Name: DNBS / TNBS 대장염 모델 : 염증성 장 질환에 대한 통찰력과식이 지방의 효과를 제공 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-27T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 4 s
Description: 배우세요 쥐와 래트에서 DNBS를 이용한 대장염 유도 방법으로 염증성 장 질환 연구를 수행하세요. 이 프로토콜은 장 상피 손상 및 복구 메커니즘을 분석하고 식이 지방의 효과를 평가하는 데 활용됩니다.

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이 작품은 캐나다 자연 과학 및 공학 연구위원회 (NSERC)과 크론과 캐나다의 대장염 재단 (CCFC)에서 KJ로 운영 교부금에 의해 지원되었다. VM은 CFRI 친목 및 GB 건강 연구의 캐나다 연구소 (CIHR)에서 대학원 재학에 의해 지원됩니다. BAV는 창자와 간 장애 소아 소화기 및 KJ의 소아 IBD 연구 및 캐나다 연구 의자 재단 (CHILD) 의자는 어린이와 어린이 및 가족 연구소 (CFRI) 임상 과학자 상 프로그램에서 지원하는 수석 임상 과학자와 어린이입니다 브리티시 컬럼비아 대학.

동물을 대상으로 한 절차 브리티시 컬럼비아 대학의 기관 동물 케어 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 설명 동물 관리 지침을 따르십시오. 대표적인 결과는 흰쥐에서 제출 될 것입니다 동안이 프로토콜에 언급 된 절차는 쥐와 생쥐 모두에 대해 설명한다. 1. DNBS 및 직장 내 관리의 준비 <ol><li> 쥐 DNBS의 직장 점안를 들어, 갓 50 % 에탄올 DNBS/250 μL의 15 ~ 30 밀리그램을 준비합니다. 마우스의 경우, 50 % 에탄올 DNBS/100 μL의 2-6 밀리그램을 준비합니다. 참고 : 각 시설에서 관리 할 수​​있는 정확한 DNBS 농도를 최적화합니다. 수컷 스프 라그 - 돌리 래트 및 C57BL / 6 마​​우스, 그러나 다른 마우스 및 래트 균주 사용될 수는 DNBS 대장염의 유도를 위해 바람직하다. 대조군은 단 하나, OMI 수를 에탄올의 효과를 관련 경증 또는 결석으로 50 % 에탄올로 처리 한 마우스 및 래트가 사용될 수있다연구 12이 그룹의 포함을 t. </li><li> 끝으로 고정 (마우스 - - 쥐 또는 PE-50 PE-90) 폴리에틸렌 카테 테르가 19 G 바늘로 1 ML의 주사기를 연결합니다. </li><li> 가볍게 가열 패드에 쥐 또는 마우스 휴식 마취 (코 콘을 통해 1.5 %의 이소 플루 란을 투여하여 예를 들면, 동물들은 여전히 깜짝 연하 반사 신경을 가지고 정기적으로 호흡을 표시해야합니다.) 건조 눈을 피하기 위해 눈에 눈물 젤을 적용합니다. </li><li> 부드럽게 원위부 대장에 존재할 수있는 모든 의자를 제거하기 위해 동물의 후방 끝에 손가락 끝의 압력을 적용합니다. </li><li> 부드럽게 마우스의 경우 쥐, 또는 3~4센티미터의 항문에 약 8cm의 근위부에 도달하는 카테터, 직장 내 카테터를 삽입합니다. 쉽게 삽입을 허용 윤활 카테터를 삽입하는 동안 용액을 소량 주입. 주 : 카테터를 삽입하는 동안 어떤 저항이 느껴지는 경우,이 천공으로 이어질 수 있으므로 삽입하기 위하여 계속하지 않는다장벽. 카테터를 제거하고 다시 진행하기로 대장을 윤활, 부드럽게 삽입을 시도. </li><li> 천천히 250 (쥐) 또는 100 (쥐) DNBS ㎕의, 또는 컨트롤 같은 부피의 50 % 에탄올을 주입. DNBS을 주입 한 후, DNBS의 손실을 방지하기 위해 90 초 동안 동물 머리 아래로 놓습니다. </li><li> DNBS 관리 후 첫 주 동안 탈수를 방지하기 위해 0.2 %의 식염수에 동물에게 8 % 자당의 물을 공급. </li><li> 조심스럽게 체중 감소와 실험 기간 동안 탈수의 증세 매일 모니터링과 함께 동물을 관찰합니다. 주 : 체중 감소가 급속히 최대 허용 체중 감소 CCAC 권장 접근있다. 