기준 동영상은 최소한 1 분에 기록해야합니다. 바늘이 전에 동부 표준시-1 주입에 뇌 실질로 낮아 있지만 된 후에 동부 표준시-1 유도 MCAO를 들어, 기본 녹음이 이루어집니다. </li><li> 주사기 펌프는 주입을위한 시작 1 시간 또는 원하는 종점까지 기록됩니다. 바늘은 초점 비행기의 교란을 방지하기 위해 비디오 녹화 중에 장소에 남아 있습니다. </li><li> 쥐가이 절차에 따라 승인 된 프로토콜에 따라 깊이 anesthetized 및 euthanized해야합니다. </li></ol> 5. 이미지 분석 선박 직경은 시각화 MCA의 어떤 부분에 대해 결정 할 수 있습니다. 예를 들어, 우리는 동부 표준시-1 주입 전후의 시간이 지점에서 선박 직경을 측정 할 수있는 MCA 중 하나 지점을 사용합니다. STI동영상에서 붙인다 프레임은 VLC 미디어 플레이어 (VideoLAN)를 사용하여 1 분 간격으로 캡처됩니다. <ol><li> VLC 플레이어가 설치되어 열립니다. </li><li> 도구 및 다음 환경 설정을 선택하면 설정이 아래 &quot;전체&quot;로 변경되어 &quot;표시 설정.&quot; </li><li> &quot;비디오 메뉴는&quot;왼쪽 사이드 바에서 확장 및 &quot;출력 모듈은&quot;그때 확장됩니다. &quot;장면 필터는&quot;사고 현장 비디오 필터 메뉴를 표시하려면 선택됩니다. </li><li> &quot;장면&quot;는 파일 이름 접두사에 대한 상자에 입력합니다. </li><li> 디렉토리 경로 접두어가 정의됩니다. 여전히 프레임이 저장된 곳입니다. </li><li> 녹화 비율은 여전히​​ 프레임 캡쳐의 원하는 속도에 따라 선택됩니다. 동영상은 초 당 29 프레임, 다음 &quot;1749&quot;(29 프레임 / 초 X 60 초 / 분)에서 캡쳐 된 경우 하나는 여전히 매일 1 분 프레임 저장 상자에 입력해야합니다. 모든 변경 사항은 다음 저장됩니다. </li><li> 원하는 동영상을 자동으로 매일 1 분에 한 번 계속 프레임을 저장하는 VLC 플레이어에서 열립니다. </li><li> 선박 직경은 다음이를 사용하여 측정된다이미지. 첫째, ImageJ 소프트웨어 (NIH)이 열립니다. </li><li> 그럼 당신은 측정 될 수있는 여전히 프레임은 ImageJ에서 열립니다. </li><li> &quot;분석&quot;메뉴를 선택하면, &quot;측정 설정&quot;를 선택한 후 개설되어 있으며 모든 상자의 선택을 취소합니다. </li><li> 다음, 직선 도구가 선택됩니다. </li><li> 키보드 단축키는 &quot;Ctrl 키를 +는&quot;필요에 따라 확대하는 데 사용되며 라인은 혈관 직경을 측정 할 수있는 선박 경로에 수직 배치됩니다. </li><li> 마지막으로, 선박의 길이는 선박의 길이를 얻기 위해 &#39;측정&#39;(CTRL + M) 후 &quot;분석&quot;메뉴를 선택하고이 얻어진다. </li><li> 이 과정은 적어도 세 번 반복하고 각 여전히 프레임 단위로 측정 각 측정 용기에 대한 평균입니다. </li><li> 비교 여러 쥐를 사용하여 만들 수 있도록 각 시점에서 선박 지름이 기준 혈관 직경에 표준화되어 있습니다. 이 작업을 수행하려면 각 선박의 %의 기본 직경을 계산 × 100 %가 공식 현재 직경 / 기본 직경을 사용합니다. </li></ol>

