Name: 조직의 변성 / 재생 및 암의 연구에서 설치류 유도 성 텔로 머라 대립 유전자를 활용 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-04-13T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: 배우세요 설치류 유도성 텔로머라스 대립유전자를 활용한 조직 변성 및 재생, 암 연구 방법을. 하이드록시 타목시펜 처리와 FISH 기법으로 노화 완화 및 종양 형성 메커니즘을 분석합니다.

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J.H.는 NIH K99/R00 Pathway to Independence Award(5K99CA172700) 및 NCI Brain Cancer SPORE Career Development Award(2P50CA127001)의 지원을 받습니다.

참고 :이 프로토콜의 모든 단계가 UT MD 앤더슨 암 센터에 의해 승인되었습니다. mTERT-ER 대립 유전자의 1 세대 <ol><li> 노크에 소개 ERT2-LBD (리간드 결합 도메인) 상류와 (인트론 2를 통해 엑손 1) mTERT 게놈 시퀀스 프레임과 훈제 연어 포함하는 벡터 대상 - 마우스 ES 세포에 훈제 연어 조각 (그림 1A) - PGK - 네오 전기와. </li><li> 문화 6~10일에 대한 네오 마이신의 ES 세포. 네오 마이신 내성 클론을 선택하고 48 웰 플레이트에서 확장합니다. 상용 키트를 사용하여 게놈 DNA를 추출하고 노크에 대립 유전자 남부 블롯을 확인합니다. </li><li> 거꾸로 현미경 C57BL에 미세 조작 키트 / 6 배반포를 95 % 이상 정상 핵형을 가진 두 개의 ES 라인을 주입한다. 대리모 (23)의 자궁에 배반포를 이식. C57BL / 6 FE에 고급 수컷 키메라 (70-90%)을 메이트남성. </li><li> 남부 오점으로 이형 mTERT-ERneo 동물의 유전자형을 확인합니다. </li><li> NeoR 카세트를 삭제 이형 mTERT-ERneo 동물과 EIIa-Cre 호텔 동물 메이트. 동질 접합체를 생성하기 위해 적어도 세 번 더 간 품종 이형 mTERT-ER 동물에 대한 C57BL / 6 동물 이형 동물 메이트. </li></ol> LSL - mTERT 대립 유전자의 2 세대 <ol><li> 노크에에 loxP를 포함하는 벡터를 대상으로 도입 - 트리플 스토퍼 - 네오 -에 loxP 조각 및 전기 (23)와 마우스 ES 세포로 (엑손 1 인트론 2, 그림 1B 사이) mTERT 게놈 시퀀스를. </li><li> 문화 6~10일에 대한 네오 마이신의 ES 세포. 네오 마이신 내성 클론을 선택하고 48 웰 플레이트에서 확장합니다. 상용 키트를 사용하여 게놈 DNA를 추출하고 남부 오 (23)에 의해 노크에 대립 유전자를 확인합니다. </li><li> 인제거꾸로 현미경 미세 조작 키트와 C57BL / 6 배반 포기에 95 % 이상 정상 핵형을 가진 CT 두 ES 라인. 대리모 (23)의 자궁에 배반포를 이식. C57BL / 6 암컷 고급 남성 키메라 (70-90%를) 메이트. </li><li> 남부 오점으로 이형 LSL - mTERT 동물의 유전자형을 확인합니다. </li><li> 적어도 3 회 C57BL / 6 동물 이형 동물 메이트, 또한 간 품종 이형 LSL - mTERT 동물 동질 접합체를 생성합니다. </li></ol> 생체 내에서 mTERT-ER 및 LSL - mTERT 마우스에서 텔로 머라 제의 3. 재 활성화 mTERT-ER의 경우 <ol><li> 주입하기 전에 모든 수술 도구를 소독. </li><li> 50 % (v / v)의 산소 / 50 % (v / v)의 일산화이 질소 가스 혼합물에 이소 플루 챔버 (유도 4 %, 2 %로 유지)으로 마취 된 마우스. 아니면 케타민 - 자일 라진 (xylazine) 혼합물에 의해 마우스 (100m 마취g / kg (체중) + 10 ㎎ / ㎏ 체중). </li><li> 깊은 마취에 도달하면, 유도 챔버로부터 마취 된 동물을 제거하고, 챔버 이소 플루 란 (2 %)에 접속 관내 그들의 머리를 유지한다. </li><li> 동물이 깊이 마취되어 있는지 확인하기 위해 쥐의 발 패드를 핀치. 마르지 눈을 방지하기 위해, 양쪽 눈에 연고를 넣어. 포비돈 요오드 용액으로 마우스의 뒷면을 닦습니다. </li><li> 뒷면의 피부 아래 정밀 투관침 (10 G)와 느린 방출 4-OHT 펠렛을 주입하고 두 어깨 사이의 중간 선에 펠릿을 끝까지 밀어 넣습니다. </li><li> 상처 클립 적용자와 절개를 밀봉하고 마취에서 회복 쥐를 모니터링 할 수 있습니다. 십일 나중에 클립을 제거합니다. 절차가 곧 완료되기 때문에 보충 열 필요가 없습니다. </li><li> 4- OHT 펠릿과 치료 기간은 연구의 목적에 따라 최적화되어야한다. </li></ol> LSL - mTERT 들어 &lt;OL&gt; <li> 타목시펜 (10 ㎎ / ㎖, 옥수수 기름에 용해) (200 UL / 25g / 일) 복강 이틀 연속 주입된다. </li></ol> 신경 줄기 세포를 체외에서 텔로 머라 제의 재 활성화 4. 