이것은 주로 탈수 유래하기 때문에, 체중 감소는 탈수를 제한하는 락 테이트 화 링거액을 관리하기위한 지표로 사용한다. 적절한 건강 문제에 대한 시설의 수의사와 상담하시기 바랍니다. </li></ol> 2. 공동조직을 llecting 및 DNBS 장애인 마우스의 조직 학적 손상을 평가 <ol><li> DNBS와 공격 후 원하는 시점에 충분한 산소를 보충 마취 챔버에서 이소 플루 란과 했나봐 동물을 안락사. 더 상승 또는 가슴의 하락을 볼되지 않을 때까지 동물을 관찰하고 더 만져서 알 수있는 심장 박동이 없습니다. 확인 동물은 제대로 자궁 경부 전위 다음에 발가락 끼거나 각막의 접촉에 대한 응답의 부재로 안락사되었습니다. </li><li> 복강을 열고 전체 대장을 제거합니다. 길이 방향으로 장을 열고, 거시적 점막 궤양은 쥐의 대장 (마우스 2 ~ 3 CM)의 선단에서 약 5-6센티미터 근위를 관찰해야한다. 주의 : 원하는 경우 대장을 제거한 후에 거시적 손상 점수를 평가. 대조군에서의 해부학 적 위치를 대응에서 결장의 세그먼트를 수집합니다. 참고 : 매크로 손상 점수에 대한 조직을 처치 개인해야처리 군의 신원을 멀게 할. 심각도 및 궤양의 범위 (0-10), 결석 또는 설사의 존재 (0 또는 1), 유착 (0, 1, 또는 2)와 최대 결장 벽 두께에 대한 점수와 합산 : 다음과 유사한 조건을 사용하여 조직 섹션을 점수 밀리미터 11. </li><li> 0.5 cm 섹션이 최대 거시적 인 손상의 사이트에 인접 수집합니다. 스냅 후 폐장 내 myeloperoxidase (MPO) 활동 (호중구 침투의 측정)를 평가하고, 조직 학적 분석을 위해 10 % 중성 포르말린의 다른 섹션을 배치하는 액체 질소 한 0.5 cm 섹션을 동결. 참고 : 폐장 내 myeloperoxidase 분석은 최대 1 개월 -80 ° C에 저장할 수 있습니다 냉동 조직을 스냅. </li><li> 2.3 단계에서 조직 학적 분석을 위해 수집 된 조직이 하룻밤 포르말린에 고정하고 70 % 에탄올로 세척 할 수 있습니다. 파라핀 조직을 포함하고 원하는 두께 (3 ~ 5 μm의), 조직 학적 채점 hemotoxylin과 에오신 (HE)와 얼룩을 잘라. </li&gt; <li> 이 관찰자가 각 그룹에 대한 조직 학적 손상 점수를 결정하기 위해 광학 현미경으로 각 동물로부터 적어도 세 조직 섹션을 점수를 가지고. 참고 : 조직 학적 손상의 점수에 대한 조직을 처치 개인이 치료 그룹의 정체성에 눈을 멀게한다. 염증 세포 침윤의 정도 (0 = 결석, 3 = 전층), 점막 구조의 손실 (0 = 결석, 3 = 중증), 존재 토굴 농양의 부재 (0-1) : 다음 또는 이와 유사한 기준을 사용하여 조직 섹션 점수 , 술잔 세포 고갈 (0-3). 이러한 점수 (11)의 합으로 조직 학적 손상의 점수를 결정합니다. </li></ol> 3. DNBS에 폐장 내 myeloperoxidase (MPO) 분석을 수행하는 장애인 창자 조직 <ol><li> 2.3 단계에서 얻어진 0.5 cm 결장 세그먼트 분석 MPO 활동. MPO 균질화 완충액에서 조직 50 밀리그램 결장 segme을 얻었다 (50 mM의 인산 칼륨 완충액에서 0.5 %의 헥사 데실 - 암모늄 브로마이드 (산도 6.0)) 균질화균질화 버퍼 정지 NT는 / ㎖. </li><li> X g 만에 2 분 동안 4 ° C에서 1 ㎖ 부분과 원심 분리기에 균질화 된 솔루션을 나누어지는. </li><li> O-dianisidinedihydrochloride의 0.167 ㎎ / ㎖와 큐벳에 0.0005 %의 과산화수소를 함유하는 2.9 ml의 50 mM의 인산염 완충액 (pH 6.0)으로 각각 나누어지는을 100 μl를 섞는다. </li><li> 460 nm에서 분광 광도계를 사용하여 흡광도의 비율을 측정한다. 참고 : MPO 활동은 실온에서 H 2 O에 H 2 O 2의 1 μmol / 분 분해 효소의 양으로 정의하고, 조직의 MG 당 단위로 표현된다. </li></ol>

