Name: 횡격막 모터 뉴런에 의해 다이어프램 신경 분포의 기능 및 형태 학적 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 43 s
Description: 학습하세요 횡격막 모터 뉴런에 의한 다이어프램 신경 분포의 기능 및 형태학적 평가 방법을. 복합 근육 활동 전위 기록과 전체 장착 면역조직화학을 활용하여 쥐 모델에서 호흡 기능 회복 연구에 활용할 수 있습니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이 작업은 NINDS(A.C.L.에 대한 보조금 #1R01NS079702)와 토마스 제퍼슨 대학교(M.M.)의 SURP 프로그램의 지원을 받았습니다.

실험 절차는 토마스 제퍼슨 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회의 승인 (609분의 86 / EEC 및 87-848 / EEC 63분의 2,010 / EU) 유럽 공동체위원회 지침, 대한 NIH 가이드를 준수하여 실시 하였다 신경과 실험 동물의 사용 및 신경 과학 연구에서 동물의 사용에 대한 신경 과학의 정책에 대한 사회. 1. 복합 근육 활동 전위 (CMAPs) <ol><li> 동물 준비 : <ol><li> 주사 (케타민, 자일 라진, 아세 프로 마진) 효과 나에 의해 전달 1 ~ 2 %에 흡입 (이소 플루 란)를 사용하여 쥐를 마취. 케타민의 95.0 ㎎ / ㎏, 10.0 밀리그램 / 자일 라진의 kg, 0.075 밀리그램 / 아세 프로 마진 kg을 다음과 같이 주사 마취의 복용량이다. 참고 : 우리는 성공적으로 모두 흡입을 사용하고이 CMAP 기록 프로토콜을 수행 할 때 주 사용 마취제가없는 환경으로 접근한다. </li><li> 동물은 적절한 유지해야수술 전 nesthetic 깊이는 수술의 결론을 통해 시작되고, 수술 후 부 프레 노르 핀까지 영향을 촬영하고있다. 금단 반응이 유도되지 않는다는 것을 확인하는 간단한 발가락 핀치에 의한 적절한 마취를 확인합니다. 또한, 면봉으로 각막 반사를 테스트합니다. 수술 전반에 걸쳐, 심장 박동과 호흡 속도는 마취 깊이가 너무 빛이 될 것을 제안하는 증가하지 않았 음을 확인합니다. </li><li> 마취 동안 건조를 방지하기 위해 동물의 눈에 수의사 연고를 적용합니다. </li><li> 의사는 수술을 시작하기 전에 소독제 (클로르헥시딘 스크럽)와 함께 / 그의 손을 그녀를 세척해야합니다. 의사는 멸균 장갑, 안면 마스크, 가운 또는 깨끗한 실험실 코트를 착용해야합니다. 모든 장비는 세척 및 수술 전에 멸균해야합니다. 그 멸균가 완료되었는지 확인 악기의 수준에서 고온 가압 멸균 전에 악기 키트 내부 살균 표시기 스트립을 추가합니다. 외과 의사해야스트립에 전체 라인이 수술을 시작하기 전에 검은 색인지 확인합니다. 뿐만 아니라 테이프를 오토 클레이브로 나타내는 박스의 외측을 테이프입니다. 수술 당일에 여러 동물들에 대해 수행되어야하는 경우, 수술기구를 사이에 정리하고, 유리 비드 살균기에서 살균. 필요한 경우, 멸균 지혈제와 기기를 제거하는 적절한 시간 멸균기에서 악기의 핸들을 배치 무균 영역에서 냉각 한 다음의 기능적 단부를 배치하여 유리 비드 살균기에서 악기의 양단 살균 적절한 시간의 기간 동안 유리 비드 살균기로 악기. </li><li> 동물 마취되면, 다운 등의 표면에 수술 보드 등 그 테이프를 직면 복부 장소는 수술 보드에 동물의 앞다리를 보호하는 데 사용할 수 있습니다. </li><li> 두개골의 기부에서 시작 복부 표면 미부 면도 및 중심선의 양쪽에 복부 주변이 SH가 있음을 확인aved 헤미 다이어프램가 기록되고있는 따라. 피부의 면도 표면에 포비돈 - 요오드 적용합니다. </li></ol></li><li> CMAP 녹음 준비 : <ol><li> 꼬리에 동물 준비, 장소 접지 전극의 피하에 따라 (그림 1). </li><li> 반대측 하복부에 기준 전극 피하 놓습니다. </li><li> 자체 접착 표면 스트립이나 디스크 기록 전극 (표면 스트립 전극의 크기 : 0.5 × 3cm)에 전도성 젤을 놓은 다음 일방적 늑골 가장자리를 따라 가로 표면 전극을 배치합니다. </li><li> transcutaneously 0.5 cm 간격 기관에 측면과 쇄골 우수 자극 전극을 배치합니다. 피부를 통해 약 1.0 cm 깊이 전극을 삽입합니다. 자신의 위치 후속 자극으로 이동하지 않도록 손으로 전극을 고정합니다. 참고 : insertio의 사이트에있는 피부에 90 ° 상대 각도 자극 전극N. </li></ol></li><li> 복합 근육 활동 전위 (CMAP) 녹음 : <ol><li> 컴퓨터를 이용한 데이터 분석 다음에 자극 / 앰프를 사용하여 전기 생리 녹음을 얻습니다. </li><li> 하나의 풀 자극의 자극 매개 변수를 0.5 밀리 초, 1.0 Hz에서 supramaximal 펄스를해야한다. 자극의 진폭은 V 6.0 내지 8.0 (그림 2A)이어야한다. 참고 : 실험 내에서 동물에서 동일한 진폭 자극 강도를 사용합니다. 목적은 자극의 최소 진폭을 사용하여 응답의 진폭을 최대화하는 것이다. 이는 자극시 발생 초기 응답은 자극 인공물임을 주목하는 것이 중요하다. 또한, 치료는 빠른 응답 CMAP 뒤에 자극 인공물, 이후 안정 / 평평한 기준선 앞에는 CMAP 응답을 획득하기 위해 취해 져야한다. 이러한 응답을 얻기 위해서는, 자극의 위치를​​ 변경하는 것이 필요할 수있다 및 / 또는기록 전극. </li><li> 자극 사이에 30 초를 기다린 평균 응답 (그림 2B - C)를 얻기 위해 행에 10 자극을 반복합니다. 피크 (그림 2A)에베이스 라인에서 진폭을 측정합니다. 횡격막 신경 / 다이어프램이 활성화되지 않은 경우에 동물의 호흡주기의 단계에서 횡격막 신경 자극을 실시한다. 절차는 반대측 헤미 다이어프램 동일한 동물에 반복 될 수있다. </li><li> NMJ 염색을 실시 할 경우 최종 CMAP 기록 세션 후, 동물을 관류. 약 한 번 같은 동물에 반복 매주 CMAP 녹음을 실시 (또는 선택의 간격). </li><li> 생존 CMAP 녹음 후, 동물이 깨어 sternally 기댄까지 복구하는 동안 순환 온수 가열 패드에 복구하고, 지속적으로 모니터링 할 수 있습니다. 