분리 <ol><li> 마우스를 이산화탄소로 안락사 및 뇌를 제거한다. 제조 업체에 따라 시중에서 판매하는 신경 조직 해리 키트의 프로토콜을 따르십시오. </li><li> 와류를 수행하지 해결책 4.위한 세포 배양 배지 1 ㎖로 표지 된 해결책 4 바이알에서 동결 건조 분말을 재현 탁. 이 용액 분주 나중에 사용하기 위해 -20 ℃에서 보관해야한다. </li><li> 예열 사용 전에 15 분 동안 37 ° C에서 혼합물. </li><li> 해결 방법 1 (50 μL) 및 해결 방법 2 (1,900 μL) : 효소 믹스 1을 확인합니다. 해결 방법 3 (20 μL) 및 솔루션 4 (10 μL) : 효소 믹스 2를 확인합니다. </li><li> 최대 400 mg의 조직과 소용돌이를 위해 1950 μL 효소 믹스 하나를 준비합니다. 37 ℃에서 혼합물을 예열사용하기 전에 15 분. </li><li> 1 일 마우스의 뇌를 가지고, 후각 전구 및 소뇌를 제거하여 forebrains을 유지합니다. 4 ° C에서의 제거 및 저장하기 때문에 감기 배지 1 ㎖의 전뇌 조직을 유지합니다. 1 시간 내에서 신경 조직을 처리 할 수​​ 있는지 확인합니다. </li><li> 소화 당 400 mg의 한계를 초과하지 확인하기 위해 조직의 무게를 결정합니다. 35mm 직경 페트리 접시의 뚜껑에 뇌를 놓고 메스를 사용하여 뇌 호감. </li><li> HBSS 1 ㎖를 추가, 1 ml의 피펫 팁을 사용하여 (w / 칼슘 / 마그네슘 O) 다시 15 ML 튜브 피펫 조각. HBSS 린스 (w / 칼슘 / 마그네슘 O). 원심 분리기 실온에서 2 분 동안 300 × g에서 조심스럽게 뜨는을 대기음. </li><li> 예열 효소 믹스 1의 1,950 μL (솔루션 1, 2) 당 최대 400 mg의 조직을 추가합니다. 반전 또는 튜브를 5 분마다 흔들어 혼합, 37 ° C에서 15 분 동안 15ml의 튜브 부화. </li><li> 20 &amp; #을 추가하여 조직 샘플 30 μL 효소 믹스 2를 준비(956), 솔루션 (4)의 10 μL에 대한 해결 방법 3의 난 다음 샘플에 추가. 섞어 부드럽게 반전. 소용돌이하지 마십시오. </li><li> 기계적으로 천천히 피펫 아래로 10 배 넓은 팁, ​​화재 광택 파스퇴르 피펫을 사용하여 조직을 떼어 놓다. 공기 방울을 형성하지 마십시오. </li><li> 튜브를 3 분마다 반전, 10 분 동안 37 ℃에서 배양한다. </li><li> 단계 4.11을 반복하고 조직을 200 mg의보다 큰 경우 4.12 단계. </li><li> 50 ML 튜브에 배치 된 70 μm의 셀 스트레이너에 세포 현탁액을 적용합니다. 셀 스트레이너를 통해 PBS 10 ㎖를 적용합니다. 실온에서 20 분 동안 300g로 셀 스트레이너 원심 세포 현탁액을 버린다. 기음 완전히 뜨는. </li><li> 상기 애플리케이션에 필요한 용적 줄기 세포 배지로 세포를 재현 탁. </li><li> , LSL-mTERT NSCs의에서 텔로 머라 아제를 활성화 이틀 동안 100 μM 4-OHT와 세포를 치료합니다. 100 μM 4 배지에서 세포를 유지, mTERT-ER NSCs의에서 텔로 머라 아제를 활성화하려면-OHT. </li></ol> 5. 텔로미어의 FISH <ol><li> 배양 된 세포에서 중기 염색체를 준비합니다. </li><li> FFPE (포르말린 고정 파라핀 임베디드) 조직 절편, 크실렌과 deparaffinize 각 5 분 (100 %, 90 %, 70 %, 50 % 에탄올)과 5 분 동안 PBS 에탄올 시리즈 재수 들어. </li><li> 메탄올 후 수정 : 아세트산 (3 : 1) 1-2 시간 동안. 각각 5 분 (70 %, 90 %, 100 % 에탄올) 및 공기 건조를 위해 냉 에탄올 시리즈 탈수. 5 분 동안 37 ℃에서 1X PBS로 세척 하였다. </li><li> 2 분 동안 37 ° C에서 4 % 포름 알데히드 염색체 변성. 냉 에탄올 시리즈에서 각각 5 분 (70 %, 90 %, 100 % 에탄올) 및 공기 건조 탈수. </li><li> 각 슬라이드에 PNA 하이브리드 혼합물의 12-25 μl를 적용합니다. (하이브리드 믹스 : 70 % 포름 아미드, 0.06x의 SSC, 0.2 % BSA, 0.5 NG / μL의 tRNA, 0.5 NG / μL 텔로미어 (telomere) 또는 센트로 프로브) </li><li> 고무 시멘트와 커버 슬립을 밀봉합니다. 4m, 80 ℃에서 포스트 - 변성에 염색체 상태로 준비 및 조직 섹션인치 실온에서 잡종 또는 습기 챔버에 2-4 시간 동안 37 ° C. </li><li> 세척 버퍼 2 × 15 분으로 실온에서 씻으십시오. (워시 버퍼 : 70 % 포름 아미드, 0.06x의 SSC, pH를 7.2). PBST 실온에서 3 × 5 분을 씻으십시오. 현미경 검사에 대한 DAPI 또는 원적외선 형광와 카운터 얼룩 슬라이드. </li></ol>

