Name: 장간막 림프 덕트 유관 쥐 모델 : 창자 림프 약물 운송의 평가에 응용 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 17 s
Description: 배우세요 쥐 장간막 림프 덕트 유관 기술을 통해 창자 림프 약물 및 지질 운송을 평가하는 방법입니다. 이 기술은 약물 흡수 메커니즘 연구와 림프 수집을 가능하게 합니다.

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호주 연구 위원회(ARC)와 국립 보건 및 의학 연구 위원회(NHMRC)의 자금 지원에 감사드립니다.

저자는 공개할 것이 없습니다.

쥐 장간막 림프절 삽관 모델은 다양한 물질로 도전하는 농도와 다양한 세포와​​ 소장에서 림프에 응답하여 발생하는 이들에 대한 변경 (예 : 지질 및 약물 등) 분자의 전송 속도를 직접 정량화 할 수 있습니다 (다이어트 항원 약물, 제형 등) 10,27 질병 (암, 바이러스, 대장염, 인슐린 저항성 등) 5-7. 림프 수집 성분은 또한 상기 추가의 실험에 이용 될 수있다. 예를 들어, 셀 (44), 분획 지질 단백질과 림프 또는 지질 단백질이나 세포와 같은 구성 요소는, 약물, 방사능 표지 및 형광 프로브를 포함하여 마커로드 배양 할 수있다. 이는 더 직접적으로 그 기능, 신진 대사, 통관 및 / 또는 조직 처분 패턴 45-47을 평가받는 동물로 재 주입 할 수 있습니다. 랫트 림프 삽관 모델 OTH 여러가지 장점을 갖는다어 시험관, 현장에서, 실리코, 그리고 생체 내 모델 도입에 설명 ...