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</ol>

저자는 더 경쟁 재정적 이익이 없다는 것을 선언합니다.

이 프로토콜에서 설명 DNBS 모델은 IBD의 다양한 양상을 연구하기 위해 이용 될 수있는 귀중한 저렴하고 재현성 대장염 모델이다. 쥐나 생쥐로 직장 내 투여시, DNBS는 다형 핵 세포의 전층 침투하고 지배적 인 NF-κB 의존 TH1 활성화 등의 다양한 조직 학적 기능의 측면에서 인간의 크론 병을 닮은, 대장에 염증과 조직 손상의 상당한 정도를 유도한다. 이 모델은 스트레스, 우울증, 다이어트뿐만 아니라, 장용 신경계의 참여, 부상 - 수리 메커니즘, 전층 염증 및 임상 치료로 IBD에 영향을 미칠 것으로 생각 다양한 요인을 연구하는 데 사용되었습니다. DNBS 모델은 마우스 및 쥐에서 TNBS에 의한 염증에 대한 적절한 대안과 같은 DSS로 대장염의 다른 일반적으로 사용되는 화학 모델보다 저렴한 대안을 제공합니다. 이 P에 설명 된 단계rotocol 하나는 성공적으로이 모델을 실행 할 수 있습니다. 대장염 13...