<ol><li>Levasseur, J. E., Wei, E. P., Raper, A. J., Kontos, A. A., Patterson, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detailed+description+of+a+cranial+window+technique+for+acute+and+chronic+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Detailed description of a cranial window technique for acute and chronic experiments.</a> Stroke. 6, 308-317 (1975).</li>
<li>Baumbach, G. L., Dobrin, P. B., Hart, M. N., Heistad, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanics+of+cerebral+arterioles+in+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Mechanics of cerebral arterioles in hypertensive rats.</a> Circ. Res. 62, 56-64 (1988).</li>
<li>Regrigny, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+melatonin+on+rat+pial+arteriolar+diameter+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Effects of melatonin on rat pial arteriolar diameter in vivo.</a> Br. J. Pharmacol. 127, 1666-1670 (1999).</li>
<li>Mecca, A. P., O'Connor, T. E., Katovich, M. J., Sumners, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candesartan+pretreatment+is+cerebroprotective+in+a+rat+model+of+endothelin-1-induced+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Candesartan pretreatment is cerebroprotective in a rat model of endothelin-1-induced middle cerebral artery occlusion.</a> Exp. Physiol. 94, 937-946 (2009).</li>
<li>Mecca, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebroprotection+by+angiotensin-%281-7%29+in+endothelin-1-induced+ischaemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cerebroprotection by angiotensin-(1-7) in endothelin-1-induced ischaemic stroke.</a> Exp. Physiol. 96, 1084-1096 (2011).</li>
</ol>

관심 없음 충돌이 선언 없습니다.