림프는 각 소장 융모 1에 포함 된 단일 lacteals에서 유래 단방향 프로세스를 통해 소장에서 흐른다. Lacteals 따라서 유체, 거대 분자 및 세포 림프 형성에 상대적으로 투과성 lacteals에 이러한 요소의 항목으로 시작한다. lacteals의 초기 림프 이후 림프 미세 혈관의 네트워크, 수집 (구 심성) 림프관, 장간막 림프절 궁극적으로 사후 노드 (원심성) 림프 혈관의 시리즈를 통해 소장에서 흐른다. 노드 내 림프 교환 혈액에서 노드를 입력 노드에 상주 면역 세포뿐만 아니라 물질로 발생하는 수질 부비동의 시리즈를 통해 전달합니다. 소장에서 흐르는 모든 림프 결국 원심성 장간막 림프절 덕트 및 이후 치스 테르 나디 라티 나에 chyli에 수렴한다. 치스 테르 나디 라티 나에 chyli 또한 림프 꼬리 주변 조직을 배출, intest를 수집원고 판은, 간 및 요추 지역과는 종격동과 몸의 뇌 부분에서 림프와 함께 흉부 림프 덕트를 결합한다. 흉부 림프 덕트는 왼쪽 경정맥과 쇄골 하 정맥의 교차점에 정맥 시스템에 직접 림프를 비 웁니다. 장간막 림프절에서 직접 림프 덕트의 수집을 가능하게 기재되어있는 프로토콜, 따라서 장 림프계를 통해 전신 (일반)에 순환 부위에서 직접 천이 다양한 인자의 분석을 용이하게한다. 장내 림프계에 할당 중요한 생리 학적 기능은 유체 밸런스를 유지하기 위해 지질 친 유성 분자의 흡수를 용이하게하기 위해, 적절한 한 면역 반응을 활성화한다. 종양 세포와 바이러스는 2-4 및 주요 변경 사항은 여러 가지 염증 및 대사 병리 5-7 림프관 내에서 발생하는 장 림프관을 통해 전파. 수장간막 다양한 세포 및 분자의 농도 및 전송 속도의 장 림프관을 통한 벌크 유체 흐름의 분석뿐만 아니라 정량을 가능 장간막 림프절 내에 덕트 nulation은 림프를 수집한다. 다양한 문제 (예를 들면, 다이어트, 항원, 약물)과 질병 모델에 대한 응답으로 농도 또는 이러한 요소의 대중 교통에 대한 변경 사항은 (예를 들어, 대장염, HIV, 당뇨병)도 평가 될 수있다. 이 광범위하게 분석하고 여기에 비교 될 수있다 각 림프 구성 요소를 설명하는 것은 불가능 동안, 장간막 림프절은 단순하게 수성, 지질 및 세포 단계로 구성된다. 성상에 대한 관심의 구성 요소는 항원 또는 tolerogens 8, 사이토 카인 및 비만 세포 매개 (9), 및 인크 레틴 10 대사 매개 면역 메신저로 펩타이드 및 단백질을 포함한다. 포스트 마디 장간막 림프절의 세포 분획 lymphocyt의 (99 %), 거의 전적으로 구성되어ES (11). 다양한 면역 세포 (수지상 세포, 비만 세포, 등)은 사전 마디 장간막 임파선를 입력하지만 노드 (12) 내에 남아있다. 심성 림프 세포 내의 관심있는 경우, 장간막 림프절의 제거를 통해 이러한 세포를 수집 할 수있다 장간막 림프절 덕트 (12)의 삽관 전에 몇 일 노드. 이러한 방식으로, 구 심성, 원심성 및 림프 도관에 직접 연결되고 심성 림프에서 임파구는 장간막 림프절 도관에 직접 전달한다. 장 림프관 통과 다양한 면역 세포의 표현형 및 운송 따라서 검사 할 수있다. 아마도 현재까지 장간막 림프절을 수집하기위한 인용 가장 일반적인 이유는, 그러나, 처리 장내 흡수식이 지질 친 유성 분자 (10)의 수송을 연구하는 것이다. 섭취 후,식이 지질은, 예를 들면, 트리글리 세라이드의 지방산과 모노 글리세리드, phosp로 (소화지방산 및 리소 인지질, 지방산 및 콜레스테롤 등) 콜레스테롤 에스테르로 holipid 담즙에서 양친의 첨가를 통해 작은 미셀 포성 구조로 장내 루멘 내에 분산 (인지질, 콜레스테롤 및 담즙 염)과의 작용 췌장 효소 (10, 13). 여기에서 그들은 장 세포로 흡수된다. 흡수 성분의 비율은, 흡수성 세포 (장 세포) 내 트리글리 세라이드, 인지질 및 콜레스테롤 에스테르를 형성하기 위해 재 에스테르 화. 이러한 재 - 에스테르 화 된 지질은 담즙 분비, 점막 지질 풀 또는 장내 혈액 (13)로부터 공급 외생 섭취 지질 성분 및 내인성 지질 성분의 조합으로부터 조립된다. 여기에서, 에스테르 화 지질 어느 장 세포 내에 저장되어 있거나 함께 다양 아포 단백질과 다른 분자와의 친 유성 장내 지단백질 (칠로 마이크론, 초 저밀도 지단백질 (VLDL)) (조립 <em&gt; 예를 들어, 비타민) (10, 13). 장 lacteals이 장 모세 혈관보다 자신의 항목 침투성이 더으로 장 세포를 종료 한 후, 지질 단백질은 특히 장간막 림프 시스템을 통해 전신 순환 장에서 수송된다. 흡수 된 지질 성분의 비율은 또한, 관련되지 않은 단일 지단백질 모세 혈관과 간문맥 통해 체순환으로 소장에서 반송 14 분자이다. 그러나, 일반적으로, 간문맥 수송로 짧고 중간 사슬 길이 지질의 흡수에만 상당한 플레이어이다. 장간막 림프절의 컬렉션은 따라서 소장에서 지질 단백질 및 관련 구성 요소 (지질, 친 유성 분자, 아포 단백질)의 전송에 대한 평가를 할 수 있습니다. 지단백질 정량화 및 장간막 임파선 지단백질, 일반적 nascen에 유리하게 특성화 될 수있다t 상태 그들은 광범위하게 이러한 지단백 리파제 (15) 전신 효소에 의해 수정되지 않은 때문이다. 장간막 림프절 삽관 된 래트 모델은 아마도 역사적으로 가장 광범위 소장에서 지질 / 지단백 교통 분석에 기술 된 반면, 관심을 확대 영역은 지용성 약물, 전구 약물 및 다른 생체이 13,16의 수송 림프관의 역할은 여기에서 설명하는 모델의 초점이다. (일반적으로 긴 사슬 중성 지방&gt; 50 ㎎ / g에서 로그 P&gt; 5 용해도의 예외가 분명 있지만) 친 유성 약 17, 18, ​​19 및 기타 생체이 13, 16 중 하나를 수동적으로 또는하여 장 림프관에 액세스 할 수 있습니다 드럭 적극적으로 장 지단백 전송 경로 (19)에 통합. 쥐 장간막 림프절 삽관 기술은 이렇게 많은 응용 프로그램이 있습니다. 볼만 등 알. 먼저 techniq 설명변형 모델의 다음 번호가 설명 되었기 때문에 단말. 1948 20 래트에서 장간막 림프절 덕트 cannulate한다. 