Name: 역 형성 갑상선 암의 동소 마우스 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-04-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: 학습하세요 역형성 갑상선암의 동소 마우스 모델 구축 방법을. 수술을 통해 인간 암세포를 갑상선에 주입하고 조직학적 분석으로 종양 성장을 평가하는 이 기법은 질병 진행과 치료 전략 연구에 활용됩니다.

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저자는 박사 부부에게 감사의 말씀을 전합니다. 수술 교육에서의 도움 Wenjun 리와 다니엘 Kreisel (세인트 루이스의 워싱턴 대학 의과 대학). RYL은 건강 보조금 R01 DK068057 국립 연구소와 세인트 루이스 대학의 대통령의 연구 기금에 의해 지원됩니다.

1. 세포의 준비 주 : 2) 장소 리겔 1) 전체 RPMI 1640 기반 문화 미디어 레시피 (500 ML) 435 ML RPMI 1640, 50 ML 열 비활성화 된 FBS 5 ML 비 필수 아미노산, 5 ML 나트륨 피루 베이트, 5 ML 항생제 항진균를 포함 4 ° C에서 세포 수확 하루 전에. <ol><li> 인간 ATC 세포주 THJ-11T 8 6 잘 배양 접시에서 자란 80 ~ 90 %의 합류 후 수확하고 있습니다. </li><li> 실온에서 4 분 200 XG에서 원심 분리하여 펠렛 세포. </li><li> RPMI 1640 미디어 [2 ㎖ / 6 잘 플레이트]에서 미디어를 Resuspend 세포를 대기음. </li><li> 0.4 % 판 블루 염색 하나의 볼륨에 추가하고 TC10 자동 셀 카운터를 사용하여 세포 밀도를 결정, 세포 현탁액의 작은 양을 가지고. </li><li> 주입 5 × 10 5 세포 / 마우스 횟수에 마우스를 얻기 위해 필요한 세포 현탁액의 볼륨을 계산합니다. </li></ol> 참고 : 광고를 보장하기 위해<html> 당신이 마우스의 더블 번호 (예 : 5 마우스를 주입하는 경우 10 쥐를 주입하는 것처럼, 그 세포 현탁액을 준비) 주입하는 것처럼 주입 세포 현탁액을 동일시 세포를 준비합니다. <ol start="6"><li> 15 ML 원뿔 튜브에 세포 현탁액의 필요한 양을 전송합니다. </li><li> 실온에서 4 분 200 XG에서 원심 분리하여 펠렛 세포. </li><li> 전체 RPMI 1640 미디어 매체를 Resuspend 세포를 대기음. </li><li> 1.6 ML 튜브에 세포를 전송, 마트 리젤의 1 볼륨을 추가하고 천천히에 피펫 스에 의해 부드럽게 섞는다. </li></ol> 참고 : 각 마우스 세포 현탁액 / 마트 리젤 칵테일의 10 μl를 받게됩니다. 10 μL 주사 양에 떠있는 5 × 10 5 세포가 성공적으로 이전 ATC 동소 연구 9-10에서 사용하고 있기 때문에, 우리는이 보고서에서 이러한 매개 변수를 사용했습니다. <ol start="10"><li> 사용할 준비가 될 때까지 얼음에 세포 현탁액을 놓습니다. </li></ol>_title &quot;&gt; 2. 