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</ol>

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여기서 우리는 두 개의 유도 쥐의 텔로 머라 제의 대립 유전자 및 방법 생체 내 및 시험관 내에서 텔로 머라 제를 재 활성화하는 방법의 생성을보고합니다. mTERT-ER 활동을 재 활성화를위한 중요한 단계는 타목시펜의 연속 농도를 유지하는 것입니다, 그래서 우리는 미국의 혁신적인 연구에 의해 제조 된 4-OHT 시간 방출 펠렛을 사용하여 선택합니다. 펠릿을 최대 60 일간 1ng의 / ml의 정상 상태 혈중 농도에 4OHT 해제 유지. 이전 연구에서, 우리는이 전략 텔로 머라 제 활성을 재 활성화하는 등 줄기 세포 고갈, G4 mTERT ER / ER에서 텔로미어 기능 장애에 의해 유발 된 여러 장기에서 조직 손상 반응 및 장기 부전의 손상과 퇴행성 표현형을 개선 할 수였다 마우스 (20). 노화 텔로 머라 제의 기능을 연구 이외에,이 두 대립 유전자가 유도 성 텔로 머라 제는 또한 암을 연구하는데 사용될 수있다. 이전의 연구했다이러한 대립 유전자의 장점은 유전체를 형성하고 T 세포의 흉선 림프종 (21)와 전립선 암 (22)의 생물학에 영향을 미치지에서 텔로미어 (telomere)의 감소와 텔로 머라 아제 활성화의 역할을 탐구한다. 이 두 연구는 보여 주었다 후반 세대 G4 현금 지급기에서 텔로미어 기능 장애 - / - mTERT ER / ER 및 G4 PB-Cre4 PTEN을 L은 / L p53을은 L / L은 LSL - mTERT L은 / L 마우스는 조기 돌연변이 이벤트의 인수에 연료를 공급하는 메커니즘을 제공합니다 종양 개시, 아직 완전히 악성 종양의 진행을 방지한다. 텔로 머라 제는 말단 소립 장애 유발 게놈 불안정성, DNA 손상 체크 포인트 만연 염색체 불안정성의 컨텍스트에서 활성화되었을 때 전립선 암 (21)의 골전이 및 thymi의 뇌 침투 새로운 생물학적 성질을 가진 악성 종양의 전체의 진행을 허용하는 억제했다C 림프종 (21). 비슷한 현상은 대장 암과 췌장암 (박사. Haoqiang 잉, 아담 Boutin 로널드 DePinho와 개인 통신)을 포함한 다른 암 종류에서 관찰되었다. TERT-ER 단백질 용이 동물 타목시펜 또는 비히클로 처리 여부에 따라 온 상태 사이 끌 수 있으므로 mTERT-ER 대립 유전자에 의해 생성 된 종양 모델은 항 - 텔로 머라 요법을 시험하는데 이용 될 수있다. 이전 연구에서 종양이 G4 현금 지급기에서 생성 - / - mTERT ER / ER 동물 4-OHT에서 발표 된; 텔로 머라 고갈에, 종양은 결국 때문에 텔로미어 기능 장애에 의한 체크 포인트 (21)의 복귀로 감소했다. 그러나 응답에 저항을 획득 한 종양의 일부는 텔로미어 (ALT)기구의 대체 길어를 활성화하여 멸종 텔로 머라합니다. 이러한 ALT + 저항하는 종양의 또 다른 특성은 t을 보였다헤이 미토콘드리아 합성과 산화 방어 PGC-1β의 마스터 레귤레이터를 포함하여 미토콘드리아 생물학 및 산화 방어에 관여하는 유전자의 비정상적인 전사가있다. 텔로 머라 아제 + 종양 세포가 21 상대적으로 그대로 유지 유지하면서 PGC-1β 또는 SOD2 (산화 방어의 또 다른 레귤레이터)의 최저 크게 ALT + 종양 세포를 제거합니다. 이 두 노크에 대립 유전자의 한 가지 제한은 텔로 머라 제 유전자의 기본 궤적에 있기 때문에 그들은 단지 내생 수준에서 텔로 머라 아제의 활성화를 감당할 수 있다는 것입니다. 대부분의 인간의 암에서는 텔로 머라 제는 실제로 훨씬 더 높은 수준에서 과발현. 텔로 머라 제의 수준을 향상시키기 위해, 우리는 하나의 변형을 고려할 수는 Rosa26 궤적으로 PGK (포스 포 키나제) 프로모터 강한 프로모터 mTERT-ER 구조체를 삽입하는 것이다. 결론적으로,이 두 소설 유도 쥐의 텔로 머라 제의 대립 유전자는 전례없는 그 가죽을 제공IC 툴은 특히 미리 취득한 텔로미어 장애 유발 게놈 불안정성의 배경하에, 노화 및 조직 항상성뿐만 아니라 종양 진행에 텔로 머라 제의 기능을 연구. mTERT-ER 대립 유전자는 다른 종양 발생하기 쉬운 마우스 모델로 건너 방지 텔로 머라 제 요법을 연구하는 데 사용할 수 있습니다.