쥐 다양한 마취제 (21, 22)로 마취 할 때 예를 들어, 수집이 발생할 수 있습니다, 또는 의식 상태에있는 동안은 (23, 24)를 이동 15 자유롭게을 억제. (- 5 ㎖ / hr로 대개 0) 25 래트 재수 다른 솔루션과 같은 위장, 소장 또는 비경 다른 속도로 지질 및 약물 제제와 같은 다른 물질을 투여 할 수있다. 몇몇 연구에서는 흉부 림프 덕트보다는 장간막 림프절 덕트 흉부 림프 덕트는 서로 림프를 받으면이 관심 요인에 따라, 소장에서 운송 과대 수도 있지만, 림프관을 통해 소장에서 전송을 추정 삽관 지역 22, 26. 림프 삽관 모델은 쥐 15,27, 미니 PI 등 여러 가지 다른 종에서 기술 된GS 12, 양 28, 29, 돼지 30 개 (31). 그러나, 래트 모델은 가장 널리 일관 인용. 의식이 25 림프의 수집 뒤에 또는 22 쥐 15,27을 마취 장간막 림프절 덕트의 삽관에 대한 자세한 프로토콜은 이전에 출판되었으며, 관심있는 독자는 이러한 프로토콜에 관한 것이다. 이 프로토콜은 시각화 형식으로 기술을 보여 처음이다. 림프 삽관 된 래트 모델은, 비용면에서 수술 윤리적 고려 용이성 큰 동물 모델에 비해 이점을 갖는다. 마우스 모델에 비해 마우스 모델은 트랜스 제닉 동물 (27)에서 더 상세한 연구를 가능하게하더라도, 장간막 림프절 삽관 수술은 또한 쥐 쉽다. 그럼에도 불구하고, 쥐 모델, 생리의 차이와 관련된 특히, 그 한계 extrapolat의 몇 가지 제한 사항이 있습니다다른 전임상 및 임상 상황에 이온. 예를 들어, 쥐 담즙 흐름에 상수 및 높은 종 식품 반면 식품 섭취 또는 지질 독립적 담즙 흐름 (32)를 자극한다. 이것은 큰 종과 인간에서 볼 반영 쥐의 대표 사전 및 식후 환경을 얻기에 어려움을 만듭니다. 현실적인 인간의 투여 량의 투여 25을 형성 한 후 림프 전송을 평가할 때 약물 전달 연구의 경우, 큰 종은 또한 바람직 할 수있다. 최근 연구에서, 장간막 림프절에서 지질 전송 속도는 종 (27)에 걸쳐 지질 전송 데이터를 외삽에 자신감을 제공하는 등가 질량과 지질의 종류를 투여 한 후 종 (마우스, 쥐, 개)에 걸쳐 유사한 것으로 밝혀졌다. 그러나, 동물의 크기 (즉, 개&gt; 쥐&gt; 마우스)의 순서로 순위 모델 지용성 약물, 할로 판 트린의 전송. 스케일링 인자 따라서 EX해야 할 수도다른 종 쥐에서 임파 약물 전송 데이터인지 추정. 림프 삽관 모델의 제한은, 일반적으로, 림프관은 용기 (33)를 캐 뉼러를 한번 변경되는 압력 구배에 반대 보낸 림프 흐름 및 전송을 수정할 수 림프관부터 직접 해당 수동 림프 컬렉션이다. 림프 삽관 모델은 기술에 익숙하지 않은 실험실에서 파악하는 작업이 쉽지 않을 수도 있습니다. 대체 모델은 따라서 설명되었다. 예를 들면, 지질 단백질 및 친 유성 분자로서 장내 림프계를 통해 요인 통과 간접적 혈액의 컬렉션을 통해 연구되어왔다. 그러한 모델 오랄 존재 관리 및 억제제의 부재 다음과 같은 지질 및 / 또는 약물의 혈중 농도를 비교 포함한다 (예를 들면, 콜히친, 플루 L81, 사이클로 헥시) 림프 전송 블록 34 장 지질 단백질 생산. 장점혈액 샘플 수집을 통해 간접적으로 림프 전송을 정량화 모델의 침습 수술이 35 필요하지 않습니다으로는 인간의 림프 수송의 어떤 평가를 할 수 있다는 것입니다. 그러나, 림프 교통 억제제는 특정하지 않은 및 림프관을 통해 수송된다 요인이 희석과 같은 평가를 복잡하게 전신 순환에 수정됩니다. 체외 대안도 설명 하였다. 예를 들어, 카코 -2 세포 또는 격리 장 세포 배양 물보다 상세히 림프관 36-38 입력 분자의 장내 분비를 연구하기 위해 사용되어왔다. 인간의 장내 미세보다 잘 나타내는 고급 체외 모델은 최근 39 설명했다. 이 모델에서 림프관 내피 세포층 림프관으로 소장에서 물질 전달의보다 상세한 분석이 가능 카코 -2 세포와 공 배양된다. 그러나, vitr에서오 전지 시스템은 교환 흐름을 부족 및 장 루멘과 기본 혈액과 림프 혈관 공급 즉, 상호 연결을 전송합니다. 대안적인 접근법에서, Kassis는 외. 혈관 수축, 림프 흐름 및 장간막 림프관 33 형광 지질 농도 사이의 양적 비교를 가능 시츄 촬상 시스템의 듀얼 채널 (고속 명 시야 화상과 형광)을 설치했다. 시험 관내 시스템에서의 상기 이상이 모델의 이점은 림프관을 통한 면역 세포의 통로의 정확한 추적을 가능하게한다는 것이다. 대량 지질 (또는 약물) 전송의 절대 측정은, 그러나, 아직 이미징 방법을 사용하여 설립. 시험관과 실리에 구체적으로도 40 ~ 42을 게시 한 장 림프관을 통해 친 유성 약물 수송의 정도를 예측하기 위해 접근되지 않습니다. (C)의 여러 예를 들어, 생체 친 화성플라즈마 카일로 마이크론에 대한 ompounds 생체 (41)에서의 림프 전송으로 합리적으로 상관 관계가 밝혀졌다. 이어서, 동일 그룹들은 다수의 물리 화학적 특성에 기초하여 40 킬로 미크론 치료약 친 화성을 ​​예측하기 실리 모델을 확립. 홀름 등. 또한 명백한 분자량 디스크립터 (42)의 기초 림프 친 유성 화합물의 수송을 예측 모델에 실리 비교적 복잡한 설립. 이러한 모델은 알려지지 약물 수송 림프관의 정도를 예측하기위한 유용한 방법을 제공 할 수있다. 약물 및 다른 실험실에 걸쳐 광범위한 모델 검증 그러나, 정확성 및 재현성을 확인하기 위해 필요할 것이다. 장간막 림프절 덕트 삽관 따라서 직접 소장 및 인자 (세포 단백질의 복소 배열의 운송 속도를 배수 림프절의 내용을 검사 할 수있는 유일한 수단 남아생체 내 상황에서 림프 펩타이드, 지질, 약물). 여기에서 우리는 장간막 림프절 및 마취 쥐 전신 혈액의 수집을 가능하게하는 장간막 림프절 덕트 및 경동맥 동맥 삽관을위한 프로토콜을 설명합니다. 대표 데이터는 모델 장간막 림프계를 통해 소장에서 지질 및 약물 수송을 검사 할 수있는 방법을 보여준다. 이 모델과 문제 해결 가이드를 확립 발생할 수있는 문제에 대한 논의가옵니다. 설립되면 모델은 장 림프 전송을 조사하는 강력한 도구입니다.