마우스 제조 <ol><li> 70 % 에탄올로 모든 표면을 닦아 해부 범위와 주변 지역을 포함하는 외과 영역을 청소합니다. </li><li> 동물이 수술에서 회복 될 가열 램프 / 패드의 전원을 켭니다. </li><li> 1 ML, 27G ½ &quot;투베르쿨린 주사기를 사용하여 10g의 체중 복강 당 0.1 ML 케타민을 / xylazine (케타민 9 MG / ML 및 xylazine 1mg/ml의 구성된 약물 칵테일)를 관리합니다. </li><li> 수술 준비 마우스 : 1) 베타 딘 적신 거즈, 4를 수행 최종 스크럽) chorhexadine 젖은 거즈 사각형, 3으로 수술 영역을 세 번 문질러 마우스의 목 영역 (턱 선에서 흉골과 팔을 밖으로의 상단까지), 2) 면도 ) 부드럽게 건조 눈을 방지하기 위해 눈 연고를 적용합니다. </li><li> 마우스가 적절하게 침착되어 있는지 확인하기 위해 반사 페달을 확인합니다. </li><li> 해부 범위에 처분 할 수있는 메마른 필드 장벽 지느러미 드러 누움에 동물을 배치하고 피복 테이프와 장소에서 동물을 고정합니다. </li><li> 스크럽 손과 Fingernails는 불임 수술 장갑에 넣어. </li><li> 멸균 방식으로, 개복 수술을 포장하고 악기를 정렬합니다. </li><li> 단지 수술 부위가 노출 떠나, 동물에 무균 드레이프를 놓습니다. </li></ol> 3. 갑상선 세포 주입 수술 액세스 <ol><li> 멸균 일회용 메스를 사용하여 목의 정중선을 따라 1에 1.5 cm 세로 절개를합니다. </li></ol> 참고 : 정중선에서 편차가 기관에 액세스 할 깊은 절단 복잡. 매우 정확한 중간 선 절개는 당신이 함께 왼쪽과 오른쪽 침샘을 들고 막 조직을 애타게 절단 할 수 있으며 큰 동맥을 새김 눈 또는 단절의 가능성을 줄일 수 있습니다. <ol start="2"><li> 기관을 둘러싼 스트랩 근육에 두 번째 절개를 다음 오른쪽 갑상선을 노출 옆에 절개 근육의 오른쪽을 당깁니다. </li><li> Hemostats는 근육 층을 보유하는이 시점에서 사용할 수 있습니다갑상선에 쉽게 접근 할 수있다 (그림 1)에 대한 부분입니다. </li></ol> 참고 : 절차는 두 가지 수술 직원에 의해 수행하는 경우 준비 주사 주사기 지원 직원 외과 의사 전달되는 동안 또는, 근육 층이 단순히 집게로 다시 개최 할 수있다. <ol start="4"><li> 천천히 조심스럽게 바늘을 제거 31G 5 / 16 &quot;인슐린 주사기를 사용하여 오른쪽 갑상선에 세포 현탁액의 10 μl를 주입. </li></ol> 4. 외과 사이트 및 마우스 복구 폐쇄 <ol><li> 하나를 연속 또는 단속 봉합 스타일을 사용하여 6.0 봉합 재료와 봉합 근육 층. </li><li> 같은 방식으로 스티치 피부. </li><li> 직접 절개 사이트를 통해 트리플 항생제 연고의 레이어를 적용합니다. </li><li> 따뜻한 가열 패드에 지느러미 드러 누움에 복구하는 동물을 허용합니다. 동물의 도움없이 흉골 드러 누움를 얻을 수 있습니다되면, 다른 마우스와 함께 다시 배치 할 수 있습니다. </li></ol> &lt;P 클래스 = &quot;jove_title&quot;&gt; 5. 수술 후 모니터링 및 조직 컬렉션 <ol><li> 수술 후 일주일 동안 매일 절개 사이트와 동물의 전반적인 건강을 확인 후, 일주일에 한 번 확인합니다. 봉합이 14 일 후에 그대로 있다면, 그들은 제거됩니다. </li></ol> 참고 : 감소 상태 (예를 들어, 상당한 체중 감소, 초라한 머리, 숨소리)의 흔적을 전시 동물은 안락사해야하며, 조직을 수집. <ol start="2"><li> 일단 마우스는 xylazine / 케타민 진정으로 위의 설명과 같이 관리, 소정의 수술 시간이 지점에 도달했습니다. </li><li> intracardially 동물을 붓는다 수확 갑상선 / 기관과 관심의 다른 조직 (여기에서는 자세히 설명하지 않음). </li></ol>