텔로 머라 제는 텔로미어 유지 관리를 담당하는 효소이다. 이것은 그들의 무결성을 보호 염색체의 말단 반복 서열이다. 텔로 머라 완전 효소의 핵심 구성 요소는 역전사 효소 촉매 서브 유닛 (TERT) 및 1,2- 텔로미어 반복을 추가하기위한 주형으로 작용 RNA 서브 유닛 (TERC)이다. 일반적으로 분화 된 체세포를 억제하면서, 텔로 머라 제는 강력한 활성을 나타내고, 생식 세포, 암 세포에서 중요한 역할을 담당하고 줄기 세포. mTERC 및 mTERT 녹아웃 마우스는 줄기 세포 및 암 모두에서 텔로 머라 제의 기능을 연구 생체 내 모델 시스템에서 큰 제공한다. mTERC 및 mTERT 쥐 (G1)를 마우스 3 텔로미어의 길이 예약에 의한 명백한 표현형을 보여주지 않았다 녹아웃. 그러나, 직렬 후반 세대 (G5-G6)에 mTERC 및 mTERT 녹아웃 쥐를 intercrossing는 결과결국 진보적 인 텔로미어의 침식과 매우 증식 조직 4의 심각한 퇴보를 불러 일으켰다. 늦은 세대 (G5-G6) mTERC는 - / - 마우스 인해 고환 및 생식 세포 고갈의 세포 사멸의 높은 속도로 불임이다. G5-G6 mTERC는 - / - 마우스는 또한 조직 줄기 / 전구 세포 구획 4의 세포 사멸 및 결함이있는자가 재생 능력의 높은 속도로 골수, 장과 피부를 포함하여 높은 증식 조직에 퇴행성 표현형을 나타낸다. 후반 세대의 골수에서 조혈 줄기 세포 mTERC - / - 마우스 증식 잠재력을 전시 손실, 손상자가 재생 능력, 향상된 세포 사멸하고, 결국 기능 고갈 5,6. - / - 마우스 7,8 마찬가지로, 장 지하실에서 점진적으로 증가 세포 사멸 몸은 G1-G6 mTERC 연속 된 각 세대에서 관찰되었다. 티그 역기능 텔로미어의 악영향이 심각 늦은 세대 (G4-G5)에 손상 시험관 성인 신경 줄기 세포의 증식 및 생체 내에서 신경 모두 보낸 높은 회전율 조직에 한정되는 mTERC을하지 않는 것 - / - 생쥐 9 . 줄기 세포에서 텔로 머라 아제의 역할은 더 어떤면에서는 10, 11 노화 조기 유사한 희귀 한 인간의 유전 질환의 dyskeratosis 선천성 (DKC)의 연구 결과에 의해 지원됩니다. DKC dyskerin는, 코어 텔로 머라 제 서브 유닛과 다른 관련 단백질 12 dyskerin 인코딩 TERC, TERT 돌연변이, 및 유전자에 의해 야기된다. 평균에서, DKC 환자에서 텔로미어는 나이 대조군의 짧은 99 % 이상이다. 질병의 주요한 이환율은 조혈 줄기 세포의 결함에 의해 발생되는 유지 재생 불량성 빈혈에 기인한다. 경구 백반증, 네일 이상증, 정신 retardati 같은 질병의 다른 측면고환 위축과 폐 합병증, 모든 텔로 머라 아제 녹아웃 마우스의 후반 세대에 조직 줄기 세포 및 전구 세포 (10), 그와 가까운 계약의 결과의 기능을 손상하는 것이 좋습니다. DKC 환자는 골수이 형성 증후군 경향이 악성 점막 종양의 증가 유병률이있다. 따라서, 인간 환자에서의 텔로 머라 아제 결핍 늦게 발생 텔로 녹아웃 마우스에서 관찰되는 줄기 세포의 기능 및 종양 소인의 결함을 되풀이. 짧은 텔로미어와 높은 텔로 머라 제 활성이 암의 특징입니다. 정상 또는 전 암성 세포 분열로, DNA 이중 가닥 나누기 (DSBs) (13)에 의해 유발 된 것과 유사한 텔로미어와 휴대 체크 포인트의 활성화의 최종 침식의 낮거나없는 텔로 머라 제 활성 결과. 고전 DSBs처럼 텔로미어 기능 장애는 이러한 노화 및 / 또는 apoptosi 같은 세포 반응을 p53의를 유도하기 위해 표시와 관련 된14, 15를에요. p53의 돌연변이의 불 활성화되면, 세포 순환 및 세포 생존은 전좌 및 지역 증폭 및 삭제 16, 17을 특징으로하는 프로 발암 뮤 테이터 메커니즘을 제공 텔로미어 기능 장애와 세포에서 향상됩니다. 동시에, 텔로미어 기능 장애 (심지어 p53의 널 (null) 세포) 관련 만연 염색체 불안정성을 계속 이러한 암의 전체 악성 진행을 제한 할 것으로 보인다. 예를 들어, 후반 세대 G4-G5 mTERC - / - Ink4a / ARF 파일 - / - 마우스 인해 텔로미어 (telomere)의 감소에 Ink4a / 멍멍 널 쥐에 비해 크게 감소 림프종 발생률을 보였다. 또 다른 연구에서는 G4 ​​mTERT에서 고급 선종 성 병변은 - / - APC 최소 마우스는 크게 인해 상당한 성장 정지 및 세포 사멸 (18, 19)에 APC 분 마우스에 비해 억제되었다.텔로미어 게놈 불안정성을 부전 유도한다는 관찰은 종양 진행이 텔로 머라 제의 활성화는 암 세포 생존 및 / 또는 중화 p53에 의존적 또는 -independent 체크 포인트 메커니즘과 호환 수준으로 게놈 불안정성을 진압에 의해 부분적으로 악성 진행을 가능하게 할 수 있다고 추측 프롬프트를 억제한다. 텔로 머라 아제의 활성화를 중지 또는 줄기 세포의 노화, 역 및 텔로 머라 아제 활성화는 게놈 불안정의 배경으로 종양을 촉진 할 수 있는지 여부를 할 수 있는지 여부를 연구하기 위해, 우리는 두 개의 유도 쥐의 텔로 머라 대립 유전자를 생성합니다. 첫 번째는 4 Hydroxytamoxifen (4-OHT) -inducible TERT-에스트로겐 수용체 (mTERT-ER) 융합 노크에 대립 유전자. 4- OHT의 부재에서 mTERT-ER (지정 mTERT ER / ER)에 대한 동형 접합성 마우스는 텔로 머라 제 활성이 결핍 된 종래 mTERT m 동일 또는 유전 학적 및 세포 표현형의 유지TERC 녹아웃 모델. 4- OHT 처리시 TERT-ER 단백질 활성은 네이티브 TERT 단백질 20, 21과 비교 레벨로 복원 될 수있다. 두 번째 대립 유전자는 신규 한 유도 TERT 노크에서 인트론에 loxP-스토퍼에 loxP 카세트를 함유하는 대립 유전자 (LSL-이고 mTERT); LSL의 절제를 Cre 호텔 - 중재에, mTERT 내생 발현 조절 메커니즘 (22)에서 다시 표현된다.

<table><tbody><tr><td>라이카 AM6000 Micromanipulation Kit</td><td>Leica</td> Per <td>quote</td><td></td></tr><tr><td>Leica DMI6000 B inverted microscope</td><td>Leica</td> Per <td>quote</td><td></td></tr><tr><td>Neomycin</td><td>Life technologies</td><td>21810031</td><td></td></tr><tr><td>isoflurane vaporizer</td><td>Veterinary Anesnes Systems</td><td>911103</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Henry Schein</td><td>1005796</td><td></td></tr><tr><td>케타민-자일라진 혼합물</td><td>시그마-알드리치</td><td>K113-10ML</td><td></td></tr><tr><td>4-OHT 분말</td><td>시그마-알드리치</td><td>H7904-5MG</td><td></td></tr><tr><td>타목스피엔</td><td>시그마-알드리치</td><td>T5648-1G</td><td></td></tr><tr><td>4-OHT 펠렛</td><td>미국의 혁신적인 연구</td><td>Custermized</td><td></td></tr><tr><td>정밀 트로차(10게이지)</td><td>미국의 혁신적인 연구</td><td>MP-182</td><td></td></tr><tr><td>상처 클립 applier</td><td>Fischer Scientific</td><td>01-804</td><td></td></tr><tr><td>클립</td><td>Fischer Scientific</td><td>01-804-5</td><td></td></tr><tr><td>신경 조직 해리 키트</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-092-628</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Life technologies</td><td>14025092</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Life technologies</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>xylene</td><td>Fischer Scientific</td><td>X3P-1GAL</td><td></td></tr><tr><td>메탄올</td>, <td>Fischer Scientific</td><td>A-433S4</td><td></td></tr>, <tr><td>아세트산</td>, <td>Fischer, Scientific</td><td>A38-500</td><td></td></tr>, <tr><td>에탄올</td>, <td>Fischer Scientific</td><td>, 22-032-104</td><td></td></tr>, <tr><td>포름아미드</td>, <td>Fischer, Scientific</td><td>F84-1</td><td></td></tr><tr><td>, PNA 텔로미어 프로브</td>, <td>Panagene</td><td>F1001-5</td><td></td></tr>, <tr><td>PNA 중심체 프로브</td>, <td>Panagene</td><td>F3003-5</td><td></td></tr><tr><td>20X SSC</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>BP1325-4</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>시그마-알드리치</td><td>A2153-10G</td><td></td></tr><tr><td>tRNA</td><td>시그마-알드리치</td><td>R5636-1ML</td><td></td></tr><tr><td>트윈 20</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>BP337-100</td><td></td></tr><tr><td>고무 시멘트</td><td>월마트</td><td>엘머스</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>시그마-알드리치</td><td>D9542</td><td></td></tr></tbody></table>