<table><tbody><tr><td>멸균 식염수</td><td>Baxter healthcare</td><td>AHB 1307</td><td>모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 Baxter 100ml 식염수 백, 물</td></tr><tr><td>중 50 70 % 에탄올</td> 상자가 <td>있습니다. 모든</td><td></td><td>브랜드를 사용할 수 있습니다</td></tr><tr><td>. 클로르헥시딘 글루코네이트 용액 (Microshield 4)</td><td>Livingstone International</td><td>JJ60243L</td><td>모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =JJ60243L</td></tr><tr><td>Betadine 솔루션</td><td>Livingstone International</td><td>BU0510</td><td>모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =BU0510</td></tr><tr><td>일리움 케타밀(케타민 100mg/ml)</td><td>프로벳 빅토리아&nbsp;</td><td>KETA I 1</td><td></td></tr> <tr><td>http://www.provet.com.au/ Ilium Xylazil (Xylazine 100 mg/ml)</td><td>PROVET VICTORIA&nbsp;</td><td>TRO-3828</td><td>http://www.provet.com.au/</td></tr> <tr><td>ACP 10 주사제(아세프로마진 10mg/ml)</td><td>PROVET VICTORIA&nbsp;</td><td>VTG-DACP010020</td><td></td></tr> <tr><td>http://www.provet.com.au/ 펜토바르비톤나트륨</td><td>빅토리아 프로벳</td>;<td>24529</td><td>모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 Lethabarb&reg 입니다. 325 mg/ml 펜토바르비톤나트륨, Virbac Animal Health. http://www.provet.com.au</td></tr><tr><td>헤파린(35mL 중 35000IU)</td><td>Sigma Pharmaceuticals</td><td>337220</td><td></td></tr> <tr><td>http://sigmaco.com.au/ 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA) 디소듐 염 이수화물</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E1644</td><td>모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 다음은 Sigma의 EDTA의 디소듐 염을 예로 들 수 있습니다.</td></tr><tr><td>폴리에틸렌(PE) 캐뉼라 외경 0.96mm x 내경 0.58mm</td><td>마이크로튜브 연장</td><td>부 PE8050</td><td>모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 PE 튜빙 0.96 x0.58 mm, 30 m</td></tr><tr><td>폴리에틸렌 (PE) 캐뉼러 외경 0.8 mm x i.d. 0.5 mm</td><td>마이크로 튜브 연장</td><td>PE9658</td><td>모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 PE 튜빙 0.8 x0.5 mm, 30 m</td></tr><tr><td>눈금자</td><td>모든</td><td></td><td>브랜드를 사용할 수 있습니다</td></tr><tr><td>마커</td><td>모든</td><td></td><td>브랜드를 사용할 수</td></tr> 있습니다 담배 <tr><td>라이터</td><td>모든</td><td></td><td>브랜드를 사용할 수</td></tr> 있습니다 <tr><td>수의학 접착제</td><td>모든</td><td></td><td>브랜드를 사용할 수 있습니다</td></tr><tr><td>23 게이지 바늘</td><td>리빙스턴 인터내셔널</td><td>DN23GX0.75LV</td><td>모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 Livingstone Disposable Needle, Sterile, 23GX0.75inch, 100/BOX가 있습니다. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT= 6& search=DN23GX0.75LV</td></tr><tr><td>25게이지 바늘</td><td>Livingstone International</td><td>DN25GX1.0LV</td><td>모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 Livingstone Disposable Needle, Sterile, 25GX1.0inch, 100/BOX가 있습니다. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search= DN25GX1.0LV</td></tr><tr><td>1ml 주사기</td><td>리빙스턴 인터내셔널</td><td>T3SS01TA</td><td>모든 브랜드에 사용할 수 있습니다. 예를 들면 Terumo 주사기 1ml 슬립 투베르쿨린 100/박스가 있습니다. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =T3SS01TA</td></tr><tr><td>10ml 주사기</td><td>리빙스턴 인터내셔널</td><td>T3SS10SA</td><td>모든 브랜드에 사용할 수 있습니다. 예를 들면 테루모 주사기 10ml 슬립 100/상자입니다. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search = T3SS10SA</td></tr><tr><td>거즈 면봉</td><td>Livingstone International</td><td>GSC075</td><td>모든 브랜드를 사용하여 필요한 크기로자를 수 있습니다. 예를 들면 면 7.5x7.5cm, 8 겹으로 채워진 거 즈 면봉입니다. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =GSC075</td></tr><tr><td>면봉</td><td>리빙스턴 인터내셔널</td><td>CTAST075DP</td><td>모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 리빙스턴 코튼 어플리케이터 플라스틱 더블 팁이 있습니다. 75MM. 100/PK. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =CTAST075DP</td></tr><tr><td>히팅 패드</td><td>Ratek</td><td>WT1</td><td>온도를 37°C로 유지하는 모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 전amp파일은 Ratek 보온 트레이입니다.</td></tr><tr><td>수술 용 조명</td><td>Harvard Apparatus</td><td>72-0215 with 72-0267</td><td>모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 Harvard 장치 V-Lux 1000 Cold Light Source with Bifurcated Gooseneck Light Guide, Black, 4.7 mm fiber diameter (each arm)가 있습니다. http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_50601_ -1_HAI_ProductDetail과&nbsp; http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_35487_ -1_HAI_ProductDetail___</td></tr> <tr><td>외과 현미경</td><td>Zeiss</td><td>495005-0014-000</td><td>모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 Zeiss 스테미 2000-C와 스탠드 S 더블 스폿 및 KL 300 LED가 있습니다. https://www.micro-shop.zeiss.com/?l=en&p=us&f=e&i=10143</td></tr><tr><td>실크 봉합사</td><td>Livingstone International</td><td>DTSK163019F4</td><td>모든 브랜드에서 사용할 수 있습니다. 