<ol><li>Bibby, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+models+of+cancer+for+preclinical+drug+evaluation%3A+advantages+and+disadvantages%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Orthotopic models of cancer for preclinical drug evaluation: advantages and disadvantages.</a> Eur. J. Cancer. 40, 852-857 (2004).</li>
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<li>Marlow, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detailed+molecular+fingerprinting+of+four+new+anaplastic+thyroid+carcinoma+cell+lines+and+their+use+for+verification+of+RhoB+as+a+molecular+therapeutic+target%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Detailed molecular fingerprinting of four new anaplastic thyroid carcinoma cell lines and their use for verification of RhoB as a molecular therapeutic target.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 95, 5338-5347 (2010).</li>
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</ol>

저자는 공개 아무것도 없어.

우리의 모델에서, 동물 4 주 후 주입 도덕의 타락과 호흡 곤란 관련 갑상선 종양의 전이 및 질병을 보여 주었다. 대부분의 다른 동소 모델은 대상을 넘어 퍼져 주위 조직 및 사후 분사 누설에 세포 현탁액 주사 배송, 주사를 이용한 경우와 마찬가지로이 가능합니다. 그 말했다되는,이 절차에 의해 생성 한 인식 할 가능성이 알려지지 않은이 아닌 질병 관련 전이 또는 합병증 파워 노출의 효과입니다. 이 관계없이 질병이 조사되는 대부분의 xenographic 이식과 일반적인 관심사입니다. 그럼에도 불구하고, 전이의 의도하지 않은 결과는 상당히 아늑 갑상선를 오버레이 막 침투 바늘 끝의 전체 베벨을 보장하고 천천히 세포 현탁액을 추방함으로써 최소화 할 수있다. 누설이 주입 도중 또는 이후 관찰되는 경우, 해당 동물 연구에서 생략 할 수있다. <p c아가씨 = &quot;jove_content&quot;&gt; 그것은 동물이 갑상선 / 기관 및 기타 조직을 수확하기 전에 관류하는 것이 필수적이다. 혜택은) 두 배, 1아르 적혈구)가 제거되고 조직 학적 표본과 2를 혼란하지 않습니다 조직 형태와 무결성은 유지됩니다. 또한, 절제된 갑상선 / 기관 연결된 두 종 양성 질량을 가지고 있거나 그것을 해부학 적 랜드 마크는 조직 학적 준비에 포함되기 전에 식별 할 수있는 방식으로 절단해야 내에 안치되는. 이 극적으로 시료 준비 시간을 줄일 수 있습니다. 이 보고서에서 우리는 ATC 세포의 동소 주입 다음과 같은 고급 갑상선 종양 지역의 성장과 침략을 설명합니다. ATC 전이는 같은 헤 마톡 실린과 에오신 표준 조직 학적 얼룩을 사용하여 다른 조직의 조직 학적 제제를 분석하여, 또는 면역 세포 또는 병리 관련 마커를 이용하여 조사 할 수 있습니다. 이 시스템은 또한 G에 의해 개발 될 수있다라이브 영상이 전이 치료 치료의 효과를 모니터링하는 데 사용할 수 있도록 enetically 형광 기자와 갑상선 암 세포를 수정.