염증성 장 질환 (IBD)은 설사, 체중 감량 및 복부 통증의 증상의 결과, 위장 (GI) 관에 만성 재발 성 염증에 의해 특징된다. 궤양 성 대장염 (UC) 및 크론 병 (CD)은 IBD의 두 가지 주요 형태이며, 위장관 내에 염증의 위치에 의해 구별 될 수있다. UC 환자에서 염증은 일반적으로 항문을 포함하고 단지 표면 점막에 영향을 미치는 변수 범위에 대한 결장까지 연속적으로 연장된다. 그것은 주로 회장 및 맹장 영향을 미치지 만 대조적으로, CD는, GI 트랙트의 어떤 부분에 영향을 미칠 수있다. 전층 염증이 자주 육아종과 연관 (fistulizing) 질병을 협착 (fibrostenotic) 및 / 또는 관통 선도로 CD가 자주 나타난다. IBD의 원인이 애매 남아 있지만, 잘 IBD는 호스트 사이의 면역 체계, 유전 적 감수성과 respon을 상호 작용을 포함, 인성 것을 허용한다환경과 미생물 요인 SES. 현재까지, IBD의 다른 모델은 UC와 CD의 특성 다양한 임상 조직 학적 및 면역 반응을 표시하는 제안되었다. 가장 일반적으로 사용되는 모델은 유전자 변형 마우스 (IL-2, IL-10, SAMP / YIT), 감염에 의한 모델 (시트로 박터의 rodentium, 살모넬라 티피 뮤 리움), 입양 전송 모델 (CD45 + RB 고, SCID 마우스에 CD62L + 셀 전송)를 포함하고 화학적으로 유도 된 대장염 모델 (덱스 트란 황산 나트륨 (DSS), 트리니트로 벤젠 술폰산 (TNBS), 및 니트로 벤젠 설 폰산 (DNBS)). 그들의 낮은 비용과 질병의 급속한 발병으로 인해, 화학 모델은 IBD의 다양한 측면의 연구에 매우 중요한 것으로 간주됩니다. 열거 된 화학 대장염 모델의 각 IBD에 자신의 임상 면역 학적 및 조직 병리학 적 관련의 몇 가지 측면에서 이점뿐만 아니라 제한 사항이 있습니다. DSS는 대장균을 유도하기 위해 사용하는 가장 일반적인 화학적 방법 중 하나이다설치류 1 TIS. 3~10%의 DSS (MW : 42 kDa의)의 관리 생쥐의 마시는 물에 7 ~ 10 일 증상 및 체중 감소, 피로, 설사, 대장 단축, 점막 궤양 및 호중구의 침윤을 포함하여 대장염의 증상을 유도 할 수있다. 이 모델은 약물 검사 연구뿐만 아니라 상피 재생, 점막 항상성에 대한 선천성 면역의 영향과 장 발육과 선암의 개발을 촉진하는 염증의 역할의 메커니즘을 탐구에 특히 유용합니다. 약간의 정도, 범위의 변화의 결과로 다른 동물 시설 대장염을 유도하기 위해 필요한 DSS의 농도뿐만 아니라, 마우스로 일관성이 물을 흡수의 변화 및 ​​DSS에 따라서 일관성 노출을 포함하여 DSS 모델과 단점, 그리고 그러나이있다 대장의 점막 손상과 궤양의 유통. 이러한 모든 기능은 결과의 이질성으로 이어질 연구 FR을 통해 결과를 비교 할 수있는 능력을 제한톰 다른 연구 그룹. DSS 모델에 대한 대안은 대장염의 합텐 유도 DNBS 또는 TNBS 모델입니다. 이 모델은 점막이 에이전트 DNBS 또는 에탄올의 농도 변화에 희석 TNBS를, 민감의 직장 점안을 사용합니다. 에탄올의 투여는 고유 층에 DNBS 또는 TNBS의 침투를 허용하는 대장 점막 장벽을 깰 수있는 필수 조건이다. DNBS / TNBS는 이에 타고난 호스트 및 적응 면역 반응을 유발, 면역 원성이 될 지역화 대장과 장내 미생물의 단백질을 haptenize됩니다. 일반적으로,이 모델은 심각하고 때때로 혈변, 체중 감소 및 장 벽 비후 그러나 증상 사용 설치류의 종류뿐만 아니라, 타이밍, 도즈 및 DNBS 노출 또는 사용될 TNBS의 정도에 따라 변화와 관련된 연구. 쥐와 생쥐 사이에는 중요한 차이는 낮은 구매 및 보드에 대한 비용뿐만 아니라 로우의 장점과 함께 주목해야한다생체 내에서 치료의 당 동물의 비용을 절감하기위한 R 체질량. 이것은 더 연약하고 반응하는 동물은 신속하게 인도적인 엔드 포인트에 도달 할 수 있습니다 생쥐 대장염의보다 신속하고 심한 코스에 대해 설정해야합니다. 장 염증은 초기에 증가 된 상피 투과성, 점막에 미생물 침투, 호스트 단백질의 haptenization, 손상된 점막에 호중구, 대 식세포 및 TH1 T 림프구의 침윤의 결과로이 모든 선도, 장 상피 세포에 에탄올에 의한 손상을 초래한다. DNBS 비교하여, TNBS은 나트륨 및 수산화 칼륨 등의 염기와 접촉시 폭발의 위험을 초래할 수있는 고도의 산화 특성에 의한 유해 화학 물질로 간주된다. 따라서 DNBS 현재 대장염을 유도하는 TNBS를 통해 화학 물질의 선호하는 선택으로 간주된다. 설치류에서 DNBS 대장염은 FOLLO을 연구하는 가장 편리한 방법 중 하나로서 간주됩니다날개 IBD는 질병의 수정을 관련 : <ol><li> 우울증과 대장염의 재 활성화 : 그것은 IBD 환자의 스트레스, 불안과 우울증이 자주 질병의 재발과 연관된 것으로 나타났습니다. DNBS 대장염은 생쥐에서 대장염의 재 활성화에 우울증과 그 결과의 역할을 연구하기에 적합한 모델입니다. 