예를 들면 &nbsp; 3/8 서클 리버스 컷 실크 봉합사 3/0 스레드 19mm. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =DTSK163019F4</td></tr><tr><td>메스 블레이드</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>10020-00</td><td>모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 FST 메스 블레이드 #20이 있습니다. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=191</td></tr><tr><td>메스 손잡이</td><td>Fine Science Tools (FST)</td> <td>10004-13</td><td>모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 다음은 FST 메스 핸들 #4의 예입니다. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=298&CategoryId=51</td></tr><tr><td>1 x 소형 수술 용 가위</td><td>Fine Science Tools (FST)</td> <td>14060-09</td><td>모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 FST 파인 가위, 9cm, 21mm 절삭 날, 날카롭고 곧은 가위가 있습니다. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=40&CategoryId=17</td></tr><tr><td>톱니 모양의 곡선 팁이있는 집게 2 개</td><td>Fine Science Tools (FST)</td> <td>11001-13</td><td>모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 곡선 2.8x1.4mm 팁이 있는 FST 13cm 표준 패턴 집게가 있습니다. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=405&CategoryId=32</td></tr><tr><td>1 x 홍채 절제술 가위</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>15000-08</td><td>모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 FST Vannas 스프링 가위-2.5mm 커팅 엣지, 스트레이트가 있습니다. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=17&CategoryId=16&nbsp;</td></tr><tr><td>1 x 스트레이트 세레이트 팁이있는 집게</td><td>Fine Science Tools (FST)</td> <td>11650-10</td><td>모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 톱니 모양의 1 x 0.99mm 팁이있는 FST Graefe 10cm 직선입니다. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=390&CategoryId=32</td></tr><tr><td>1 x 집게 매끄럽고 날카로운 직선 파인 팁</td><td>Fine Science Tools (FST)</td> <td>11251-10</td><td>모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 FST Dumont #5 핀셋 스트레이트 11cm, 팁 0.08 x 0.04mm가 있습니다. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=335&CategoryId=29</td></tr><tr><td>1 x 집게 매끄럽고 미세한 곡선 집게</td><td>Fine Science Tools (FST)</td> <td>11063-07</td><td>모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 부드러운 9 x 0.4mm 팁이 있는 0.3cm의 FST 섬세한 집게가 있습니다. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=360</td></tr><tr><td>2 x 지혈제</td><td>정밀 과학 도구(FST)</td><td>13010-12</td><td>모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 모든 작업자가 지혈제를 사용하는 것은 아닙니다. 예를 들어 길이 20mm x 너비 1.3mm의 톱니 모양의 직선 팁을 가진 FST 12cm 마이크로 모기 지혈제입니다. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=377&CategoryId=33</td></tr><tr><td>1 x 봉합사 바늘 홀더</td><td>Fine Science Tools (FST)</td> <td>12001-13</td><td>모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 길이 16mm x 너비 1.9mm 팁이 있는 FST 13cm Hasley 바늘 홀더가 있습니다. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=254&CategoryId=70</td></tr><tr><td>1 x 동맥 클램프</td><td>Fine Science Tools (FST)</td> <td>18050-28</td><td>모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 FST Bulldog Serrefines 스트레이트, 길이 28mm, 턱 치수 9x1.6mm, 미디엄 클램프 프레스가 있습니다. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=270&CategoryId=82</td></tr><tr><td>올레산</td><td>시그마 알드리치</td><td>O1008</td><td>필요한 경우 모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 99% 순수 올레산이 있습니다. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/o1008?lang=en&region=AU</td></tr><tr><td>14C-올레산</td><td>퍼킨;</td><td>NEC317050UC&nbsp;</td><td>모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 올레산, [1-14C]-, 50&micro가 있습니다. CI(1.85MBq). http://www.perkinelmer.com/Catalog/Product/ID/NEC317050UC</td></tr><tr><td>타우로콜산나트륨</td><td>시그마 알드리치</td><td>T4009</td><td>모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들면 타우로콜산, 나트륨 염 수화물, &ge; 95% (TLC) . http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t4009?lang=en&region=AU</td></tr><tr><td>Halofantrine</td><td>Glaxo Smith Kline</td><td></td><td>Halofantrine은 Glaxo Smith Kline</td></tr><tr><td>인산나트륨 단일염기</td><td>성 시그마 Aldrich</td><td>71507</td><td>모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들어 분자 생물학을 위한 인산나트륨 일염기성 일수화물인 BioXtra는 >99.5%입니다. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/71643?lang=en&region=AU</td></tr><tr><td>인산나트륨 이염기성</td><td>시그마 Aldrich</td><td>71643</td><td>모든 브랜드를 사용할 수 있습니다. 예를 들어 분자 생물학을 위한 인산나트륨 이염기성 이수화물인 BioUltra는 >99%입니다. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/71507?lang=en&region=AU</td></tr></tbody></table>