<table><tbody><tr><td>RPMI 1640 세포 배양 배지</td><td>Mediatech</td><td>10-041-CV</td><td>사용되는 배지 및 첨가제는 세포주</td></tr><tr><td>TC10 자동 세포 계수기</td><td>Bio-Rad</td><td>145-0001</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>354234</td><td></td></tr><tr><td>Graefe Forceps, 톱니에 따라 다릅니다. 약간의 곡선, 4"</td><td>Roboz</td><td>RS-5135</td><td></td></tr><tr><td>일회용 메스, No. 15</td><td>Feather</td><td>2975#15</td><td></td></tr><tr><td>Olsen Hegar 바늘 홀더 - 4 &frac12; "섬세한 톱니 gSource</td><td></td><td>gS 21.5400</td><td></td></tr><tr><td>6-0 나일론 검정 모노필라멘트 봉합</td>사 <td>Surgical Specialties Corporation</td><td>1279B</td><td></td></tr><tr><td>가열 패드, 재사용 가능, 8" x 12"</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>천 테이프, 1" X 10 yds</td><td>Medline</td><td>MIINON260101</td><td>마취된 마우스를 억제하기 위한</td></tr><tr><td>땅콩 클리퍼/트리머</td><td>Wahl</td><td>8655</td><td>수술 부위의 털 제거용</td></tr><tr><td>ChlorHex-Q SCRUB 2%</td><td>Penn Veterinary Supply</td><td>VED1222</td><td></td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Henry Schein Company</td><td>6906727</td><td></td></tr><tr><td>Petrolatum 안과 연고</td><td>Dechra Veterinary Products</td><td>17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>2 x 2 거즈, 12겹</td><td>Butler Animal Health Supply</td><td>6936</td><td></td></tr><tr><td>멸균 필드, 장벽, 18" x 26"</td><td>Busse</td><td>696</td><td></td></tr><tr><td>Drapes (CSR Wrap)</td><td>Cardinal Health</td><td>AT 21 412</td><td></td></tr><tr><td>27G &frac12; " 바늘</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>309623</td><td></td></tr><tr><td>31G 5/16" 바늘</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>328438</td><td></td></tr><tr><td>케타민 (9 mg/ml) / 자일라진 (1 mg/ml) 용액</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>트리플 항생제 연고</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

역 형성 갑상선 암의 동소 마우스 모델

An Orthotopic Mouse Model of Anaplastic Thyroid Carcinoma

인간의 갑상선 암 동물 모델의 여러 종류의 피하 이종 이식과 면역 결핍 생쥐에 암세포의 동소 이식 등 설립되었다. 피하 이종 이식 모델은 임상 검사 및 새로운 치료 치료의 평가에 가치가 있었다. 피하 모델을 사용하면 많은 장점이 있습니다, 1) 신속, 2) 재현성, 3) 종양의 설립, 성장, 요원 및 방사선 치료에 대한 응답은 육안 검사로 모니터링 할 수 있습니다. 그러나 실질적인 증거가 1-3 피하 이종 이식 모델의 짧은 오심에 빛을 발산하고있다. 예를 들어, 피하 이종 이식 모델에서 치료 속성을 보여 의약 치료는 종종 인간의 질병에 주목할만한 영향을주지 않습니다. xenographic 이식하거나 주사 부위의 미세이 차이점의 중심에 자리 잡고 있습니다. 동소 종양 이종 이식 모델은 더 biolo을 제공합니다질병을 연구하기에 gically 관련 상황. 호스트 동물 내에서 해부학 원 상당에 병에 걸린 세포 나 조직을 이식의 장점은 적절한 종양 호스트 상호 작용 사이트, 질병 관련 전이의 개발과 임상 치료 요법에 대한 사이트 별 영향을 조사하는 기능이 포함되어 있습니다. 그들은 밀접하게 인간의 질병을 재현하기 때문에 따라서, 동소 이종 이식 모델은 훨씬 더 임상 적 가치를 항구. 이러한 이유로, 그룹의 수는 연구 도구 4-7로 동소 갑상선 암 모델의 장점을 가지고있다. 여기, 우리는 매우 침략 퇴행성 갑상선 암 (ATC)의 연구 동소 모델을 수립 치료를 저항하고, 모든 진단 환자의 거의 치명적인 방법을 설명합니다. 배양 ATC 세포 기저막 행렬을 포함하는 용액에 해리 세포 현탁액으로 준비가되어 있습니다. 작은 볼륨이 천천히 주사입니다오른쪽 갑상선에 ected. 마우스의 전체적인 모양과 건강은 최소한의 수술 후 합병증을 보장하고 암의 병리학 투과도를 측정하기 위해 모니터링됩니다. 생쥐을 4 주에 희생되고, 조직은 조직 학적 분석을 위해 수집됩니다. 동물 질병의 더 많은 사전의 진행을 검토하기 위해 나중에 시간이 지점에서 수행 할 수 있습니다. 우리 ATC 병리의 이해와 효능 2) 화면의 현재와 미래의 치료제 ATC 퇴치에 추가 1)이 동소 마우스 모델의 생산은 두 가지 목적을 수행하는 플랫폼을 설정합니다.