완전히 회복 될 때까지 다른 동물의 회사에 수술을 한 동물을 반환하지 않습니다. &lt;/ 리&gt; <li> 일단 sternally 휴식하고, 동물 최초의 48 시간 (회 이후)마다 12 시간을 모니터링 할 수 있습니다. (사이트가 회전하여, 주입 당 1-2 ml의; 피하 락 테이트 벨소리 솔루션이 하루 시간) 동물이 탈수 (이완 된 피부, 마음이 내키지 않음)로 표시되면, 유체를 관리 수술 후 체중 및 유체 손실이 안정 될 때까지합니다. 그들은 와이어 바 뚜껑 공급 장치에 도달 할 수없는 경우 식사를 장려하기 위해 필요한 경우 급성 수술 후 기간 동안 작은 접시에 연화 음식과 동물을 제공합니다. </li><li> 수술 종료 전에 0.05 ㎎ / ㎏의 용량으로 부 프레 노르 핀을 투여 한 후 12 시간 간격으로 첫 번째 24 시간 동안 (후 통증 / 스트레스 증상에 의존) 피하 주사를 통해 (위치는 회전). 통증이나 고통의 흔적은 그 후 발견하는 경우, 부 프레 노르 핀과 동물을 취급합니다. 나타내는 통증 / 고통의 징후는 활동의 부족, 발성, 식사의 부족 또는 마시는 (탈수), 과도한 체중 감소, 지키고, EXC 포함대던 또는 절개의 사이트에 긁힘 (메모리). 통증과 고통을 결정하는 데 사용되는 추가 기준은 외부 자극에 응답하지 않는, 일시적 또는 정당한 이유 발성, 고심한 흔적 또는 비정상 호흡, 지속적인 적갈색 NaSO4로 - 고 안압 방전 표시 경직을 포함한다. 또한 아픈 동물을 제안 가난한 위생의 증거를 모니터링 할 수 있습니다. 동물은 여전히​​ 치료 72 시간 후 조난 것으로 관찰되는 경우, 동물을 안락사 (상기 윤곽 통증 / 응력 기준에 따라, 수신 한 후 진통제 프로토콜은 전술). </li></ol></li></ol> 2. 다이어프램 신경 근육 접합 (NMJ) 분석 <ol><li> 동물 해부 : <ol><li> 동물에게 주사 마취의 과다 복용을 관리 (:; 복강 투여 0.225 ㎎ / ㎏에서 30.0 ㎎ / ㎏, 아세 프로 마진에서 285.0 ㎎ / ㎏, 자일 라진에서 케타민 3 회 이상 사용 복용량). 과량 후, 모든 동물은 안락사 t (개흉술)의 두 번째 방법이 있어야O 죽음을 보장합니다. 죽음은 심장과 호흡 정지를 관찰하고 동물의 고정 동공 확장을 지적으로 확인해야합니다. </li><li> 메스 또는 해부 가위 꼬리 쪽 중간 선을 따라 zyphoid 과정에서 절제를 연장 개복술을 실시한다. 조심스럽게 메스와 집게를 사용하여 기본 근육에서 피부와 결합 조직을 분리. </li><li> zyphoid 과정 위로 당기면서, 다이어프램이 뼈 주변에 부착 될 수 있도록 보장, 전체 다이어프램을 제거하는 해부 가위를 사용합니다. 그것은 전체 진동판의 성공적인 해부 허용되며, 격막의 근육의 손상을 방지하며 후속 염색법 근육을 세정하는데 도움이되므로 중요하다. 참고 : 필요한 경우이 시점에서, 동물 관류 할 수 있습니다. </li></ol></li><li> 청소 및 다이어프램의 염색 : <ol><li> 전체 해부 다이어프램을 핀, 우수한 표면은 유리 100mm 페트리 접시에 실리콘 고무로,이 위를 향하도록실체 현미경을 이용하여 20 분 - 4 % 파라 포름 알데히드 (PBS, 1 % 인산으로 이루어지는 완충 염수). 이 팽팽하게 다이어프램 신축성 및 곤충 핀을 이용하여, 다이어프램 근육 자체 (도 3)를 피닝 피하기 위해 주위 조직 아래에 핀. </li><li> 조심스럽게 # 5 포셉 작은 가위로 근육의 우수한 표면에서 결합 조직을 청소합니다. 참고 : 달리 명시하지 않는 한이 염색 프로토콜이 서서히 빛 덮여 실온에서 락의 모든 후속 단계를 수행합니다. 다이어프램 근육은 항상 완전히 건조를 방지하기 위해 액체에 빠져들되어 있는지 확인합니다. </li><li> (0.2 1X PBS, 2 % 소 혈청 알부민 (BSA) / PBS, BSA / PBS, 4 % 파라 포름 알데히드 1X PBS에서 (PFA), 및 0.2 % TBP 2 % 이루어진 0.1 M 글리신 : 이전 염색에 필요한 모든 시약을 준비 2 % BSA / PBS)에서 % 트리톤 X100. -20 ° C에서 메탄올 - 멋진을 미리해야합니다. </li><li> 1X PBS에서 10 분 동안 세척 배. </li><li> 2에서 만든 0.1 M 글리신 (에 품어%의 BSA 30 분 / PBS). </li><li> 15 분 동안 RBTX (로다 민 - 복합 α-bungarotoxin) 솔루션에 품어. 다음과 같이 RBTX에 대한 해결 방법은 다음과 같습니다 로다 민 - 복합 알파 bungarotoxin 1 : 1X PBS 400 희석. 주 :이 프로토콜에서, 로다가 사용되지만, 임의의 선택은 형광 염색에 사용될 수있다. </li><li> 1X PBS에서 10 분 동안 세척 배. </li><li> -20 ° C의 냉동고에, 5 분 동안 메탄올과 함께 배양한다. 참고 : 냉동실에 근육을 배치하기 전에 메탄올을 추가하고 즉시 잠복기 다음과 같은 솔루션을 제거하지 마십시오. </li><li> 1X PBS에서 10 분 동안 세척 배. </li><li> 1 시간 동안 0.2 % TBP의 블록 (0.2 % 트리톤은 2 % BSA / PBS에 만든). </li><li> 락 동안 4 ° C에서 하룻밤 일차 항체 용액 (0.2 %에서 TBP)와 함께 품어. 항체의 희석 다음과 같이 SV2 (1시 10분) 및 SMI-312 (1 : 1,000). </li><li> 0.2 % TBP 10 분 동안 배를 씻으십시오. </li><li> FGM1 (FITC 접합 된 염소 항 - 마우스 IgG 100 희석 한 이차 항체를 이용하여 부화1; 1 시간 동안 락을하는 동안 0.2 % TBP)에서했다. 참고 : 염색을위한 프로토콜의 나머지 부분에 대한 빛으로부터 보호합니다. </li><li> 1X PBS로 10 분간 세척 배. </li><li> 다시 깨끗한 이전 설치 및 coverslipping에 근육의 우수한 (위 참조) 표면에 결합 조직을 둘러싼. 주 : 청소 후 염색 후 즉시 샘플을 장착하는 것이 좋습니다. 그러나 필요한 샘플을 1X​​ PBS에 적용 할 수있는 경우, 증발을 방지하기 위해 파라 필름에 싸여 매일 PBS의 변화와 함께, 1 주까지 4 ℃에서 저장. </li><li> 유리 슬라이드, 비 hardset Vectashield와 커버 슬립에 장착시. 건조를 방지하기 위해 투명 매니큐어와 커버 슬립의 가장자리를 밀봉합니다. 장기적으로 -20 ° C에서 판지 슬라이드 폴더의 평면 거짓말을 저장 슬라이드. </li></ol></li><li> 분석 및 공 촛점 이미징 : <ol><li> 정량적 물들의 형태를 분석하여 직립 표면 형광을 사용 20X 및 40X 배율 하에서 헤미 다이어프램을 장착현미경. 