장간막 림프 덕트 유관 쥐 모델 : 창자 림프 약물 운송의 평가에 응용

The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport

장 림프 시스템은 유체 수송, 지질의 흡수와 면역 기능에 중요한 역할을한다. 림프 장간막 림프절 덕트 수렴 림프관 및 일련의 노드를 통해 소장에서 직접 흐른다. 장간막 림프절 덕트의 캐 뉼러 따라서 소장에서 흐르는 장간막 림프절의 수집을 할 수 있습니다. 장간막 림프 및 지단백 분획 (지질, 친 유성 분자와 아포 단백질) (사이토 카인과 장 호르몬 등의 유체, 펩타이드 및 단백질) 면역 세포 (99 % 림프구), 수성 부분의 세포 부분으로 구성되어 있습니다. 장간막 림프절 덕트 삽관 모델 따라서 림프계를 통해 농도 및 소장에서 다양한 요인의 이송 속도를 측정하는데 사용될 수있다. 다른 도전에 대한 응답에서 이러한 요소의 변경 (예를 들면, 다이어트, 항원, 약물)과 질병 (예를 들어, 염증성 장 질환, HIV는 당뇨병)도 수 b전자는 결정. 관심을 확대 영역은 장 지질 흡수 경로와 연관 경구 투여 친 유성 약물과 전구 약물의 흡수에 림프 수송의 역할이다. 여기에 우리가 설명, 세부 사항, 장 배달 다음 몇 시간 동안 림프 시스템을 통해 속도와 지질 및 약물 수송의 정도의 평가를 할 수있는 장간막 림프절 덕트 유관 쥐 모델. 방법은 림프 다른 파라미터의 측정에 용이하게 적응할 수있다. 우리는 실험 성공을 확인하고 얻은 데이터를 해석하는 방법에 대한 교육을 제공하기 위해이 복잡한 수술 방법을 설정할 때 발생할 수있는 문제에 대한 자세한 설명뿐만 아니라, 실패와 성공의 실험에서 대표 데이터를 제공합니다.