이 방법은 일반적으로 6-8주에 마우스를 떠남 대장염의 해상도에 따라 DNBS하여 대장염의 초기 유도를 포함한다. 마우스는 다음 DNBS 2 subcolitic 용량과 도전을 통해 대장염의 활성화를 위해 그들을 테스트하여 다음에 우울증을 유발하는 등 레 세르 핀 우울증의 원인이 에이전트 또는 후각 bulbectomy에 의해 관리됩니다. </li><li> 스트레스와 대장염의 재 활성화 : 스트레스는 IBD의 발병에 연결되어 있습니다 또 다른 일반적인 환경 요인이다. 만성 스트레스와 설치류의 UC 및 CD의 증상의 발병 사이에 강한 연관 관계를 제안 증거의 성장 몸이있다인간과 인간이 아닌 영장류 3뿐만 아니라의. DNBS 대장염은 마우스 및 쥐 모두에서 대장염의 스트레스 관련 재활을 연구하는 좋은 모델입니다. 방법은 일반적으로 우울증 대신 제외 우울증에 대한 전술 한 바와 같이 유사한 방식으로 사용되며, 동물 등 음파와 구속 스트레스 4와 같은 스트레스에 노출된다. </li><li> 신경성 염증 : 다수의 연구는 동물 모델에서와 IBD 환자에서 조직 샘플에서 볼 수있는 것처럼 장용 신경계 (ENS)의 구조와 기능에 일시적 또는 영구적 인 변화 중 하나를 설명했다. DNBS는 ENS 5에 염증의 효과를 탐구 및 노르 아드레날린 및 콜린성 신경 경로 6을 모두 연구하는 좋은 모델입니다. </li><li> 부상 복구 메커니즘 : IBD 병인 동안, 반응성 산소 종 (ROS), 산화 질소 (NO), 간 부착 분자 3 (ICAM-3), 및 P-셀렉틴과 같은 숙주 유래 부상 매개체는 모두 P 보여왔다장 상피 중단하는 역할을 놓는다. DNBS은 이러한 매개체의 최대 규제뿐만 아니라 선택적인 약물이나 억제제 7,8를 사용하여 규제 수리 메커니즘에 의한 부상을 연구 할 수있는 좋은 모델입니다. </li><li> 전층 염증 : DNBS의 상술 한 애플리케이션 외에, 모델은 창자의 전층 염증, CD 환자에서 발견 고전 기능을 연구하기 위해 적용될 수있다. DNBS 및 TNBS 유도 대장염은 모두 T 세포 의존성 면역 메커니즘을 연구하는이 모델은 특히 유용하고 대장 점막에, 림프구의 중요한 침투와 연관되어 있습니다. </li></ol> DSS 모델과 비교, DNBS 및 TNBS 유도 대장염의 장점은 저렴한 비용으로, 대장염의 급속한 발전 (일반적으로 재현 궤양과 염증을 보여 1-3 일이 필요) 원위 결장 일관성 지역화 손상이 (가) 있습니다. 그러나 단점에 대한 요구 사항입니다전문 기술, DNBS / TNBS 투여 량의 최적화 및 직장 투여에 대한 마취의 필요성을 높은 수준. 이 방법론 논문에서는 (SO) 식물성 오일 잇꽃 오일을 사용한 쥐 DNBS 유도 대장염 결장 점막 반응을 변화에 N-10 및 N-3 고도 불포화 지방산의 다양한 농도의 효과를 연구 및 카놀라유 (CO) , 생선 오일 (FO). 그것은 N-10 및 N-3 지방산은 세포막의 인지질 9의 아실 잔기로서의 역할을 통해 장 염증성 질환의 중요한 매개체임을 보여왔다. N-6 지방산의 염증성 전위 달리, 충분히 높은 흡기에서 N-3 지방산은 잠재적으로 강력한 항 - 염증제이다. N-3 지방산의 항염증제 동작은 proinfl의 변조를 통해 간접적으로 아라키돈 산 대사 억제, 코사 노이드 기질로서 아라키돈 산의 보충을 통해 직접 매개 아르ammatory 유전자 발현 및 세포 신호. N-3 지방산은 또한, resolvins에 항 염증 매개체의 가족을 일으키다. N-3 지방산의 섭취는 염증성 에이코 사 노이드, 사이토 카인, 케모카인, 반응성 산소 종 및 부착 분자의 발현의 생산량의 감소와 연관된다. 이 연구에서, 쥐와, 지방산을 제외한 모든 영양소에서 동일 임의로 사료를 먹였다 지방 20 %, SO, 20 % CO, 또는 18 %의 생선 기름 플러스 2 % 홍화 오일 (FO) 10-11에서 %의 에너지로 . 매일 에너지의 비율로, SO 식단 &lt;0.06 %의 α-리놀렌산 (ALA)없이 에이코 사 펜타 엔 산 (EPA) 또는 도코 사 헥사 엔 산 (DHA)으로, 15 % 리놀레산 (LA)를 제공, CO 다이어트 4.2했다 % LA 1.9 % ALA없는 EPA 또는 DHA와, 그리고 FO 다이어트 1.4 % EPA, DHA 4.9 %, 0.32 % LA, 0.12 % ALA를 제공했다. 3 주 지질 다이어트의 개시 후, 마우스는 직장 내 DNBS 또는 50 % 에탄올을 투여 5 일 후 희생되었다. inflammatory 응답은 체중 감소, 조직 학적 손상 점수 및 티슈 마이 엘 로퍼 옥시 다제 활성의 평가에 의해 평가 하였다.

