1.2: 마이크로 플레이트 리더 소개

마이크로플레이트 리더는 마치 많은 미세한 실험을 동시에 수행하는 것처럼 많은 샘플을 동시에 측정할 수 있는 널리 사용되는 기기입니다.

이 장치는 96 웰 플레이트와 같은 멀티웰 플레이트와 함께 사용됩니다.

마이크로플레이트 리더를 사용한 실험 유형에 관계없이, 표준 곡선은 종종 실험 샘플의 값과 양성 및 음성 대조군을 결정하는 데 사용됩니다.

마이크로플레이트 리더기는 다양한 모양, 크기 및 설정으로 제공됩니다. 많은 마이크로플레이트 리더에는 다양한 분석을 수행할 수 있는 다중 모드 기능이 있습니다. 이러한 양식에는 흡수, 형광 및 발광 측정과 같은 다양한 유형의 측정을 수행할 수 있는 기능이 포함됩니다.

멀티웰 플레이트는 마이크로플레이트 리더의 필수 구성 요소이며 기계에서 측정한 샘플을 보관하는 데 사용됩니다. 이 플레이트는 크기가 다를 수 있으며 다양한 유형의 우물 바닥과 다른 수의 우물이 있을 수 있습니다. 사용되는 플레이트의 유형은 분석에 따라 다릅니다.

로딩 트레이는 96웰 플레이트를 기계로 가져오는 데 사용됩니다.

컴퓨터 인터페이스는 일반적으로 플레이트 리더를 작동하고 파장 및 모드와 같은 설정 및 매개변수를 제어하는 데 사용됩니다. 플레이트 리더 소프트웨어에는 플레이트의 그래픽 사용자 인터페이스가 있어 샘플이 로드된 웰을 선택할 수 있습니다.

멀티채널 피펫은 종종 멀티웰 플레이트를 로드하는 데 사용됩니다. reservoirs에는 멀티채널 파이펫을 위한 용액이 들어 있습니다.

웰은 때때로 표준 단일 채널 파이펫을 사용하여 로드할 수 있습니다.

샘플과 표준물질은 파이펫팅 오류를 설명하기 위해 중복 또는 삼중으로 로드됩니다. 여기에 세 번으로 적재된 플레이트가 표시됩니다.

표준 곡선은 농도가 알려진 샘플을 사용하며, 이 샘플은 서로 다른 흡광도 값을 산출합니다. 그런 다음 이 데이터를 사용하여 최적선이 생성되는 그래프를 만듭니다.

블랭크는 실험적으로 관련이 없는 측정 범위를 결정하는 데 사용되며 샘플이 희석되는 버퍼 또는 샘플이 노출되는 시약으로 인한 것입니다. 이러한 측정에서 얻은 값을 "배경"이라고 합니다. 블랭크에는 샘플이 포함되어 있지 않습니다.

양성 대조군은 분석이 제대로 작동했는지 여부를 나타냅니다. 그것은 좋은 결과를 제공합니다. negative control은 측정/효과가 관찰되지 않을 것으로 예상되는 control variable입니다. 그것은 어떤 결과도 산출하지 않아야 합니다..

플레이트가 설정되면 샘플을 로드할 차례입니다. 잘못된 샘플을 측정하거나 플레이트를 잘못된 방식으로 적재하는 것을 방지하려면 로딩 트레이에서 플레이트의 방향을 올바르게 지정하는 것이 중요합니다. 트레이에 샘플을 넣을 때 주의를 기울이는 것을 잊지 마십시오.amp트레이에 트레이를 기기에 강제로 넣거나 기기 내부의 사지가 걸리지 않도록 트레이에 넣습니다.

트레이가 로드되면 플레이트를 읽기 전에 모드, 파장 및 웰 로딩 순서와 같은 매개변수가 소프트웨어에서 설정됩니다.

매개변수가 설정되면 플레이트가 판독되고 리더는 소프트웨어 내에서 값의 판독값을 생성합니다.

플레이트를 읽은 후 빈 샘플의 평균값을 사용하여 표준 곡선을 포함한 모든 샘플에서 배경을 뺍니다.

판독 후, 표준에 대해 알려진 농도 값은 각각의 측정 값, 이 경우 흡광도에 대해 표시됩니다.

값이 그려지면 선형 회귀를 사용하여 최적선을 계산할 수 있습니다. 이것은 스프레드시트 프로그램을 사용하여 쉽게 수행할 수 있습니다.

선이 실제 데이터 포인트를 얼마나 잘 예측하는지에 대한 통계적 측정인 결정 계수는 0.90-0.99 사이여야 하며, 0.99가 가장 좋은 값으로 간주되며 선이 데이터에 완벽하게 맞는다는 것을 나타냅니다.

최적선을 사용하여 Y에 대한 흡광도 값을 연결한 다음 X에 대한 방정식을 풀어 각 웰에 있는 실험 샘플 또는 대조군의 농도 값을 계산할 수 있습니다. 농도 값은 Y축의 흡광도 값에서 최적선까지 선을 그린 다음 X축까지 선을 그려서 추정할 수도 있습니다.

많은 유형의 마이크로플레이트 리더는 흡광도를 측정하며, 이는 물체를 통해 전달되는 빛에 대한 물체에 떨어지는 빛의 대수 비율로 정의됩니다.

Bradford 분석은 흡광도 기반 마이크로플레이트 리더 분석법의 한 예로, 단백질 샘플이 ? 브래드 퍼 드? 시약. 이 화합물은 샘플의 단백질에 결합하여 흡광도에 변화를 일으킵니다.

형광 기반 분석에서 형광 색소는 특정 파장의 빛에 의해 활성화되고 차례로 형광 색소의 여기(excitation)를 일으켜 다른 파장의 빛을 방출합니다.

빛에 민감한 시약으로 작업할 때는 광표백 및 실험 망가짐을 방지하기 위해 시약을 덮어 두십시오.

발광 분석은 화학 반응을 통해 빛을 방출하며 종종 루시퍼라아제를 사용합니다. 루시페라제는 반딧불이와 같은 다양한 출처에서 유래합니다. 루시페라제 반응에서는 루시퍼라아제가 일련의 반응으로 산소, ATP, 마그네슘을 만날 때 빛이 방출됩니다.

발광 분석은 다양한 응용 분야가 있습니다. 이 응용 프로그램의 예로는 암에서 활성 산소 종의 생산 및 검출을 측정하는 것이 있습니다.

마이크로플레이트 리더를 사용하는 다른 응용 분야에는 384웰 및 1536웰을 사용하는 고처리량 분석이 포함됩니다. 이 분석에서 플레이트는 로봇에 의해 적재됩니다. 아니, 그런 로봇이 아니야. 매우 정밀한 시료 처리를 자동화하는 프로그래밍 가능한 로봇입니다.

당신은 방금 마이크로플레이트 리더에 대한 JoVE의 소개를 보았습니다. 이 비디오에서는 마이크로레이트 리더가 무엇인지(A), 어떻게 사용되는지(B), 이 기기를 작동하는 방법(C), 마이크로플레이트 리더 데이터를 해석하는 방법 및 마이크로플레이트 리더(D)를 사용하는 일부 애플리케이션을 보여주었습니다. 시청해 주셔서 감사합니다.