주 : 다이어프램 염색 전체 마운트 방식으로 해석되기 때문에, 근육이 상당히 두껍다. 정지 화상이 비 - 공 초점 형광 현미경을 이용하여 촬영 한 경우 결과적으로, 형광 염색 대부분 완전히 초점이 맞지 않는다. 이 때문에, 이렇게하면 항상 제대로 개별 NMJs의 각각의 형태를 식별하기 위해 &quot;업&quot;및 &quot;다운&quot;근육 통해 집중할 수로서 현미경 실시간 NMJ 분석을 수행하는 것이 최상이다. 그들은 시냅스 후 수용체 클러스터 공간적 관계 조직을 통해 이동할 때이 방법을 사용하면, 하나는 쉽게 개별 모터 축삭 궤적을 따를 수있다. </li><li> 근육의 복부 대 지느러미 길이를 측정하여, 특정 척수 수준 (도 4H)로부터 지형 신경 분포 패턴에 따라 분석을위한 별도의 3 개의 섹션으로 분할 근육. </li><li> 근육과 MOV의 복부 지역에서 시작등쪽으로 보내고, 표면 근육 섬유에있는 얼굴 NMJs 욕실을 모두 분석 할 수 있습니다. RBTX 인해 라벨을 사용 큰 항체에 비해 독소의 작은 크기로 근육 내로 훨씬 더 깊이 침투 (인해 열악한 항체 침투 해석이 어려울 수 있으므로 깊은 표면으로부터 제 3-4 섬유보다 근육 섬유를 분석하지 않는다 뉴런). </li><li> 신경 세포의 사전 터미널 축삭 직경 두께와 신경 터미널의 모든 지역이 완전히 기본 근육의 아세틸 콜린 수용체 (AChRs)과 겹치는 경우 그대로 각 NMJ을 확인합니다. </li><li> 기본 근육 AChRs의 영역은 신경 단자 대응 비어있는 경우 부분적으로 denervated 각 NMJ을 확인합니다. </li><li> 완벽 denervated 각 NMJ를 확인하면 근육 AChRs이 해당하는 신경 말단 없습니다 (하나 신경 단말기의 부족으로 인해 간단하지 않습니다 확신 할 수 있도록이 초점이 같은 분야에 표시된 신경 세포와 다른 NMJs을하는 것도 중요하다 똥R 근육의 지역에서 항체 침투). </li><li> 하나 이상의 사전 터미널 축삭에 분포하는 개인 NMJ (이이 교차로에서 탈 신경과 reinnervation의 가능성이 시도 어느 정도가되었음을 나타냅니다)가있는 경우 각각의 NMJ이 같은 곱셈의 지배를 확인합니다. </li><li> 씬 NMJ 신경 단자와 기본 AChRs 사이의 완전한 중복을 가지고 있지만 얇은 사전 터미널 축삭이있는 경우 신경 지배를 각 NMJ (이 또한 reinnervation에서 탈 신경과 시도의 어떤 수준을 나타낸다) 확인합니다. </li><li> 각 동물에 대한 위의 NMJ 모든 범주에 대한 3 확인 된 지역의 각각에 대해 분석을 실시한다. 같은 실험 그룹에서 다른 동물의 결과와 각 동물의 데이터를 평균. 마우스 헤미 다이어프램에 쥐 헤미 다이어프램 근육과 150 ~ 200에서 약 200 ~ 300 접합 실험 그룹 당 최소 3 (바람직하게는 5 ~ 6 이상) 동물에서 정량화되어야​​한다. </li><li> 고해상도 공 촛점 이미지를 확보, 사용공 초점 현미경으로 게시 D,. </li><li> 20 ~ 40 μm의 깊이 0.3 μm의 스텝 크기에서 Z - 스택을 확보, 전체 시냅스 프로파일이 포함되어 있는지 확인하기 위해 위의 각 접합 아래 추가 광학 섹션을 수집합니다. </li><li> 최대 강도 예측에 Z 시리즈 이미지를 재구성하기 위해 수집 소프트웨어를 사용합니다. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Miller, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Practice+parameter%3A+the+care+of+the+patient+with+amyotrophic+lateral+sclerosis+%28an+evidence-based+review%29%3A+report+of+the+Quality+Standards+Subcommittee+of+the+American+Academy+of+Neurology%3A+ALS+Practice+Parameters+Task+Force%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Practice parameter: the care of the patient with amyotrophic lateral sclerosis (an evidence-based review): report of the Quality Standards Subcommittee of the American Academy of Neurology: ALS Practice Parameters Task Force.</a> Neurology. 52, 1311-1323 (1999).</li>
<li>Sandhu, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory+recovery+following+high+cervical+hemisection%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Physiol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Respiratory recovery following high cervical hemisection.</a> Respir Physiol Neurobiol. 169, 94-101 (2009).</li>
<li>Kaplan, L. M., Hollander, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory+dysfunction+in+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chest+Med%22%5BJournal%5D)">Respiratory dysfunction in amyotrophic lateral sclerosis.</a> Clin Chest Med. 15, 675-681 (1994).</li>
<li>Holtz, A., Levi, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHoltz%2C+A+%22Spinal+Cord+Injury%22">Spinal Cord Injury</a>. , Oxford. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.alibris.com/
 ">http://www.alibris.com/
 </a> (2010).</li>