이 사소한 수정 4, 5 많은 실험의 요구를 충족하기 위해 변경 될 수 있으므로 요약에서이 두개의 창을 준비 기술은 매우 다양한입니다. 예를 들어, 우리는 성공적으로 두개의 창 (메카 AP 2009 2011)을 통해 시각화 뇌동맥에 직접 초점을 레이저 도플러 flowmetry를 사용하여 특정 MCA 지점에서 뇌성 혈액의 흐름을 모니터링하고 있습니다. 또한, 경질 칼에 베인과 유사한 준비는 생체 혈관 반응성 욕조 3을 만들 vasoactive 화합물의 국소 투여와 함께 사용할 수 있습니다. 이 기법의 실패 속도를 감소하기 위해 두개의 창을 준비 할 때 여러 가지 요인이 고려되어야합니다. 이러한 요소 중 대부분은 뇌동맥의 좋은 시각화를 취득과 관련이 있습니다. 그 위에 놓인 경질이나 혈관이 드릴 비트와 함께 중단되지 않도록 craniectomy를 만들 때 먼저주의가되어야합니다. 이 것이 가장 바람직합니다멸균 식염수에 자주 세차에 의해 파편을 취소하고 두개골을 ...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 코멘트 (선택 사항) </td></tr><tr><td> 흡입 마취 시스템 </td><td> VetEquip 주식회사, Pleasanton, CA, USA </td><td> 901806 </td><td></td></tr><tr><td> Isoflurane 마취 </td><td> 박스터의 조제, 디어 필드, IL, USA </td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> 작은 동물 stereotaxic 시스템 </td><td> 데이비드 Kopf 악기, Tujunga, CA, USA </td><td> 900 </td><td></td></tr><tr><td> 비 파열 귀 바, 쥐 </td><td> 데이비드 Kopf 악기, Tujunga, CA, USA </td><td> 957 </td><td></td></tr><tr><td> 쥐 가스 마취 헤드 홀더 </td><td> 데이비드 Kopf 악기, Tujunga, CA, USA </td><td> 1929 </td><td></td></tr><tr><td> BAT-12 microprobe 온도계 </td><td> 세계 정밀 계측기, 주식회사, 사라 소타, FL, 미국 </td><td> BAT-12 </td><tD&gt; </td></tr><tr><td> T / PUMP, 열 담요 </td><td> Gaymar 산업 주식회사, 오차드 파크, NY, USA </td><td> T / PUMP, TP600 </td><td></td></tr><tr><td> Metzenbaum 가위 </td><td> 세계 정밀 계측기, 주식회사, 사라 소타, FL, 미국 </td><td> 501254 </td><td></td></tr><tr><td> 아이리스 포셉 </td><td> 세계 정밀 계측기, 주식회사, 사라 소타, FL, 미국 </td><td> 15,915 </td><td></td></tr><tr><td> 불독 클램프 견인기 </td><td> 세계 정밀 계측기, 주식회사, 사라 소타, FL, 미국 </td><td> 14119-G </td><td></td></tr><tr><td> 10 μl 주사기 26 gaugue </td><td> 세계 정밀 계측기, 주식회사, 사라 소타, FL, 미국 </td><td> SGE010RNS </td><td></td></tr><tr><td> Bovie, 높은 온도 소작 키트 </td><td> 세계 정밀 계측기, 주식회사, 사라 소타, FL, 미국 </td><td> 500392 </td><td></td></tr><tr><td> 쥐의 이빨은 0.12를 포셉 </td><td> Stotz </td><td> E1811 </td><td></td></tr><tr><td> Micromotor 훈련 </td><td> Stoelting,우드 데일, IL, USA </td><td> 51,449 </td><td></td></tr><tr><td> 0.8 mm 원형 드릴 버 </td><td> Roboz 외과 인스트루먼트 (주), 주식회사, 게이스 버그, MD, USA </td><td> RS-6280C-1 </td><td></td></tr><tr><td> STORZ 본 suturing 포셉 </td><td> Bausch Lomb과 주식회사, 로체스터, NY, USA </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 나일론 봉합사, 크기 3.0 </td><td> 오아시스 (Oasis), Mettawa, IL, USA </td><td> MV-663 </td><td></td></tr><tr><td> 면봉 </td><td> 피셔 과학, 피츠버그, PA, 미국 </td><td> 22-029-488 </td><td></td></tr><tr><td> Puralube 눈 연고 </td><td> 피셔 과학, 피츠버그, PA, 미국 </td><td> NC0138063 </td><td></td></tr><tr><td> 전기 헤어 가위 </td><td> Oster, 섭리, RI, USA </td><td> 78005-301 </td><td></td></tr><tr><td> 동부 표준시 - 1 PBS 80 μ의 M 농도로 희석 </td><td> 미국의 펩타이드, 서니 베일, CA, USA </td><td> 88-1 - 10A </td><td></td></tr><tr><td> Chlorhexidine, 2% </td&gt; <td> Agrilabs, 세인트 조셉, MO, USA </td><td> 1040, 목사 6-06, NAC 번호 : 10580322 </td><td></td></tr><tr><td> 외과 현미경 </td><td> Seiler 악기 및 제조, 세인트 루이스, MO, USA </td><td> 진화 xR6 </td><td></td></tr><tr><td> 소니 Handycam </td><td> 소니, 미나토, 도쿄, 일본 </td><td> HDR-SR12 </td><td></td></tr><tr><td> 광섬유 조명기 </td><td> TechniQuip 공사, 리버모어, CA, USA </td><td> FO1-150 </td><td></td></tr><tr><td> VLC 미디어 플레이어 </td><td> (파리, 프랑스) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 이미지 J 소프트웨어 </td><td> 미국 건강, 베데스다의 국립 연구소 MA, USA </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