대표적인 실험의 결과는도 4 및도 5에 도시되어 장간막 림프절 삽관 모델을 이용하여 장내 전달 다음 림프계를 통해 누적 범위와 지질 및 약물 수송 속도를 정량화한다.이 실험에서, 모델 친 유성 200 μg의를 포스페이트 완충에 5.6 ㎖의 5 mM의 나트륨 타우로 콜산에 분산 및 7.1 mg의 2 모노 올레 인 - 약물 할로 판 트린 40 mg의 올레산 (5 μCi를 14 C-올레산 2 포함) 아세트산 함유 제제에서 2 시간 동안 쥐의 십이지장 내로 투여했다 식염수의 pH가 6.9. 제제 투여 후 래트를 2.8 ㎖ / 십이지장 내로 주입 된 생리 식염수와 시간의 속도로 재수 화 하였다. 림프는 10 시간 동안 매 시간을 변경 튜브에 지속적으로 수집 하였다. 모두 동일한 COMPON 함유 제제에 대한 전술 한 프로토콜에 따라, 제형을 제조하고, 실험을 수행그것을 제외하고 엔트는 2 모노 올레 인 (43)을 포함하지 않았다. <p class="jove_c...

여기에서는 쥐의 장간막 림프관을 캐뉼로화하는 기술을 설명하며, 이를 통해 장 전달 후 림프계를 통한 지질 및 약물 수송을 정량화할 수 있습니다. 이 기술은 장간막 림프 농도 및/또는 유체, 면역 세포, 펩타이드, 단백질 및 친유성 분자의 수송을 평가하는 데 적용할 수 있습니다.

The intestinal lymphatic system plays key roles in fluid transport, lipid absorption and immune function. Lymph flows directly from the small intestine ...

본 실험 절차의 전반적인 목적은 장내 투여 후 지질 및 약물이 장 림프계로 운송되는 속도와 정도를 평가하는 것입니다. 이를 위해 우선 장간막 림프관을 분리하고 캐뉼라를 삽입하여 림프액을 수집합니다. 두 번째 단계에서는 십이지장에 캐뉼라를 삽입하여 장내 주입이 가능하게 하고, 이어 경동맥에 캐뉼라를 삽입하여 혈액 샘플을 수집할 수 있도록 합니다.마지막 단계에서는 실험적 처치물을 십이지장으로 투여하고, 전신 지질 또는 약물 농도를 정량화하기 위해 림프액과 혈액을 수집합니다. 궁극적으로 이 모델은 장내 투여 후 지질 및 약물의 총 흡수량과 장 림프 수송을 평가하는 데 사용될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 장간막 림프관을 직접 캐뉼레이션하여 전체 실험 기간 동안 림프액을 수집할 수 있다는 점입니다.이를 통해 장간막 림프관으로 유입되어 흐르는 절대적인 물질의 양을 추정할 수 있습니다. 생체 내에서, 이 모델은 약물 및 지질 수송의 in vivo 평가를 가능하게 합니다. 또한, 관심 있는 모든 인자의 장 림프 수송을 측정하거나, 다양한 자극 또는 질환 상태에 반응하여 이러한 인자들의 림프 수송이 어떻게 변화하는지 측정하는 데 사용할 수 있습니다.장간막 림프관의 캐뉼라 삽입은 관이 작고 취약하며, 특히 금식한 동물에서는 더욱 복잡하고 어렵기 때문에 이 방법의 시각적 시연이 매우 중요합니다. 시연 절차는 여기 모나쉬 대학교의 동료 교수인 Natalie cus 박사와 해당 연구 그룹의 선임 박사후 연구원인 LJ Hugh 박사가 진행하겠습니다. 수술 전날, 캐뉼라를 적절한 길이로 자르고 멸균 수술용 칼날을 사용하여 각 튜브 끝부분에 베벨(사선)을 만듭니다. 다음으로, 십이지장 내 캐뉼라를 준비하기 위해 캐뉼라를 스스로 되돌아오게 고리 모양으로 구부린 후, 캐뉼라에 열을 가해 튜브에 고정 지점을 만듭니다.수술 당일, 마취된 성체 랫드의 복부 우측, 목 및 좌측 쇄골 부위의 털을 제거한 후, 림프관 캐뉼라 삽입을 위해 포비돈 요오드 용액과 70% ethanol로 세 차례 연속 세척하여 수술 부위를 무균적으로 소독합니다. 동물의 우측이 위를 향하게 배치하고, 멸균된 메스 날을 사용하여 검상돌기부터 늑골 하단 약 2cm 아래의 우측 옆구리까지 4cm 길이로 직선 절개하여 복근벽의 상층을 엽니다. 소장을 좌측 복벽 아래로 밀어내고, 생리 식염수에 적신 2~3장의 멸균 거즈를 사용하여 소장을 고정합니다.그런 다음 오른쪽 신장 높이에