<li>Bruijn, L. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ALS-linked+SOD1+mutant+G85R+mediates+damage+to+astrocytes+and+promotes+rapidly+progressive+disease+with+SOD1-containing+inclusions%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">ALS-linked SOD1 mutant G85R mediates damage to astrocytes and promotes rapidly progressive disease with SOD1-containing inclusions.</a> Neuron. 18, 327-338 (1997).</li>
<li>Sharma, H., Alilain, W. J., Sahdu, A., Silver, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatments+to+restore+respiratory+function+after+spinal+cord+injury+and+their+implications+for+regeneration%2C+plasticity+and+adaptation%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Treatments to restore respiratory function after spinal cord injury and their implications for regeneration, plasticity and adaptation.</a> Experimental Neurology. 235, 18-25 (2012).</li>
<li>Gourévitch, B., Mellen, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+preB%C3%B6tzinger+complex+as+a+hub+for+network+activity+along+the+ventral+respiratory+column+in+the+neonate+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroimage%22%5BJournal%5D)">The preBötzinger complex as a hub for network activity along the ventral respiratory column in the neonate rat.</a> Neuroimage. 98, 460-474 (2014).</li>
<li>Strakowski, J. A., Pease, W. S., Johnson, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phrenic+nerve+stimulation+in+the+evaluation+of+ventilator-dependent+individuals+with+C4-+and+C5-level+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Phys+Med+Rehabil%22%5BJournal%5D)">Phrenic nerve stimulation in the evaluation of ventilator-dependent individuals with C4- and C5-level spinal cord injury.</a> Am J Phys Med Rehabil. 86, 153-157 (2007).</li>
<li>Wright, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+muscarinic+acetylcholine+receptor+subtypes+contribute+to+stability+and+growth%2C+but+not+compensatory+plasticity%2C+of+neuromuscular+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Distinct muscarinic acetylcholine receptor subtypes contribute to stability and growth, but not compensatory plasticity, of neuromuscular synapses.</a> J Neurosci. 29, 14942-14955 (2009).</li>
<li>Li, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overexpression+of+the+astrocyte+glutamate+transporter+GLT1+exacerbates+phrenic+motor+neuron+degeneration%2C+diaphragm+compromise%2C+and+forelimb+motor+dysfunction+following+cervical+contusion+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Overexpression of the astrocyte glutamate transporter GLT1 exacerbates phrenic motor neuron degeneration, diaphragm compromise, and forelimb motor dysfunction following cervical contusion spinal cord injury.</a> J Neurosci. 34, 7622-7638 (2014).</li>
<li>Nicaise, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+phrenic+motor+neuron+loss+and+transient+respiratory+abnormalities+after+unilateral+cervical+spinal+cord+contusion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Early phrenic motor neuron loss and transient respiratory abnormalities after unilateral cervical spinal cord contusion.</a> Journal of neurotrauma. 30, 1092-1099 (2013).</li>