우리는 4 주 후에 ATC 세포로 주입 20 생쥐의 총 19 침습 갑상선 종양을 발견했습니다. 그림 2A에 표시된 예에서, 첨부 된 조건 하에서 재배 5X10 5 ATC 세포의 동소 주입받은 쥐는 4 주 후 주입하여 갑상선에 암 세포의 중요한 침투를 나타냅니다. 산성 세포질과 큰 핵을 가진 특성 spindled 세포와 중간에 거대한 크기의 세포 침입 ATC 세포의 본질은 헤 마톡 실린과 에오신 (H &amp; E) 염색에 의해 확인되었다. 비교를 위해, 비 주입 제어 동물에서 갑상선과 기관이 그림 2B에 표시됩니다. uninjected 동물의 모낭은 가까운, 그러나 느슨한 연결을 표시하고 기본적으로 둥근 형태가있다. 주사 배달 갑상선과 사용의 작은 크기로 인해, 의도하지 않은 결과가 발생할 수 있습니다. 그림 3A는 보여줍니다가장 일반적으로 관찰, 이는 외부의 종양 질량의 개발이다, 그러나 갑상선을 포괄하지. 세포가 추방되는 때까지 및 갑상선 이외의 바늘 침투 가능성보다 더 때문입니다. 그림 3b에서와 같이 가끔, 아니 종양의 성장을 제시 생쥐는 모두 조잡한 및 조직 학적으로 감지됩니다. 감지 종양 개발의 부재는 주변 조직과 공동으로 주사 부위 및 보급의 세포 현탁액의 추방으로 인해 발생할 수 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig1.jpg" alt="그림 1"/> 그림 1. 갑상선을 노출. 레이블은기도를 측면에서는 왼쪽과 오른쪽 갑상선을 나타냅니다. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig2.jpg" alt="그림 2"/> 그림 2. 종양의 성장과 조직 학적 검사성공적으로 갑상선 주사 후 vasion. 조직 표본은 관상면을 따라 단면이었다. 산성 세포질 헤 마톡 실린과 에오신 큰 핵 (와 특성 spindled 세포와 중간에 거대한 크기의 세포와 상당한 종양의 성장을 전시 마우스 200X에서 찍은) 이미지 H &amp; E)는 얼룩 화는 종양 세포가 갑상선을 침범되는 기본 병변을 나타냅니다 B) 기관지 및 제어 동물에서 갑상선 (100X에서 찍은 이미지) 화, 종양,... S, 평활근, 그럴 필요,기도, 아버지의, 갑상선. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig3.jpg" alt="그림 3"/> 그림 3. 동소 주입 의도하지 않은 결과. 조직 표본은 관상면을 따라 단면이었다.) 주변 종양의 성장 thyroi에 분명없는 성장D (검은 화살표, 100X에서 찍은 이미지). B) 총시 종양 검출의 부족 (표시되지 않음) 또는 조직 학적 검사 (50X에서 찍은 이미지). 아버지의, 갑상선.

퇴행성 갑상선 암의 동소 마우스 모델의 생성은 여기에 설명되어 있습니다. 이 기술은 따라서 질병의 진행뿐만 아니라 화면 혁신적인 치료 개입을 연구하는 많은 임상 관련 설정을 생성, 면역 결핍 쥐의 갑상선에 인간의 퇴행성 갑상선 암 세포의 수술 위치를 사용합니다.

Several types of animal models of human thyroid carcinomas have been established, including subcutaneous xenograft and orthotopic implantation of cancer ...