조직의 변성 / 재생 및 암의 연구에서 설치류 유도 성 텔로 머라 대립 유전자를 활용

Utilizing Murine Inducible Telomerase Alleles in the Studies of Tissue Degeneration/Regeneration and Cancer

텔로미어 노화 동안 조직 변성을 일으킬 노포 드라이버 게놈 무결성과 연관된 DNA 손상 체크 포인트 시그널링 및 응답의 손실이다 부전 유도. 발생률이 크게 연령 증가와 암은, 짧은 텔로미어 길이와 높은 텔로 머라 제 활성을 특징으로한다. 노화와 암의 텔로미어 기능 장애와 텔로 머라 아제 활성화의 역할을 연구하기 위해, 프로토콜은 두 쥐의 유도 텔로 머라 아제를 생성하는 방법을 보여줍니다 노크에 대립 유전자 4 Hydroxytamoxifen (4-OHT) -inducible TERT-에스트로겐 수용체 (mTERT-ER)과 훈제 연어 -Stopper - 훈제 연어 TERT (LSL-mTERT). 이 프로토콜은 텔로미어 기능 장애를 유도하고 생체 내에서 mTERT-ER 및 LSL - mTERT 생쥐에서 텔로 머라 제 활성을 활성화하는 절차에 대해 설명합니다. 대표 데이터는 텔로 머라 제 활성의 활성화가 텔로미어 기능 장애에 의해 유발 된 조직 퇴행성 표현형을 개선 할 수 있음을 보여준다. ORD에서어이 종양에 텔로 머라 아제 활성화의 영향을 결정하기 위해, 우리는 전립선을 생성 종양 모델 G4의 PB-Cre4 PTEN을 L / L p53을 L / L LSL - mTERT L / L 및 흉선 T 세포 림프종 모델 G4 현금 지급기 - / - mTERT ER / ER . 대표적인 데이터는 크게 종양을 향상시킬 수 있습니다 텔로미어 기능 장애에 의해 유발 유전자 불안정성의 배경에 그 텔로 머라 아제의 활성화를 표시합니다. 이 프로토콜은 또한 신경 줄기 세포 mTERT-ER 및 LSL - mTERT 마우스에서 (NSCs의)를 분리하고 체외에서 NSCs의에서 텔로 머라 제 활성을 활성화하는 데 사용되는 절차를 설명합니다. 대표 데이터는 텔로 머라 제의 활성화는 시험 관내에서자가 재생산 능력과 신경을 향상시킬 수 있음을 보여준다. 마지막으로, 프로토콜이 모두 마우스 FFPE에 텔로미어 FISH (제자리 교잡 형광)을 수행하기위한 절차를 설명합니다 (포르말린 고정 및 Paraf핀 임베디드) 뇌 조직 배양 세포의 중기 염색체.