<li>Nicaise, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phrenic+motor+neuron+degeneration+compromises+phrenic+axonal+circuitry+and+diaphragm+activity+in+a+unilateral+cervical+contusion+model+of+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Phrenic motor neuron degeneration compromises phrenic axonal circuitry and diaphragm activity in a unilateral cervical contusion model of spinal cord injury.</a> Exp Neurol. 235, 539-552 (2012).</li>
<li>Lepore, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+hyperstimulation+alters+site+of+disease+onset+and+course+in+SOD1+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Peripheral hyperstimulation alters site of disease onset and course in SOD1 rats.</a> Neurobiol Dis. 39, 252-264 (2010).</li>
<li>Alilain, W. J., Horn, K. P., Hu, H., Dick, T. E., Silver, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+regeneration+of+respiratory+pathways+after+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Functional regeneration of respiratory pathways after spinal cord injury.</a> Nature. 475, 196-200 (2011).</li>
<li>Zhang, B. M. F., Cummings, K. J., Frappell, P. B., Wilson, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+method+for+conscious+airway+resistance+and+ventilation+estimation+in+neonatal+rodents+using+plethysmography+and+a+mechanical+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Physiol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Novel method for conscious airway resistance and ventilation estimation in neonatal rodents using plethysmography and a mechanical lung.</a> Respir Physiol Neurobiol. 201, 75-83 (2014).</li>
<li>Ngo, S. T., Bellingham, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurophysiological+recording+of+the+compound+muscle+action+potential+for+motor+unit+number+estimation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuromethods%22%5BJournal%5D)">Neurophysiological recording of the compound muscle action potential for motor unit number estimation in mice.</a> Neuromethods. 78, 225-235 (2013).</li>
<li>Nicaise, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Degeneration+of+phrenic+motor+neurons+induces+long-term+diaphragm+deficits+following+mid-cervical+spinal+contusion+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Degeneration of phrenic motor neurons induces long-term diaphragm deficits following mid-cervical spinal contusion in mice.</a> Journal of neurotrauma. 29, 2748-2760 (2012).</li>
<li>Lepore, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+glial-restricted+progenitor+transplantation+into+cervical+spinal+cord+of+the+SOD1G93A+mouse+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Human glial-restricted progenitor transplantation into cervical spinal cord of the SOD1G93A mouse model of ALS.</a> PLoS One. 6, (2011).</li>
<li>Lepore, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focal+transplantation-based+astrocyte+replacement+is+neuroprotective+in+a+model+of+motor+neuron+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Focal transplantation-based astrocyte replacement is neuroprotective in a model of motor neuron disease.</a> Nature neuroscience. 11, 1294-1301 (2008).</li>
</ol>

우리는 공개 할게 없다.