엔도 테린-1 유도 중간 뇌 동맥 폐색 동안 중동 뇌동맥을 시각화하기 위해 두개골 창 활용

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

두개골 창 창조 1-3 뇌의 대뇌 피질의 표면에 구조를 직접 시각화 할 수있는 방법입니다. 이 기술은 쥐의 뇌를 놓인 여러 지역에서 수행 할 수 있지만, 대부분의 쉽게 쉽게 접근 정면 또는 정수리 뼈를 통해 craniectomy을 생성하여 수행됩니다. 대부분의 자주, 우리는 근위 MCA에 인접한 뇌 실질에 엔도 테린-1의 주입 발생할 중간 대뇌 동맥 혈관 직경의 변화를 정할 허혈성 뇌졸중의 엔도 테린-1 중간 대뇌 동맥 폐색 모델과 함께이 기술을 사용한 4, 5. 엔도 텔린 -1 유도 MCAO 동안 MCA의 가까운 부분을 시각화하기 위해, 우리는 쥐 두개골 (그림 1)의 측면 측면에서 관자놀이 뼈를 두개골 창을 만들 수있는 기술을 사용합니다. 뇌동맥은 경질 그대로 사용하거나 경질 칼에 베인과 retra있는 중 시각화 할 수 있습니다cted. 가장 일반적으로, 우리는 뇌 실질에 vasoconstricting 펩타이드의 전달을 포함 엔도 테린-1 유도 MCAO 이후 시각화 동안 경질 그대로 둡니다. 이 약물 투여에 대한 시각화 혈관을 통해 직접 경질를 절개 할 필요가 우회한다. 이 프로토콜은 물론이 방법에 관한 잠재적 인 함정의 많은 부분을 방지하는 방법으로, 단계 - 현명한 방식으로 뇌성 동맥을 시각화 할 수있는 두개의 창을 만드는 방법을 설명합니다.

아직 캡처 된 비디오 쇼에서 찍힌 사진 그 후 뇌동맥 직경의 변화 동부 표준시-1 주입은 즉시이 두개의 창 기술을 (그림 2)를 사용하여 평가 할 수 있습니다. 동부 표준시-1 분사의 분 이내에 혈관이 수축되기 시작합니다. 결국 혈관 시각화하기 어려울되며 뇌 조직은 창백 될 것입니다. 20 분 후 동부 표준시-1의 효과가 감소하고 혈관은 점차 약 45 분 후 기본 직경로 돌아, 팽창되기 시작합니다. 발생보다 더 확실한 혈관 수축뿐만 아니라, 대뇌 피질의 표면은 동부 표준시-1 관리 후 창백됩니다. 그것은 원하는 경우 보정 현미경 십자선과 혈관의 직경은 절대 변화를 계산 할 수 있습니다. 여러 쥐 사이의 비교를 위해 우리는 절차를 수행하는 동안 발생하는 혈관 직경의 상대적인 변화를 계산합니다. 이러한 측정은 ImageJ 소프트웨어 (NIH)를 사용하여 수행됩니다. 그런 다음 REL을 나타내는 그래프시간이 지남에 따라 선박의 직경 ative 변경 사항은 다음 (그림 3)...

이 문서는 중간 대뇌 동맥의 근위 부분을보기 위해 시간적 craniectomy를 사용하여 두개의 창문을 통해 쥐 대뇌 동맥을 시각화하는 방법을 설명합니다 (<strong&gt; 그림 1</strong&gt;). 이 다양한 방법 뇌동맥의 반응성을 측정하기 위해 약물 투여의 다양한 기술과 결합 할 수 있습니다<em&gt; 생체 내</em&gt;.