전략은 쥐 mTERT-ER을 생성하고 LSL - mTERT 녹아웃에 대립 그림 1A 및 1B에 설명했다. 특히,에 loxP - 트리플 스토퍼 - 네오는 -에 loxP 단편 LSL - mTERT 대립 유전자를 생성하기 위해 엑손 1 mTERT 궤적의 엑손 2 사이에 삽입되었다. mTERT-ER 대립 유전자를 생성하려면, mTERT 유전자 프레임에서 ERT2-LBD 도메인은 우리가 보여 엑손 1의 N 말단에 삽입하는 텔로 머라 제는 일시적으로 4 4-OHT 펠렛로 처리하여 텔로미어 기능 부전 마우스에 활성화 될 때 주, 퇴행성 표현형은 여러 뇌 (그림 2A)와 같은 기관과 고환 (그림 2B)로 개선 될 수있다. 늦게 발생 G4 LSL-mTERT mTERT 및 G4에서 생체 외에서 배양 된 세포의 텔로 머라 제의 활성화에 미치는 영향을 결정하기 위해, 우리는 절연 신경줄 기세포 (NSCs의)-ER 마우스. 우리는 텔로 머라 아제가 텔로미어 기능 장애 NSCs의 재 활성화 될 때, NSCs의자가 재생산 능력이 크게 유의하게 (그림 3B) 강화되었다 (그림 3A)를 증가 및 체외 신경에 된 것으로 나타났다. 텔로미어 부전의 맥락에서 종양 발생에 텔로 머라 제 활성화에 미치는 영향을 결정하기 위해 우리가 생성 PB-Cre4 PTEN을 L / L에서의 p53 L / L의 LSL-mTERT L / L (전립선 암 모델) 및 ATM - / - mTERT ER / ER (흉선 T 세포 림프종 모델) 늦게 발생 코호트. 텔로 머라 제는 8주 (도 4B)에 대한 분사를한다 (도 4A) 또는 4-OHT 펠렛 이들 마우스에서 타목시펜 처리에 의해 활성화 된 경우, 종양은 크게 두 전립선 암 모델 (도 4a)과 흉선의 T 세포 림프종 모델에서 향상시켰다 ( <strong&gt; 그림 4B). 마지막으로, 우리는 FFPE 마우스 뇌 조직에 텔로미어 FISH을 수행하는 프로토콜 (그림 5)와 중기 염색체 (그림 5, 삽입)을보고했다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/52599/52599fig1.jpg" /> 그림 1 : (A) mTERT-ER 노크에 전략을. 벡터를 대상으로 TV,; WT, 야생형 대립 유전자; KI, 노크에 대립 유전자; LA, 왼쪽 팔; RA, 오른쪽 팔; E1, 엑손 1; E2, 엑손 2; 신, PGK의 네오 마이신 내성 유전자를 프로모터 중심; ER, 수정 에스트로겐 수용체 (ERT2) 리간드 결합 도메인; DT, dyphteria 독소 유전자. (B) LSL-mTERT 노크의 전략. 벡터를 대상으로 TV,; WT, 야생형 대립 유전자; KI, 노크에 대립 유전자; LA, 왼쪽 팔; RA, 오른쪽 팔; E1, 엑손 1; E2, 엑손 2; 신, PGK의 네오 마이신 내성 유전자를 프로모터 중심; 스토퍼, 세 반복적 전사 정지 시퀀스; DT, dyphteria 독소 유전자. <pFO 클래스 = &quot;jove_content&quot;유지 - together.within 페이지 = &quot;항상&quot;&gt; <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/52599/52599fig2.jpg" /> 그림 2 : 대표 데이터가 텔로 머라 아제 활성화를 표시하는이 기관의 퇴행성 표현형을 완화시키는 뇌의 대표 이미지 (왼쪽). 및 고환 (오른쪽) 위약 또는 4 주 동안 4 OHT으로 처리 G0와 G4 mTERT-ER 마우스. 스케일 바는 50 μm의를 나타냅니다. 다시 인쇄 (20)의 허가. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52599/52599fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/52599/52599fig3.jpg" /> 그림 3 :. 대표 데이터가 텔로 머라 아제 활성화를 표시하는 자기 갱신과 체외에서 신경 줄기 세포의 신경을 ​​강화 (A) 신경 줄기 세포의 대표 이미지G4의 LSL - mTERT에서 분리 S (상판) 및 G4 mTERT-ER (하판) 차량 또는 4-OHT 치료 줄기 세포 매체에서 성장. (B) 분화 배지에서 배양 G4 mTERT-ER로부터 단리 신경 줄기 세포의 시험 관내 신경 (Tuj1 +)의 대표적인 이미지는 (1 % FBS 포함) 차량 또는 4-OHT으로 처리 하였다. 스케일 바는 100 μm의를 나타냅니다. <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/52599/52599fig4.jpg" /> 그림 4 :. 텔로 머라 아제의 활성화를 보여주는 대표적인 데이터가 게놈 불안정의 배경으로 종양을 향상 (A) / L p53을 L / L LSL - mTERT G0 PB-Cre4 PTEN을 L 해부 전립선 종양의 대표 이미지 +/-, G4 솔더 (Soler) Cre4 PTEN을 L / L p53을 L / L의 LSL - mTERT- / -, 및 G4 PB-Cre4 PTEN을 L / L p53을의 L은 / L LSL - mTERT L / L 타목시펜으로 치료. (22) 허가를 다시 인쇄 할 수 있습니다. (B) G0 기압의 해부 흉선의 T 세포 림프종의 대표적인 이미지 - / - mTERT + / ER, G4 현금 지급기 - / - mTERT ER / ER 차량으로 처리하고 G4 현금 지급기 - / - mTERT ER / ER 4- 처리 팔주에 대한 OHT. 스케일 바는 1cm를 나타냅니다. <img alt="그림 5" src="/files/ftp_upload/52599/52599fig5.jpg" /> 그림 5 : FFPE 마우스 뇌 조직과 중기 (삽입)에 텔로미어와 센트로 FISH의 대표 이미지. 빨간색 녹색 텔로미어 (telomere) 염색을 나타냅니다, DNA를 나타내고, 시안은 CE를 나타냅니다ntromere 염색. 스케일 바는 1mm를 나타냅니다.

텔로미어와 텔로머라제는 노화와 종양 형성에 필수적인 역할을 합니다. 이 프로토콜의 목표는 두 개의 쥐 유도성 텔로머라제 넉인 대립유전자를 생성하는 방법과 조직 퇴행/재생 및 암 연구에 이를 활용하는 방법을 보여주는 것입니다.

Telomere dysfunction-induced loss of genome integrity and its associated DNA damage signaling and checkpoint responses are well-established drivers that ...