호흡 기능은 호흡 특히 다이어프램 신경 분포를 대상으로 치료법을 개발, 외상 SCI 및 루게릭 병에 모두 손상으로 임상 5,6 적합하다. 종합적 호흡 기능을 연구하기 위하여, 조합 된 접근 방법이 사용되어야한다. CMAPs 외부 횡격막 신경 자극의 방법에 의해 진동판의 기능적 신경 분포의 정도를 측정 할 수 있지만, 내인성 bulbospinal 호흡기 드라이브 8. 또한,이 녹음은, 특히 각각의 모터 축삭과 시냅스 후 아세틸 콜린 수용체의 수준에서, NMJ 형태 학적 변화에서의 검사를 허용하지 않는다. 기재된 염색 프로토콜을 사용하여, 하나는 정량적 이러한 다이어프램 (9)의 개별적인 근육 NMJs에서 완전한 탈 신경 부분 탈 신경 심지어 회생 돋 reinnervation 관련성 학적 표현형을 평가할 수있다. 그럼에도 불구하고, 이러한 두 가지 프로토COLS는 여전히 완벽하게 호흡 병리의 모든 측면을 캡처하지 않습니다...

근 위축성 측삭 경화증 (ALS)은 상하 운동 뉴런 및 그에 근육 마비 양​​자의 손실과 관련된 쇠약 운동 신경 질환이다. 진단시 환자의 생존 기간은 평균 만 2~5년 1에 있습니다. 횡격막 운동 신경 (PhMN) 손실은 루게릭 병의 발병 기전의 중요한 구성 요소입니다. 환자는 궁극적으로 인해 다이어프램의 PhMN의 신경 분포, 영감 2,3의 주요 근육의 손실을 죽는다. 외상성 척수 손상 (SCI)는 또한 관련된 호흡 곤란으로 심각한 문제이다. SCI 약 12,000 새로운 사례 인한 외상성 척수 손상으로 매년 4를 발생한다. 위치, 유형 및 정도에 대한 질병 이질성에도 불구하고, SCI의 대부분의 경우는 종종 쇠약과 지속적인 호흡 타협 결과 자궁 경부 척수에 외상을 포함한다. ALS 및 SCI 이외에, 다른 중추 신경계 (CNS) 질환 w 연관 될 수있다i 번째 횡격막 호흡 부전 (5, 6). 횡격막 신경은 동측 헤미 다이어프램을 innervates 원심성 운동 신경과 그 동측 경부 척수의 C3-C5 수준에있는 PhMN의 세포 기관에서 유래. PhMN 출력 입쪽 복부 호흡 기 (rVRG) 7로 알려진 지역에서 뇌간 bulbospinal 입력 내림차순에 의해 제어된다. rVRG-PhMN 다이어프램 회로 흡기 호흡뿐만 아니라, 다른 비 - 환기 다이어프램 동작의 제어 핵심이다. 이 회로에 영향을 미치는 다양한 외상과 퇴행성 신경 질환은 호흡 기능과 환자의 삶의 질에 심각한 감소로 이어질 수 있습니다. 다이어프램 신경 근육 접합 (NMJ)에서 rVRG, PhMN 생존, 횡격막 신경 무결성 및 적절한 신경 분포에서 PhMNs에 입력을 내림차순 정상 다이어프램 기능에 대한 모든 필요하다. 이 기술을 사용하는 것이 중요하다정량적으로 루게릭 병, SCI 및 기타 중추 신경계 질환의 설치류 모델에서 생체 내에서이 회로를 평가할 수 있습니다. 이 프로토콜에 의해, 목표 및 전기 생리 학적 수준 모두에서 다이어프램 PhMN의 신경 분포를 평가하는 실험 도구를 설명하기위한 것이다. 복합 근 활동 전위 (CMAPs) 지정된 운동 신경의 모든 원심성 운동 신경 축삭을 자극하고 표적 근섬유의 탈분극 유발 된 응답을 분석하여 기록된다. 이 기술은 8 PhMNs 의해 헤미 다이어프램의 기능적 신경 분포를 정량화하는 마취 된 쥐 생체 내에서 사용될 수있다. 인해 CMAPs는이 헤미 진동판 전체, 또한 질병을 추적하기 위해 다이어프램 NMJ에서 개별 모터 축삭 근섬유의 표현형을 확인하는 유용한 모든 (또는 적어도 대부분 / 대부분) 근섬유의 동시 기록을 나타낸다는 사실 - 이러한 부분 및 공단 등 치료 관련 형태 학적 변화테 탈 신경, 재생 돋 reinnervation. 이것은 근육 (9)에 걸쳐 개별적인 NMJs 형태의 상세한 평가를 한 후, 진동판의 전체 실장 면역 조직 화학 (IHC)를 통해 달성 될 수있다. CMAPs를 결합하고 NMJ 분석은 정량적으로 중추 신경계와 말초 신경계 질환의 쥐 모델에서 횡격막 신경 분포를 연구하기위한 강력한 방법을 제공합니다.