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

본 비디오 프로토콜에서는 엔도텔린 1(endothelin one)으로 유도된 중대뇌동맥 폐색 과정 동안 중대뇌동맥을 시각화하기 위해 두개창(cranial window)을 활용하는 방법을 시연하겠습니다. 이러한 두개창 준비를 위해 중대뇌동맥의 근위부를 관찰할 수 있도록 측두부 두개골 절제술을 수행합니다. 두개창 생성은 뇌의 피질 표면에 있는 구조물을 직접 시각화할 수 있게 해주는 방법입니다.이 기법은 쥐의 대뇌 상부의 여러 위치에서 수행할 수 있으나, 접근이 용이한 전두골 또는 두정골 부위에 C자형 두개골 절제술(craniectomy)을 시행하여 가장 쉽게 수행할 수 있습니다. 당사는 주로 이 기법을 내피세포 유도 중대뇌동맥 폐쇄(endothelial one induced middle cerebral artery occlusion) 또는 ET one 유도 MCAO 허혈성 뇌졸중 모델과 결합하여 사용해 왔습니다. 두개창(cranial window) 시술은 근위 중대뇌동맥(MCA) 인접 뇌실질에 ET one을 주입한 후 발생하는 혈관 직경의 변화를 정량화하기 위해 수행됩니다.구체적으로, 본 연구에서는 쥐 두개골의 외측 면에 있는 측두골을 통해 두개창을 만드는 기술을 사용합니다. 이후 경막을 그대로 두거나 경막을 절개하여 젖힌 상태에서 뇌동맥을 시각화할 수 있습니다. 일반적으로 시각화 과정에서는 경막을 그대로 둡니다.ET one 유도 MCAO는 혈관 수축 펩타이드를 뇌 실질로 전달하는 방식이므로, 약물 전달을 위해 가시화된 혈관 바로 위의 경막을 직접 절개할 필요가 없습니다. 본 영상에서는 뇌동맥을 가시화하기 위한 두개창(cranial window)을 단계별로 제작하는 방법과 이 방법과 관련하여 흔히 발생할 수 있는 잠재적 오류를 피하는 방법을 보여드리겠습니다. 언급된 바와 같이 가이드 캐뉼라를 배치한 후, 뇌졸중 유도 과정 중에 중대뇌동맥의 근위부를 직접 가시화할 수 있도록 두개창을 제작할 수 있습니다. 먼저, 가위로 보여지는 것과 같이 두피를 절개하고 피부를 젖혀 측두근을 노출시킵니다.전기소작기를 사용하여 측두근을 이분하고, 측두골의 인상부를 시각화하기 위해 견인합니다. 측두골을 충분히 노출시키는 것이 이 절차의 핵심입니다. 소작 시 안와에 손상을 주지 않도록 주의하십시오.시각화를 개선하기 위해 봉합사를 사용하여 이분된 측두근을 견인합니다. 관자뼈 인상부의 편평부에서 안와에 인접하고, 관자뼈에서 반사되는 광대돌기 기저부 상단에 3~4 mm 크기의 정사각형을 그립니다. 드릴 비트를 사용하여 이 뼈 부위를 절제합니다.뇌 조직을 천공할 가능성이 있으므로 너무 강한 압력을 가하지 않도록 주의하십시오. 수술 부위의 가시성을 높이고 두개골의 과열을 방지하기 위해 멸균 식염수로 자주 세척하십시오. 헐거운 모서리 부분부터 시작하여, 경막과 관련된 혈관을 손상시키지 않도록 주의하면서 미세 랫투스 포셉(rat tooth forceps)을 사용하여 측두골 조각을 조심스럽게 제거하십시오.여기서는 endothelial.One 주입 전 기저 상태의 중대뇌동맥 분지를 시각화하여 확인할 수 있습니다. endothelial.One 주입 후 수분 이내에 중대뇌동맥이 수축하기 시작합니다. 결과적으로 분지들을 시각화하기 어려워지며 뇌 조직은 창백해집니다.약 20분 후면 endothelial one의 효과가 감소하기 시작하며 혈관이 점진적으로 확장됩니다. 약 45분 후에는 기저 직경으로 돌아옵니다. endothelial one 주입 전후의 서로 다른 시점에서 혈관 직경을 측정하기 위해, 비디오에서 1분 간격으로 스틸 프레임을 캡처합니다. VLC 미디어 플레이어를 사용하여 도구, 설정으로 이동한 다음 '설정 보기'에서 '전체'로 설정을 변경하십시오.왼쪽 사이드바에서 비디오 메뉴를 확장하고 출력 모듈을 확장하십시오. 파일 이름 접두사로 scene 필터 유형 scene을 선택하십시오. 그런 다음 디렉터리 경로를 추가하십시오.다음으로, 서면 프로토콜에 설명된 대로 비디오의 프레임 속도에 따라 스틸 프레임 캡처를 위한 녹화 비율을 설정하십시오. 마지막으로, save open을 클릭하십시오. 그러면 원하는 비디오와 VLC 플레이어가 혈관 직경을 측정하기 위해 1분마다 자동으로 스틸 프레임을 저장합니다.먼저 이 이미지들을 사용하여 Image J 소프트웨어를 실행한 다음, 측정할 스틸 프레임을 엽니다. 분석(analyze) 메뉴에서 측정 설정(set measurements)으로 이동하여 모든 선택 박스를 해제합니다. 직선 도구(straight line tool)를 선택하고 필요에 따라 확대합니다.혈관 직경을 측정하기 위해 혈관 경로에 수직으로 선을 긋습니다. Analyze로 이동한 다음, Measure를 클릭하여 혈관 직경을 구합니다. 원하는 모든 이미지에 대해 이 과정을 반복합니다.여러 마리의 쥐를 사용하여 비교 분석을 수행할 수 있도록, 각 시간대의 혈관 직경을 기저선 혈관 직경으로 정규화해야 합니다. 이를 위해 여기에 제시된 공식을 사용하십시오. 요약하자면, 이 두개창 준비 기술은 약간의 수정만으로 많은 실험의 요구 사항에 맞게 변경할 수 있어 활용도가 매우 높습니다.예를 들어, 우리는 두개창(cranial window)을 통해 시각화된 뇌동맥에 직접 초점을 맞추는 레이저 도플러 혈류 영상법을 사용하여 특정 MCA 분지의 뇌혈류를 성공적으로 모니터링하였습니다. 또한, 경막을 제거한 유사한 준비 과정을 통해 혈관 활성 화합물을 국소 투여함으로써 인비보(in vivo) 혈관 반응성 배스(bath)를 구축할 수 있습니다. 이 기법의 실패율을 낮추기 위해서는 두개창을 준비할 때 몇 가지 요소를 고려해야 합니다.이러한 요인들의 상당수는 뇌동맥의 양호한 시각화를 확보하는 것과 관련이 있습니다. 예를 들어, C 두개골 절제술을 시행할 때 드릴 베드로 인해 경막이나 그 위의 혈관이 손상되지 않도록 주의해야 합니다. 이는 멸균 식염수로 빈번하게 세척하여 잔해물을 제거하고 두개골을 냉각함으로써 가장 효과적으로 수행할 수 있습니다.이 영상이 두개창(cranial window)을 활용한 실험 설계에 도움이 되고, 해당 시술 과정에서 발생할 수 있는 일반적인 실수들을 방지하는 데 유용하기를 바랍니다.