이 절차의 전반적인 목표는 정형소 이종 이식 마우스 모델을 확립하기 위해 인간 역형성, 갑상선 암종 또는 TC 세포를 갑상선에 외과적으로 배치하는 것을 입증하는 것입니다. 이는 먼저 TC 세포를 배양하고 수확하여 수행됩니다. 수술을 위해 마우스를 준비한 후 목을 두 번 연속적으로 세로로 절개하여 갑상선을 노출시키고 A TC 세포를 오른쪽 갑상선에 천천히 주입합니다.마지막 단계는 봉합사로 절개 부위를 봉합하고 마우스가 회복할 수 있도록 하는 것입니다. 궁극적으로 절제된 조직의 표본에 대한 조직학적 검사는 다양한 조건에서 종양의 성장과 침입을 보여주는 데 사용됩니다. 피하 이종 이식과 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 정소성 이식이 TC 세포를 생물학적 틈새에 배치하고 인간에서 발생하는 질병 진행 및 병리학을 밀접하게 복제한다는 것입니다.이 방법은 갑상선암 공격성의 생물학적 기전을 결정하는 것과 같은 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 세포 수확 하루 전에 세포가 70-80% 융합 해동되고 섭씨 4도에서 0.01ml의 주요 겔이 있을 때 완전한 RPMI 1640 보충 배지를 사용하여 6개의 Well 배양 플레이트에서 인간 A TC 세포주 TJ 11 T를 배양하여 이 절차를 시작합니다. 세포가 펠렛화되면 트립신을 사용하여 세포를 80-90% confluent가 되면 세포를 수확하고, 배지를 흡인하고, 수확된 각 6개의 웰 플레이트에 대해 2밀리리터의 보충된 RPMI 1640 배지에 세포를 재현탁합니다.다음으로, 세포 현탁액을 0.4% Triam blue dye와 일대일로 혼합하여 세포 밀도를 측정하고 TC 10 자동 세포 계수기를 사용하여 세포 밀도를 측정합니다. 마우스당 500, 000개의 세포를 주입하는 데 필요한 세포 현탁액의 부피를 계산합니다. 계획된 임플란트 수의 두 배를 계산하여 이식에 적합한 세포를 사용할 수 있는지 확인합니다.필요한 부피의 세포 현탁액을 15ml 원뿔형 튜브로 옮깁니다. 다음 원심분리기, 실온에서 4분 동안 200Gs로 원심분리기. 그런 다음 배지를 흡인하고 완전한 RPMI 1640 보충 배지에서 밀리리터당 1억 개의 세포로 세포를 재현탁합니다.다음으로, 세포를 1.6ml 튜브로 옮깁니다. 마트리 젤 한 부피를 넣고 천천히 피펫을 넣었다 빼서 부드럽게 섞습니다. 필요할 때까지 세포 현탁액을 얼음 위에 놓습니다.먼저 해부 내시경을 포함한 수술 부위와 주변 부위를 70% 에탄올로 모든 표면을 닦아 소독합니다. 그런 다음 난방 램프를 켜고 멸균 패드를 내려 놓아 회복 영역을 준비합니다. 마우스를 마취하고 먼저 턱선에서 흉골 상단, 각 팔까지 마우스의 목 부위를 면도하여 수술을 준비합니다.다음으로, 클로르헥시딘에 적신 가우 스퀘어와 에탄올을 번갈아 가며 수술 부위를 세 번 망칩니다. 그런 다음 Betadine에 담근 거즈로 마지막으로 한 번. 또한 눈이 건조해지는 것을 방지하기 위해 눈 연고를 부드럽게 바르십시오.이 시점에서 페달 반사를 확인하여 마우스가 적절하게 진정되었는지 확인하십시오. 그런 다음 마우스 등쪽 누운 자세를 일회용 멸균 필드 장벽에 놓습니다. 해부 범위 아래에서 천 테이프로 마우스를 제자리에 고정합니다.