<table><tbody><tr><td>파라포름알데히드</td><td>피셔</td><td>T353-500</td><td>탈이온화된 증류수에서 먼저 10% 용액을 만들고, 1x PBS로 4%를 만들고, pH를 7.4로 조정하고, pH를 7.4로 조정</td></tr>하고<tr><td>, pH 7.4</td><td>Invitrogen</td><td>10010049</td><td></td></tr><tr><td>2% 소 혈청 알부민(2% BSA)</td><td>을 Sigma-Aldrich</td><td>A3059-100g</td> 2% BSA/PBS(차단 버퍼)에서 1x PBS 0.2% Triton <td>X100 100ml로 2g BSA를 용해합니다</td></tr><tr><td>.</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T9284-100mL</td><td>용해 0.2 ml/100 ml 2% BSA/PBS</td></tr><tr><td>0.1 M 글리신</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G-7126</td><td>2% BSA/PBS</td></tr> <tr><td>&alpha;-bungarotoxin</td><td>Invitrogen</td><td>T1175</td><td>농도 1:400</td></tr><tr><td>SMI-312</td><td>Sternberger 단클론</td><td>SMI312</td><td>농도 1:1,000</td></tr><tr><td>SV2</td><td>발달 연구 Hybridoma Bank</td><td>SV2-상등액</td><td>농도 1:10</td></tr><tr><td>FITC 염소 안티 마우스 IgG1</td><td>Roche</td><td>3117731001</td><td>농도 1:100</td></tr><tr><td>실리콘 고무</td><td>Sylgard, Dow Corning</td><td>부품 # 184</td><td>키트와 함께 제공되는 지침을 따르십시오 : 필요에 따라 여러 크기의 배양 접시 (30mm, 60mm, 100mm)를 사용할 수 있습니다</td></tr><tr><td></td><td>Vector laboratories</td><td>H-1000</td><td>이것은 딱딱하게 설정된 매체가 아닙니다. 투명 매니큐어로 커버 슬립을 고정해야 합니다.</td></tr><tr><td>작은 봄 가위</td><td>Fine Science Tools</td><td>15002-08</td><td></td></tr><tr><td>해부 겸자</td><td>Fine Science Tools</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>CMAP 기록 용 소프트웨어</td><td>범위 3.5.6; ADI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>디스크 표면 전극</td><td>Natus 신경학</td><td>019-409000</td><td></td></tr><tr><td>피하 바늘 전극</td><td>Natus 신경학</td><td>019-453100</td><td></td></tr><tr><td>전도성 젤</td><td>Aquasonic</td><td>122-73720</td><td></td></tr><tr><td>CMAP 녹음용 자극기/녹음 시스템</td><td>ADI Powerlab 8SP 자극기</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CMAP 녹음</td><td>용 증폭기바이오AMP</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

횡격막 모터 뉴런에 의해 다이어프램 신경 분포의 기능 및 형태 학적 평가

Functional and Morphological Assessment of Diaphragm Innervation by Phrenic Motor Neurons

이 프로토콜은 특히 전기생리학적 수준과 형태학적 수준 모두에서 횡격막의 횡격막 운동 뉴런(PhMN) 신경 분포를 평가하기 위한 도구에 중점을 둡니다. 횡격막 신경 자극 후 CMAP(Compound Muscle Action Potential) 기록은 마취된 쥐와 마우스에서 생체 내에서 경추 척수의 PhMN에 의한 기능적 횡격막 신경 분포를 정량적으로 평가하는 데 사용할 수 있습니다. CMAP은 전체 반횡막의 모든 근섬유의 동시 기록을 나타내기 때문에 횡격막 NMJ에서 개별 운동 축삭돌기 및 근섬유의 표현형을 검사하여 부분 및 완전 탈신경, 재생 발아 및 재신경과 같은 질병 및 치료 관련 형태학적 변화를 추적하는 것도 유용합니다. 이는 횡격막의 전체 장착 면역조직화학(IHC)을 통해 수행할 수 있으며, 이어서 근육 전체의 개별 NMJ에 대한 상세한 형태학적 평가를 수행할 수 있습니다. CMAP과 NMJ 분석을 결합하면 CNS 및 PNS 질환의 설치류 모델에서 횡격막 신경 분포를 정량적으로 연구할 수 있는 강력한 접근 방식을 얻을 수 있습니다.

성인 흰쥐는 C4 척수 수준에서 10 ~ 12 중 하나 후궁 절제술 만 (손상되지 않은 제어) 또는 일방적 인 헤미 타박상 SCI를 받았다. 오주 수술 후에서, 피크 CMAP 진폭은 기록 된 헤미 - 다이어프램 크게 후궁 절제술 전용 제어 (그림 2B)에 비해 SCI 쥐 (그림 2C)에서 감소 후궁 절제술 / 상해 사이트로 동측. 헤미 다이어프램 모든 NMJs 제어 비 환부 야생형 래트 (도 4a, C)에서 완전히 그대로였다. 반대로, SOD1 G93A 래트 (ALS의 설치류 모델) 완전한 탈 신경 (도 4G, 화살촉), 부분 탈 신경 포함 헤미 다이어프램 NMJs (도 4b)에서 현저한 병리학을 보였다 (도 4E, 화살촉도 4G에 NMJ 오른쪽), 여러 신경 분포 (그림 4D)와</strong...

Compound muscle action potential recording은 횡격막 운동 뉴런에 의한 기능적 횡격막 신경 분포를 정량적으로 평가합니다. Whole-mount diaphragm immunohistochemistry는 개별 신경근 접합부에서 형태학적 신경 분포를 평가합니다. 이 프로토콜의 목표는 이 두 가지 강력한 방법론이 척수 질환의 다양한 설치류 모델에서 어떻게 사용될 수 있는지 보여주는 것입니다.