<table><tbody><tr><td>1ml 주사기</td><td>BD Biosciences</td><td>309659</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>19G 바늘</td><td>BD 생명과학</td><td>305187</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>폴리에틸렌 튜빙 PE-50</td><td>BD Biosciences</td><td>마우스의 직장내 투여를 위한</td><td>427517</td></tr><tr><td>폴리에틸렌 튜빙 PE-90</td><td>BD Biosciences</td><td>427519</td><td>쥐의 직장내 투여를 위한</td></tr><tr><td>DNBS</td><td>MP Bio</td><td>150959</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>눈물 젤</td><td>Novartis</td><td>63601662596</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>10% 포르말린</td><td>피셔</td><td>5F93-4</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>워밍 패드</td><td>Kent Scientific</td><td>TPZ-0510</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>에탄올</td><td>피셔</td><td>A-962.4</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>헥사데실트리메틸-암모늄 브로마이드</td><td>시그마-알드리치</td><td>H5882</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>인산칼륨 완충 용액</td><td>시그마-알드리치</td><td>79628-</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>o-Dianisidine dihydrochloride</td><td>시그마-알드리치</td><td>D3252</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>30% H2O2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>31642</td><td>과산화수소</td></tr><tr><td>분광도계</td><td>BioRad</td><td>Benchmarker Plus</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>광학 현미경</td><td>Zeiss</td><td>Axio Image.Z1</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>데이터 분석 소프트웨어 프로그램&nbsp;</td><td>GraphPad 소프트웨어</td><td>GraphPad Prism 소프트웨어 버전 4.00</td><td><a href="http://www.graphpad.com/">www.graphpad.com</a></td></tr></tbody></table>