다음으로, 손과 손톱을 꼼꼼히 문지르고 멸균 방식으로 멸균 수술용 장갑을 착용하고 수술 팩을 열고 기구를 정리합니다. 마지막으로, 수술 부위만 노출된 상태로 마우스 위에 멸균 드레이프를 놓습니다. 멸균된 일회용 메스를 사용하여 목의 정중선을 따라 1-1.5cm의 세로 절개를 만드는 것으로 시작합니다.큰 동맥에 흠집이 나거나 절단될 가능성이 높아지므로 정중선에서 벗어나지 마십시오. 기관을 둘러싼 스트랩 근육을 두 번째로 절개합니다. 그런 다음 절개된 근육의 오른쪽을 옆으로 당겨 오른쪽 갑상선을 노출시킵니다.조수가 주사기를 넘겨주도록 합니다. 31 게이지 인슐린 주사기를 사용하여 오른쪽 갑상선에 천천히 주입합니다. 그런 다음 바늘을 부드럽게 제거하고 단속 봉합 스타일을 사용하여 6 개의 나일론 모노 필라멘트 봉합 재료로 근육층을 함께 봉합합니다.마지막으로, 수술 후 같은 방식으로 피부를 꿰매십시오. 절개 부위에 삼중 항생제 연고를 직접 바릅니다. 마우스가 램프 아래에서 등쪽 누워있는 자세를 회복하도록 합니다.마우스가 도움 없이 흉골 누운팅을 달성할 수 있게 되면 케이지에 있는 다른 마우스와 함께 다시 배치할 수 있습니다. 수술 후 일주일 동안 절개 부위와 마우스의 전반적인 건강 상태를 매일 확인하십시오. 그런 다음 일주일에 한 번 확인하십시오.언제든지 쥐의 건강이 쇠퇴하는 징후를 보이면 안락사시키고 조직을 채취해야 합니다. 생쥐가 미리 정해진 수술 후 시점에 도달하면 케타민과 자일라진으로 마취하고 완충액으로 동물을 지체적으로 관류한 다음 고정제를 투여한 다음 조직을 수확하여 조직학을 위해 처리합니다. 주사를 맞지 않은 대조 동물의 갑상선과 기관은 헤마틴과 에오신 염색 여포와 함께 여기에 나타나 있으며, 밀접하면서도 느슨한 연관성을 나타내며 본질적으로 둥근 형태를 가지고 있습니다.대조적으로, 500, 000 A TC 세포의 orthotopic 주사를 받은 마우스는 주사 후 4주까지 암세포가 갑상선으로 현저히 침투하는 것을 나타냅니다. 침입 세포의 성질은 특징적인 방추형 세포와 호산구성 세포질과 큰 핵을 가진 중간에서 거대 크기의 세포를 보여줍니다. 갑상선의 크기가 작고 주사 가능한 전달을 사용하기 때문에 갑상선 외부에 종양 덩어리가 생기는 것과 같은 의도하지 않은 결과가 발생할 수 있지만 갑상선을 포함하지 않습니다.이것은 세포가 배출될 때 갑상선을 통한 바늘 침투 때문이며, 때때로 종양 성장이 없는 마우스가 여기에서 볼 수 있듯이 총체적으로나 조직학적으로 검출됩니다. 검출 가능한 종양 발생의 부재는 주사 부위에서 세포 현탁액이 주변 조직 및 공동으로 배출되어 발생합니다.이 기술을 마스터하면 20분 이내에 수행할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 역형성 갑상선 암종에 대한 고유한 orthotopic 모델을 생성하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.수술을 통해 갑상선에 접근하여 배양된 C 세포를 주입합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이게 맹장에 피하 종양의 조각의 cecal 벽이나 이식으로 암 세포 현탁액의 주입 : 두 기술이 모델을 확립하는 데 사용할 수 있습니다. 이 모델은 대장암의 자연 진행을 공부하고 대장암에 대한 새로운 치료 요원을 테스트하는 데 유용합니다.