utilizing-cranial-window-to-visualize-middle-cerebral-artery-during

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

쥐에서 허혈성 뇌 손상 외과 유도는 뇌졸중 연구 널리 사용되는 모델입니다. 여기서 우리는 중간 대뇌 동맥의 폐색에 의해 초점 대뇌 국소 빈혈의 유도를 보여줍니다. histological 얼룩 및 자기 공명 영상에 의해 발생하는 경색의 시각화도 표시됩니다.

쥐 중간 대뇌 동맥의 폐색의 Endovascular 봉합사에 의해 초점 대뇌 국소 빈혈 모델

우리는 비디오 intraluminal monofilament를 사용하여 성인 마우스의 중간 대뇌 동맥 폐색을 생산하는 방법을 보여줍니다. 또한 2,3,5 - triphenyltetrazolium 염화물 (TTC) 염색법에 의해 대뇌 경색의 범위를 평가하는 방법을 보여줍니다.

중간 대뇌 동맥 폐색의 마우스 모델

이 비디오는 허혈성 뇌졸중을 모델링하기 위해 노화된 쥐에서 총경동맥 또는 CCA 결찰술을 사용하여 영구 원위 중대뇌동맥 폐색(MCAO)을 수행하는 절차를 보여줍니다. 이는 뇌로 가는 혈류를 차단하여 신경 세포의 사멸로 이어지며 뇌졸중 메커니즘과 잠재적 치료법을 연구하기 위한 모델을 생성합니다.

쥐 모델에서 중추 및 일반 경동맥 폐색을 통한 허혈 유도

대뇌 국소 빈혈의 여러 동물 모델은 스트로크의 인간의 조건을 시뮬레이션하기 위해 개발되었습니다. 이 프로토콜은 쥐의 허혈성 뇌졸중에 대한 엔도 테린-1 (동부 표준시-1) 유발 중간 뇌동맥 폐색 (MCAO) 모델에 대해 설명합니다. 또한 중요한 고려 사항, 장점,이 모델의 단점은 설명되어 있습니다.