dnbs / tnbs 대장염 모델 : 염증성 장 질환에 대한 통찰력과식이 지방의 효과를 제공

DNBS/TNBS Colitis Models: Providing Insights Into Inflammatory Bowel Disease and Effects of Dietary Fat

크론 병 및 궤양 성 대장염 등의 염증성 장 질환 (IBD)는, 긴 유전 적 기초와 연결되었습니다, 그리고 더 최근의 미생물 및 환경 에이전트에 면역 반응을 개최했다. 디 니트로 벤젠 술폰산 (DNBS) 유도 성 대장염 하나는 스트레스와 다이어트, 잠재적 인 치료의 효과 및 기전 장내 염증과 점막 손상으로 IBD 관련 환경 트리거의 발병 기전을 연구 할 수 있습니다. 이 논문에서, 우리는 쥐의 DNBS 유도 대장염 대장 점막의 염증 반응에 대한식이 N-3, N-6 지방산의 효과를 조사 하였다. 모든 래트 [홍화유 (SO), 카놀라유 (CO), 또는 어유 (FO)], 셋째 주 전에 노광 DNBS을 직장 내하는 지방산의 다른 유형의 예외와 동일한 규정 식을 공급 하였다. 직장 내 에탄올 주어진 대조군은 DNBS 처리 쥐, 반면 공급 지질 다이어트 모든 로스, 5 일간의 공부에 무게를 얻고 계속FO 및 CO 쥐에 투여 한 48 시간과 72 시간으로 SO 쥐에 투여에 의해 유의 한 체중 감소를 보여 가진 t 무게. 체중 증가는 72 시간 포스트 DNBS 후 재개, 5 일 포스트 DNBS에 의해, FO 그룹은 SO 또는 CO 그룹보다 높은 체중을 가지고 있었다. 대장 섹션은 5 일 포스트 DNBS 처리가 초점 궤양, 토굴 파괴, 술잔 세포 고갈, 다이어트 그룹 사이 정도에 차이 급성 및 만성 염증 세포의 점막 침윤을 보였다 수집. SO 공급 그룹 CO 뒤에 가장 심각한 손상을 보였고, FO는 조직 손상의 온화한 정도를 보여 개 먹이. 마찬가지로, 대장 폐장 내 myeloperoxidase (MPO) 활동, 호중구 활동의 마커 FO 공급 쥐가 상당히 낮은 MPO 활성을 갖는, SO CO 먹인 쥐 다음에 유의하게 높았다. IBD의 병인에서 다이어트의 영향을 결정하기 위해,이 프로토콜에 기술 된 이러한 결과는, DNBS 유도 된 대장염의 사용을 보여준다.

DNBS 쥐 (스프 라그 - 돌리) 또는 마우스 (C57BL / 6)의 도전은 일반적으로 때로는 대변에 혈액의 존재와, 일시적인 체중 감소와 설사가 발생합니다. 그러나, 유전,식이 요법과 장내 미생물 등의 요인이 DNBS 유도 성 대장염에 대한 감수성을 수정할 수 있습니다. 따라서 동물 실험에 포함 된 로컬 파생 또는 동물의 공급 업체로부터의 주문도, 같은 기관에서해야한다. 모든 동물은 신중하게 체중 감량 및 대장염 동안 고통을 고통의 증상의 정도에 대해 모니터링해야한다. 홍화유, 캐놀라 유 및 어유 DNBS 대장염의 결과 심각도에 평가되었다 :도 1-4에 제시된 결과는 세 식물 오일의 효과가있는 실험을 나타낸다. 군 간의 통계적 차이는 데이터 분석 소프트웨어 프로그램을 사용하여, 사후 Tukey의 테스트 하였다 ANOVA를 사용하여 측정 하였다. &lt;0.05의 AP 값 consi이었다중요한 dered. <p class="jove_co...