다음 실험의 전반적인 목표는 조직 퇴행 및 재생 및 암 연구 연구를 위해 생체 내 및 체외에서 두 개의 쥐 유도 mase 노킹 대립유전자를 조작하는 것입니다. 이는 하이드록시 타목시펜 정제를 동물에 이식하여 생체 내에서 메이스를 재활성화함으로써 달성됩니다. 두 번째 단계로, 동물에서 신경 줄기세포를 분리한 다음 하이드록시 타목시펜으로 처리하여 시험관 내에서 MAS를 재활성화합니다.다음으로, C, 2, 혼성화 또는 물고기의 텔로미어 형광은 mase의 활성을 확인하기 위해 배양된 세포와 형성 및 고정 파라핀 내장 뇌 조직 모두에서 수행됩니다. 그 결과, 하이드록시 타목시펜 치료는 마제 활성을 강력하게 재활성화할 수 있으며, 이는 노화 표현형을 완화하고 조직병리학적 검사를 기반으로 종양 형성을 촉진할 수 있음을 보여주었습니다. 이 방법은 TH 외상 활동을 조절하여 노화 과정을 늦출 수 있는지 여부 또는 암을 치료하기 위해 Thomas를 구체적으로 표적으로 삼는 방법과 같은 노화 및 암 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다.이 절차를 시연하는 것은 제 연구실의 강사 Dr.Takashi Shingu와 기술자 April Un이 될 것입니다. 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 Turt ER 및 Lock Stop Lock Turt 대립유전자의 생성으로 이 절차를 시작하고, 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 마우스를 마취하기 위해 주입을 진행하기 전에 모든 수술 도구를 살균합니다. 깊은 마취에 도달한 후 마취된 동물을 유도실에서 제거하고 이소 불소 챔버에 연결된 튜브 안에 머리를 유지합니다.쥐의 발 패드를 꼬집어 동물이 깊이 마취되었는지 확인합니다. 또한 양쪽 눈에 연고를 바르고 눈이 빠지는 것을 방지하기 위해 포비돈 요오드 용액으로 쥐의 등을 닦습니다. 다음으로, 천천히 방출되는 하이드록시 타목시펜 펠릿을 등 피부 아래에 정밀 투관침으로 주입합니다.그리고 펠릿을 두 어깨 사이의 정중선까지 끝까지 밀어 넣습니다. 상처 클립 애플라이어로 절개 부위를 밀봉하고 마우스의 회복을 모니터링합니다. 마취를 위해.하루 동안 쥐의 뇌를 꺼내고 후각구와 소뇌를 제거하여 4개의 뇌를 유지합니다. 4개의 뇌 조직을 1밀리리터의 저온 배양 배지에 보관하고 섭씨 4도에서 보관하십시오. 1시간 이내에 신경 조직을 처리해야 합니다.조직의 무게를 측정하여 소화당 400mg 한도를 초과하지 않도록 합니다. 35mm 직경의 페트리 접시 뚜껑에 뇌를 놓고 메스로 뇌를 부수십시오. 1ml 피펫 팁을 사용하여 Hank's balance salt 용액 또는 HBSS 1ml를 추가합니다.그런 다음 HBSS 원심분리기로 300배 G로 실온에서 2분 동안 헹군 후 조각을 15ml 튜브에 다시 피펫으로 넣습니다. 상등액을 조심스럽게 제거한 후 예열된 효소 1, 950마이크로리터를 첨가합니다. 최대 400mg의 티슈당 1개를 섞으십시오.15ml 튜브에 시료를 넣고 섭씨 37도에서 15분 동안 배양합니다. 5분마다 튜브를 뒤집거나 흔들어 샘플을 혼합합니다. 그런 다음 20 마이크로 리터의 용액, 3-10 마이크로 리터의 용액 4를 추가하여 조직 샘플 당 2 개의 효소를 준비합니다.그런 다음 샘플에 부드럽게 반전시켜 혼합하고 팁이 넓은 화재 광택 페이스트 피펫을 사용하여 기포 형성을 피하면서 천천히 위아래로 10회 피펫팅하여 조직을 기계적으로 해리합니다. 섭씨 37도에서 10분 동안 배양하고 3분마다 튜브를 뒤집습니다. 다음으로, 50 밀리리터 튜브에 놓인 70 미크론 세포 여과기에 세포 현탁액을 적용합니다.세포 여과기를 통해 10ml의 인산염 완충 식염수 또는 PBS를 적용합니다. 그런 다음 세포 스트레이너를 버리고 세포 현탁액을 300배 G에서 20분 동안 원심분리합니다. 원심분리 후 상층액을 완전히 흡인하여 실온을 설정합니다.줄기 세포 배지로 세포를 필요한 부피로 재현탁시켜 잠금 장치의 텔레 어레이를 활성화하고 잠금을 중지합니다. 터트 신경 줄기 세포. 100마이크로몰의 하이드록시 타목시펜으로 세포를 2일 동안 처리하여 emase 및 turt er 신경 줄기 세포를 활성화합니다.텔로미어 피쉬를 수행하기 위해 100 마이크로몰 하이드록시 타목시펜으로 세포를 배양 배지에 유지합니다. 먼저, 포르말린 고정 및 파라핀 포매 또는 FFPE 조직 절편에 대해 배양된 세포의 중기 염색체를 준비합니다. 샘플을 자일렌으로 분리하고 에탄올 시리즈에서 각각 5분, PBS에서 5분 동안 재수화합니다.그런 다음 1-2시간 동안 메탄올과 아세트산의 3:1 비율로 섹션을 접미사합니다. 차가운 에탄올 시리즈로 섹션을 각각 5분 동안 탈수하고 섭씨 37도에서 5분 동안 하나의 XPBS로 자연 건조 세탁합니다. 다음은 자연에서 4%포름알데히드의 염색체를 섭씨 37도에서 2분 동안 노출시킵니다.이전과 같이 차가운 에탄올 계열의 섹션을 탈수하고 건조되면 자연 건조하고 각 슬라이드에 펩타이드 핵산 혼성화 혼합물 12-25 마이크로 리터를 적용합니다. 고무 시멘트로 커버 슬립을 밀봉하고 자연 염색체 준비물과 조직 절편을 섭씨 80도에서 4분 동안 게시합니다. 그런 다음 습한 챔버에서 2-4시간 동안 실온 또는 섭씨 37도에서 혼성화합니다.다음으로, 세척 버퍼를 사용하여 실온에서 샘플을 15분 동안 두 번 세척합니다. 그런 다음 PBS로 실온에서 5분 동안 세탁하고 트윈을 23회 세탁합니다. 마지막으로, 현미경 검사를 위해 DPI 또는 근적외선 형광으로 슬라이드를 대조 염색합니다.텔로미어가 텔로미어 기능 장애 마우스에서 일시적으로 재활성화되었을 때, 텔로미어 재활성화가 세포에 미치는 영향을 결정하기 위해 뇌 및 고환과 같은 여러 기관에서 퇴행성 표현형을 개선할 수 있었습니다. 배양된 체외 신경 줄기세포는 후기 세대 G 4개의 잠금 정지 잠금, TURT 및 G 4개의 turt ER 마우스에서 분리되었습니다. 텔로미어가 기능 장애 신경 줄기세포에서 재활성화되었을 때, 자기 재생 능력이 크게 증가했다.텔로미어 기능 장애의 맥락에서 종양 발생에 대한 mase 재활성화의 영향을 결정하기 위해 체외 신경 발생도 크게 향상되었으며, 전립선 종양 모델에서 타목시펜 치료에 의한 mase 재활성화를 수행했습니다. Endot thic T 세포 림프종 모델. 이 치료는 두 모델 모두에서 종양 발생을 크게 향상시키는 결과를 가져왔습니다.마지막으로, 텔로미어 피쉬는 FFPE, 마우스 뇌 조직 및 중기 염색체에 대해 수행되었습니다. 이 이미지에서 빨간색은 DNA 녹색이 텔로미어 염색을 나타내고 청록색은 중심체가 염색되었음을 나타냅니다. 이 비디오를 시청한 후에는 mTOR ER에서 외상 활동을 활성화하고 정지 잠금 장치, mTOR 동물 및 세포주를 잠그는 방법, 그리고 이를 사용하여 암 및 병원체에 대한 질문을 연구하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.

utilizing-murine-inducible-telomerase-alleles-studies-tissue

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

RNA 간섭 (RNAi)는 유전자 녹아웃 이상의 많은 장점을 보유하고 광범위하게 유전자 기능 연구의 도구로 사용되었습니다. DNA를 벡터 기반의 RNAi 기술의 발명은 장기적으로 가능한 inducible 유전자 최저했고, 또한 유전자 입을의 가능성을...