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

이 비디오는 쥐의 장간막 림프관을 캐뉼레이션하는 기술을 보여줍니다. 이 방법을 사용하면 림프액에 존재하는 전체 성분에 직접 접근할 수 있습니다.

Mesenteric Lymph Duct Cannulation in a Rat Model to Harvest 림프액을 수확합니다.

이 비디오는 쥐 모델에서 십이지장 내 삽관을 보여줍니다. 쥐를 마취 한 후 십이지장을 찾고 작은 구멍을 만듭니다. 끝이 비스듬한 J자형 캐뉼라를 조심스럽게 삽입하고 고정한 다음 절개 부위를 닫습니다. 캐뉼러형 쥐 모델은 면역병리학 연구를 위한 장 내 주입을 가능하게 합니다.

면역병리학 연구를 위한 쥐 모델의 십이지장 내 삽관(intraduodenal cannulation)

이 비디오에서는 쥐 모델에서 왼쪽 경동맥을 캐뉼링하는 수술 절차를 보여줍니다.

쥐 모델에서 경동맥의 캐뉼레이션(cannulation of the carotid artery)

원심성 림프에서 다량의 지질 대사 성분을 채취하기 위해 신생아 돼지의 장 림프통에 카테터를 삽입하는 수술을 제시합니다.

신생아 돼지에서 림프의 창자 림프 트렁크와 컬렉션의 장기 도관

본 프로토콜은 마우스에서 십이지장내 영양소 주입에 반응하여 흐르는 장 림프를 분리하기 위한 상세한 수술 프로토콜을 설명합니다. 이를 통해 다양한 실험 영양소에 대한 반응으로 총 장내 지질 흡수 및 유미미크론 합성 및 분비를 생리학적으로 측정할 수 있습니다.

식이 지질 흡수 및 유미미크론 분비의 생체 내 동역학을 정량화하기 위한 마우스의 흐르는 장간막 림프의 분리

이 실험 프로토콜은 두부 영역에서 림프 배출을 직접적이고 정량적으로 평가할 수 있는 깊은 경추 림프관 캐뉼레이션 쥐 모델을 시연합니다. 이 모델은 중추신경계(CNS) 유래 용질, 면역 세포 집단, 그리고 CNS 표적 치료제의 분배 및 제거에 대한 상세한 분석을 지원합니다.

경추 림프관 캐뉴럴 쥐 모델을 이용한 머리와 뇌로부터의 림프 수송 평가

이 실험 프로토콜은 간 림프관 캐뉼 쥐 모델을 설명하여 간 림프 및 혈관 배출을 직접적이고 정량적으로 평가할 수 있게 합니다. 이 모델은 간림프와 전신 혈액을 동시에 샘플링하여 간 수송, 대사, 면역 신호 전달을 조사할 수 있게 하며, 약물 약물동학과 간 특이적 생물학 연구를 지원합니다.

림프와 혈관 동시 샘플링을 통한 간 수송 경로를 평가하는 포괄적인 쥐 모델

사타구니 림프절 (LN)의 intravital 현미경을 수행하기위한 기법이 설명되어 있습니다. 이러한 기술은 실시간으로...

사타구니 림프 노드의 Intravital 현미경

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마우스 오금 림프절의 Intravital 이미징

가까운 적외선 형광 (NIRF)를 사용하여 최근 개발 된 이미징 기술은 림프 시스템의 암 전이에서 활약 역할, 면역 반응, 상처 수리 및 기타 림프 - 관련 질병을 명료하게하다하는 데 도움이 될 수 있습니다.

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배우세요 쥐 장간막 림프 덕트 유관 기술을 통해 창자 림프 약물 및 지질 운송을 평가하는 방법입니다. 이 기술은 약물 흡수 메커니즘 연구와 림프 수집을 가능하게 합니다.

장간막 림프 덕트 유관 쥐 모델 : 창자 림프 약물 운송의 평가에 응용

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