Real-time Imaging of Single Engineered RNA Transcripts in Living Cells Using Ratiometric Bimolecular Beacons

Yang Song; Xuemei Zhang; Lingyan Huang; Mark A. Behlke; Andrew Tsourkas

doi:10.3791/51544

비례 생체 분자 비콘을 사용하여 살아있는 세포의 단일 엔지니어링 RNA 성적 증명서의 실시간 영상

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Biology

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Real-time Imaging of Single Engineered RNA Transcripts in Living Cells Using Ratiometric Bimolecular Beacons

비례 생체 분자 비콘을 사용하여 살아있는 세포의 단일 엔지니어링 RNA 성적 증명서의 실시간 영상

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12:20 min

August 6, 2014

DOI: 10.3791/51544-v

Yang Song*¹, Xuemei Zhang*¹, Lingyan Huang², Mark A. Behlke², Andrew Tsourkas¹

¹Department of Bioengineering,University of Pennsylvania, ²Integrated DNA Technologies, Inc.

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

비례 생체 분자 비콘 (RBMBs)는 살아있는 세포에서 이미지를 하나의 설계 RNA 전 사체로 사용할 수 있습니다. 여기서 우리는 RBMBs, microporation 실시간으로 단일 RNA 전 사체의 형광 이미징에 의해 세포로 RBMBs 전달의 준비 및 정제에 대해 설명합니다.

이 절차의 전반적인 목표는 살아있는 세포에서 단일 RNA 전사체를 실시간으로 이미지화하는 것입니다. 이것은 먼저 분자 비콘에 의한 비율 메트릭으로 알려진 헤어핀 형성 프로브를 형성하도록 설계된 두 개의 올리고뉴클레오티드를 혼성화하여 수행됩니다. 두 번째 단계는 크기 배제 크로마토그래피에 의한 분자 비콘에 의한 비율 미터법을 정제하는 것입니다.

다음으로, 분자 비콘에 의한 비율 메트릭은 마이크로 포리온을 통해 엔지니어링된 RNA 표적을 발현하는 세포에 도입됩니다. 마지막 단계는 살아있는 세포 현미경 검사에 적합한 마이크로웰 플레이트로 세포를 보는 것입니다. 궁극적으로, 형광 현미경 검사는 단일 세포 내에서 밝은 형광 반점으로 시각화된 개별 RNA 전사체의 움직임을 모니터링하는 데 사용됩니다.

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