암 관련 유전자 기능을 연구하기 DNA를 벡터 기반의 RNA 간섭

인간화 마우스를 사용하여 종양 특정 T 세포의 생성 및 특성이 여기에 설명되어 있습니다. 인간 thymic 조직 및 유전자 변형 인간의 조혈 줄기 세포는 면역 저하 된 쥐에 이식되어 있습니다. 안티 종양 면역 반응의 생체 시험에서 허용하는 엔지니어링 인간의 면역 시스템의 reconstitution에이 발생합니다.

줄기 세포 기반 유전자 치료 종양 모델로 BLT 인간화 마우스를 사용하여

유도된 만능 줄기 세포 (iPSC)유래 한 근생 선조는 근 이영양증을 치료하는 세포 치료 전략에 대한 유망한 후보입니다. 이 프로토콜은 급성 및 만성 근육 재생의 마우스 모델에서 iPSC 유래 메소포아세포(근육 선조의 일종)의 이식 및 분화를 평가하는 데 필요한 이식 및 기능측정을 설명합니다.

근육 재생의 마우스 모델에서 유도 만능 줄기 세포 유래 메소안지오블라스트 와 같은 근생 성 전구의 이식

이 프로토콜은 근육 또는 피부 조직에서 근육 및 섬유아세포 세포주의 살아있는 세포를 분리하고 1차 배양하는 기술을 설명합니다.  이러한 세포주를 불멸화하는 기술도 설명됩니다.  전체적으로 이러한 프로토콜은 다운스트림 애플리케이션을 위해 환자 유래 세포를 생성하고 보존할 수 있는 신뢰할 수 있는 도구를 제공합니다.

질병 모델링을위한 근육 조직 검사에서 환자 유래 세포주의 분리 및 멸화

이 원고는 형질도입-이식 마우스 모델을 확립하는 데 사용되는 방법론에 대한 설명을 제공합니다. 골수 이식을 수행할 때 피해야 할 기술적 오류에 대한 자세한 설명이 제공됩니다. 높은 바이러스 역가, transfection/transduction 및 방사선 조사의 중요성에 대한 명확한 이해를 얻어야 합니다.

골수 증식 종양의 전달-이식 마우스 모델

선물이 RIP-태그;를 활용 하 여 소설 체세포 유전자 전달 시스템을 설명 하는 프로토콜 RIP-tva 마우스 모델 전이에서 유전자의 기능 연구. 조류 레트로 바이러스 intracardiacally 성인 쥐에서 췌 장 β 세포의 사전 악성, 비 침 투 적인 병 변으로 유전자 전송을 보장 하기 위해 전달 됩니다.

식별 및 태그-소설 RIP;으로 유전자 이동에 의해 전이성 요인의 특성 RIP-tva Murine 모델

다음 절차는 유전자 조작 된 마우스 모델을 사용 하 여 뮤 린 등 피부에 멜 라 세포 종양 개시의 공간적 및 시간적 제어를 위한 방법을 설명 합니다. 이 프로토콜은 거시적 뿐만 아니라 현미경 피부 흑색 종 개시를 설명 합니다.

돌연변이 멜 뮤 린 줄기 세포에서 시작 하는의 공간적 및 시간적 제어

두경부암 환자에서 돌연변이된 특정 유전자를 가진 뮤린 모델의 개발은 신생물의 이해를 위해 요구된다. 여기서, 우리는 특정 게놈 변경을 가진 뮤린 HNC 세포주를 생성하기 위하여 아데노 관련 바이러스 Cas9 시스템을 사용하여 1 차적인 뮤린 혀 세포의 시험관 내 형형변환을 위한 프로토콜을 제시한다.

아데노 관련 바이러스-Cas9 시스템을 사용하여 유전자 조작 된 뮤린 머리와 목 암 세포라인의 시험관 내 설립

유도성 트랜스제닉 계보 추적 마우스 라인을 사용하여 줄기 세포 및 그의 자손을 형광단으로 영구적으로 표시하는 능력은 생체내에서 활성화, 증식, 이동 및/또는 분화의 공간적 및 시간적 분석을 가능하게 한다. 계보 추적은 혈통 헌신, 개입에 대한 반응 및 다능성에 대한 새로운 정보를 나타낼 수 있습니다.

성인 마우스 뇌에서 유도성 형광 표지 줄기 세포의 계보 추적

이 논문은 1-3분 이내에 95% 에탄올을 마우스 자궁에 주입하여 사망률이 매우 낮고 자궁 내 유착을 최소화하면서 신뢰할 수 있고 재현 가능한 얇은 자궁내막을 생산하기 위한 자세한 프로토콜에 대해 설명합니다.

얇은 자궁내막의 마우스 모델 구축

이 프로토콜은 체외/생체 내 기능 분석, 전사체학 및 컴퓨터 분석을 포함하여 쥐 CAF를 배양, 조작 및 분석하는 방법을 간략하게 설명합니다. 또한, 인간 유방암 종양 컬렉션에서 레이저 캡처 미세 절개 기질 및 상피 구성 요소의 공개적으로 사용 가능한 전사체를 분석하기 위해 개발된 웹 기반 플랫폼에 대해 설명합니다.

Cancer-Associated Fibroblasts from Mouse Mammary Tumors as Tools for Molecular and Computational Studies(분자 및 컴퓨터 연구를 위한 도구로서의 마우스 유방 종양에서 유래한 암 관련 섬유아세포)

배우세요 설치류 유도성 텔로머라스 대립유전자를 활용한 조직 변성 및 재생, 암 연구 방법을. 하이드록시 타목시펜 처리와 FISH 기법으로 노화 완화 및 종양 형성 메커니즘을 분석합니다.

조직의 변성 / 재생 및 암의 연구에서 설치류 유도 성 텔로 머라 대립 유전자를 활용

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