대장암의 Orthotopic 마우스 모델

에 대한 면역 적격 마우스에 묽은 난소암의 Orthotopic 모델 생체내에</em종양 면역 응답> 종양 이미징 및 모니터링

이 비디오는 마우스 모델에서 유방암 정소성 접종 기술을 보여줍니다. 이 기술은 피하 또는 비수술적 주사에 비해 종양 크기와 모양의 변동성이 적고 높은 종양 형성률을 생성합니다.

정소주사: 성체 마우스에 조직 특이적 암세포 이식

이 비디오는 갑상선암 세포를 마우스 모델의 갑상선에 orthotopic 접종하는 절차를 설명하며, 이는 발암을 평가하고 잠재적인 치료 전략을 발견하기 위한 귀중한 플랫폼 역할을 할 수 있습니다.

Orthotopic Inoculation of Thyroid Cancer Cells into Murine Thyroid: A Procedure to Establish Orthotopic Thyroid Cancer Mouse Model(쥐 갑상선암에 갑상선암 세포의 정소성 접종: 정소성 갑상선암 마우스 모델 수립 절차)

동소 유방암 차 종양 모델 원발 종양의 외과 적 제거가 기재되어 자발적 전이를 생성하는 마우스의 수명을 연장한다. 종양 성장 및 진행 모니터링하고 루시퍼 형광 이미징에 의해 정량화된다.

자발적 유방암 전이의 동소 이식 마우스 모델

전립선암은 미국에서 암 관련 사망의 두 번째로 흔한 원인입니다. 정소성 암 모델은 전립선암의 생물학을 이해하고 치료 요법의 효능을 평가하는 데 유용한 접근 방식을 제공합니다. 이 프로토콜은 정형소 전립선암 마우스 모델을 확립하는 데 필요한 자세한 단계를 설명합니다.

인간의 전립선 암의 전 임상 동소 이식 쥐 모델

임상 맥락에서, 국소췌암을 가진 환자는 부주 처리를 선행한 pancreatectomy를 겪게 될 것입니다. 여기에서 보고된 이 프로토콜은 말단 판생성 절제술 및 비장 절제술다음에 췌장암의 정형소 이식을 통해 누드 마우스에서 이 임상 시나리오를 모델링하는 안전하고 효과적인 방법을 확립하는 것을 목표로 합니다.

췌장암의 정형소 절제술 마우스 모델

여기에서 우리는 자발적인 유전자 조작 마우스 모델에 의해 쥐 ATC 종양을 얻기 위한 표준 파이프라인을 제시합니다. 또한, 우리는 원발성 및 전이된 병변에 대한 종양 역학 및 병리학적 정보를 제시합니다. 이 모델은 연구자들이 종양 형성을 이해하고 약물 발견을 촉진하는 데 도움이 될 것입니다.

역형성 갑상선암의 자발적인 쥐 모델

하시모토 갑상선염의 여러 유형의 동물 모델이 확립되었으며, NOD 마우스의 자발성 자가면역 갑상선염도 확립되었습니다. H-2h4 마우스는 HT 유도를 위한 간단하고 신뢰할 수 있는 모델입니다. 이 기사에서는 이 접근 방식을 설명하고 SAT 쥐 모델을 더 잘 이해하기 위해 병리학적 과정을 평가합니다.

마우스 자발성 자가면역 갑상선염 모델 생성

현재 프로토콜은 전체 마우스 갑상선을 시각화하고 역형성 갑상선 암종의 성장을 모니터링하기 위한 고주파 초음파를 설명합니다.

유전자 조작 마우스 모델에서 동소 ATC 종양 분석을 위한 고해상도 초음파 검사

PDX 모델이 중개 종양학 분야에서 빠르게 표준이 되고 있기 때문에 현재 프로토콜은 역형성 갑상선 암종(ATC) 및 두경부 편평 세포 암종(HNSCC)의 환자 유래 이종이식(PDX) 모델을 설정하고 특성화합니다.

역형성 갑상선 암종 및 두경부 편평 세포 암종의 환자 유래 이종 이식 모델의 확립 및 특성화

학습하세요 역형성 갑상선암의 동소 마우스 모델 구축 방법을. 수술을 통해 인간 암세포를 갑상선에 주입하고 조직학적 분석으로 종양 성장을 평가하는 이 기법은 질병 진행과 치료 전략 연구에 활용됩니다.

역 형성 갑상선 암의 동소 마우스 모델

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