DNBS / TNBS 유도 대장염은 다른 염증성 장 질환의 한테 진찰 Pathobiology을 연구하는 저렴한 방법을 제공합니다. 이 문서에서 설명하는 프로토콜은 생쥐와 쥐 대장염을 유도하는 DNBS의 성공적인 응용 프로그램을 설명 하나는 철저하게 호스트 매개 장 반응을 연구 할 수 있습니다.

DNBS / TNBS 대장염 모델 : 염증성 장 질환에 대한 통찰력과식이 지방의 효과를 제공

Inflammatory Bowel Diseases (IBD), including Crohn&#39;s Disease and Ulcerative Colitis, have long been associated with a genetic basis, and more recently ...

본 절차의 전반적인 목적은 DNBS(dinitro benzene sulfonic acid)를 사용하여 염증성 장질환(IBD)을 연구할 수 있는 대안적이고 저렴한 방법을 제공하는 것입니다. 이는 먼저 항문에 부드럽게 삽입하여 DNBS를 직장 내로 투여함으로써 수행됩니다. 두 번째 단계에서는 조직학적 스크리닝과 DNBS로 자극된 조직의 myeloperoxidase 활성을 평가하기 위해 대장의 조직 절편을 채취하며, 최종적으로 거시적 및 미시적 방법을 통해 체중 감소 및 결장염에 미치는 식이 오일의 효과를 평가할 수 있습니다.기존의 dextran sodium sulfate 방법과 비교하여 이 방법의 주요 장점은 DNBS 방법이 수행하기 쉽고 비용이 저렴하며 재현성이 높다는 점입니다. 이 방법은 IBD 재발에서 스트레스와 우울증의 역할은 무엇인지, 또는 장 손상 및 회복의 기저 기전은 무엇인지와 같이 IBD 연구 분야의 핵심 질문들에 답하는 데 도움을 줄 수 있습니다. 마우스에 DNBS를 직장 투여하려면 먼저 1 mL 주사기를 19 gauge 바늘에 연결하십시오. 폴리에틸렌 50 카테터를 장착한 후, 새로 조제한 DNBS를 카테터로 흡입하십시오.다음으로, 마취된 마우스에 티어 겔(tear gel)을 도포하고 손가락 끝으로 동물의 후단부를 가볍게 눌러 원위 결장에 남아 있는 분변을 제거합니다. 이제 카테터를 직장 내로 약 3~4cm 정도 천천히 삽입하면서, 삽입을 용이하게 하기 위해 소량의 DNBS 용액을 주입하여 결장을 윤활합니다. 카테터가 제자리에 위치하면, DNBS 100 µL 또는 대조군 동물의 경우 동일한 부피의 50% ethanol을 주입합니다.그 다음, 시약의 손실을 방지하기 위해 동물의 머리를 아래 방향으로 90초 동안 유지합니다. DNBS 투여 후, 첫 일주일 동안 탈수를 예방하기 위해 0.2% saline에 8%sucrose를 섞은 물을 동물에게 급여합니다. 실험 기간 동안 정해진 시점까지 동물의 체중 감소, 탈수 또는 고통 상태를 매일 주의 깊게 모니터링합니다.DNBS 유도 후, 안락사시킨 동물의 복강을 절개하고 대장 전체를 적출합니다. 그런 다음 장을 세로 방향으로 절개합니다. 결장의 원위단에서 근위쪽으로 약 2~3 cm 지점에서 육안으로 확인 가능한 점막 궤양이 관찰되어야 합니다.실험 동물의 거시적 손상이 가장 심한 부위의 근위부에서 0.5 centimeter 섹션을 채취하고, 대조군 동물의 해당

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

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DNBS / TNBS 대장염 모델 : 염증성 장 질환에 대한 통찰력과식이 지방의 효과를 제공

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