쥐의 레이저 도플러 Flowmetry 안내와 허혈성 뇌졸중에 대한 엔도 테린-1 유도 중간 뇌 동맥 폐색 모델

뇌 관류 모니터링은 허혈성 뇌졸중 모델의 정확성을 향상시키기 위해 입증되었습니다. 기술적 인 문제는 종종 뇌 혈관 연구에 대해이 필수적 도구의 사용을 제한 할 수 있습니다. 이 비디오에서는 최적화 된 시스템은 쥐의 intraluminal 중간 대뇌 동맥 폐색 동안 단일 또는 다중 사이트 hemodynamic 모니터링을 얻기 위해 표시됩니다.

Intraluminal 중간 대뇌 동맥 폐색의 쥐 뇌졸중 모델에서 뇌 관류 모니터링에 최적화 된 시스템

우리는 설치류의 주요 뇌 혈관의 영구 폐색에 대한 높은 재현성 방법을 설명합니다. 이 기술은 거의 주변의 손상을 최소화 혈액 손실, 장기 생존의 높은 속도, 인간의 임상 인구에 상응하는 일관된 경색 볼륨을 수행 할 수 있습니다.

영구적 인 뇌 혈관 폐색<em&gt;를 통해</em&gt; 더블 합자 및 절개

뇌졸중의 병태 생리를 이해하기 위해, 신뢰할 수있는 모델을 사용하는 것이 중요하다. 마우스에서 가장 자주 사용되는 뇌졸중 모델 중 하나를 설명한다 본 논문의 중간대 뇌동맥 폐색 (MCAO) 모델이라 재관류 (또한 관내 또는 필라멘트 봉합사 모델 지칭).

마우스의 중간 대뇌 동맥 폐색 및 재관류 유도 스트로크에 대한 수술 적 접근

말단 중간 대뇌 동맥 분기 (MCAO)의 수술 폐색 실험 뇌졸중 연구에서 자주 사용하는 모델입니다. 이 논문은 마우스에서 생체 내에 길이 현미경을위한 기회를 제공하는 측의 두개 창에 삽입, 결합 영구 MCAO의 기본적인 기술을 설명한다.

측면 만성 두개골 창 준비 활성화 생체 마우스의 말초 중간 대뇌 동맥 폐색에 따라 관측

이 프로토콜은 중간 크기의 경색과 우수한 생존율을 가진 독특한 마우스 스트로크 모델을 보여줍니다. 이 모델을 통해 전임상 뇌졸중 연구자는 허혈 기간을 연장하고, 노령 마우스를 사용하고, 장기적인 기능적 결과를 평가할 수 있습니다.

늙은 쥐의 뇌졸중 결과를 연구하기 위해 수정된 경두개 중뇌동맥 폐색 모델

이 프로토콜은 중뇌동맥의 내강 내 폐색을 통한 마우스의 일시적인 국소 대뇌 허혈 모델을 설명합니다. 또한 자기 공명 영상 및 행동 테스트를 사용하여 결과 평가의 예를 보여줍니다.

뇌졸중의 일시적인 중뇌동맥 폐색 모델

본 연구의 목적은 쥐에서 두개골 절제술 후 영구적이고 선택적인 중뇌동맥 폐색을 수행하는 재현 가능한 방법을 확립하여 운동 및 공간 기억 결손에 대한 실험 연구에 적용하는 것이었습니다.

쥐의 중뇌동맥 선택적 및 영구 폐색: 운동 및 공간 기억 결손 연구를 위한 실험적 접근법

학습하세요 측두골 개창술을 이용한 두개골 창 기법으로 쥐 중동 뇌동맥을 시각화하는 방법을. 엔도테린-1 유도 폐색 시 혈관 직경 변화를 정량화하여 뇌혈관 반응성을 실시간으로 분석할 수 있습니다.

엔도 테린-1 유도 중간 뇌 동맥 폐색 동안 중동 뇌동맥을 시각화하기 위해 두개골 창 활용

더 많은 동영상 탐색