This protocol specifically focuses on tools for assessing phrenic motor neuron (PhMN) innervation of the diaphragm at both the electrophysiological and ...

이 절차의 전반적인 목표는 경수(cervical spinal cord)의 횡격막 운동 뉴런에 의한 횡격막의 기능적 및 형태적 신경 지배를 정량적으로 평가하는 것입니다. 이는 마취된 동물의 동측 횡격막 신경을 최대 초과 자극(supra maximal stimulation)한 후, 반측 횡격막에서 복합 근육 활동 전위(compound muscle action potential) 기록을 수행함으로써 달성됩니다. 다음 단계로는 개별 신경근 접합부(neuromuscular junction)의 신경 지배를 형태학적으로 평가하기 위해 횡격막 전체 마운트 면역 조직 화학 염색(whole mount diaphragm immunohistochemistry)을 실시합니다.결과적으로, 복합 근육 활동 전위와 신경근 접합부 분석을 결합하면 중추신경계(CNS) 및 말초신경계(PNS) 질환의 설치류 모델에서 횡격막 신경 지배를 정량적으로 연구할 수 있는 강력한 접근법을 제공합니다. 이 방법은 치료적 개입을 통해 횡격막 기능을 성공적으로 회복시킬 수 있는가와 같이 척수 손상 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 횡격막 호흡 기능은 외상성 척수 손상 및 ILS와 같은 쇠약성 질환 모두에서 환자의 예후에 핵심적인 역할을 하므로, 본 기술의 함의는 이러한 질환의 치료로까지 확장됩니다. 시연에는 제 실험실의 박사후 연구원인 Dr. Kali, Dr. Wright 실험실의 학부생인 Melanie Martin, 그리고 제 실험실의 연구 기술자인 Tamara Holla가 참여합니다.동물을 마취시킨 후, 수술대 위에 등 쪽이 아래로 가도록 놓은 다음 전지를 수술대에 고정합니다. 그런 다음 정중선 양쪽으로 두개골 기저부부터 복부 방향으로 복면을 제모합니다. 피부를 세척한 후, 전극을 배치하고 접지 전극은 꼬리에 연결하며 기준 전극은 반대측 하복부 피하에 삽입합니다.기록 전극의 자가 접착 부위에 전도성 젤을 도포하여 준비한 후, 편측 늑골 가장자리를 따라 부착합니다. 이제 경피성 자극 전극을 기관 외측 및 쇄골 상단에 0.5 cm 간격으로 배치합니다. 전극은 피부와 수직으로 삽입하여 약 1 cm 깊이까지 들어가게 합니다.이 전극들은 단단히 고정되어야 하며, 손으로 직접 고정하는 것이 가장 좋습니다. 모든 전극을 각각의 적절한 자극기와 증폭기에 연결하십시오. 수집된 데이터는 컴퓨터에 기록되어야 합니다.분석을 위해 단일 극 자극의 자극 파라미터를 0.5 milliseconds, 1 hertz의 초최대 자극 펄스로 설정하십시오. 진폭은 6~8 volts 범위로 설정할 수 있습니다. 자극 시간을 30 seconds로 설정하고, 원하는 경우 약 일주일에 한 번씩 각 동물로부터 기록한 기선-피크 진폭(baseline to peak amplitude)을 사용하여 10회 연속 자극의 반응을 평균하십시오.동물 취급 방법은 텍스트 프로토콜에 상세히 기술되어 있습니다. 주입용 마취제를 과량 투여하여 동물을 안락사시킨 후, 메스나 가위를 사용하여 개복술을 실시합니다. 검상돌기부터 중앙선을 따라 조심스럽게 절개합니다.그런 다음 메스와 핀셋을 사용하여 피부와 결합 조직을 근육층에서 조심스럽게 분리합니다. 검상돌기를 위로 당기고 주변 뼈로부터 횡격막을 절제하여 제거합니다. 이때 횡격막 근육이 손상되지 않도록 주의하십시오.실체 현미경 하에서 횡격막의 상면이 위로 오도록 PBS에 4% paraform aldehyde가 포함된 실리콘 라인 접시에 옮깁니다. 횡격막 주변의 조직을 핀으로 고정하여 횡격막을 팽팽하게 폅니다. 그 다음 핀셋과 가위를 사용하여 상면의 결합 조직을 제거합니다.고정액이 20분 동안 작용하도록 둔 다음, PBS로 10분씩 3회 세척하여 제거합니다. 다음으로, PBS에 2% BSA가 포함된 0.1 molar glycine을 30분 동안 처리합니다. 그 후, 횡격막을 rod Domine 접합 alpha bungalow toin 용액에 넣고 15분 동안 배양합니다.고정액 때와 마찬가지로 PBS를 사용하여 bungalow toxin을 씻어냅니다. 다음으로, 배스를 차가운 methanol로 교체하고 -20 °C에서 5분 동안 조직을 냉각시킵니다. 5분 후 즉시 methanol을 제거하고 이전과 같이 PBS로 조직을 세척합니다.이제 0.2% TBP 용액을 사용하여 1시간 동안 블로킹을 수행합니다. 용액을 0.2% TBP에 희석한 1차 항체로 교체하고, 조직을 4°C에서 완만하게 교반하며 하룻밤 동안 배양합니다. 다음 날, 0.2% TBP로 10분씩 3회 세척하여 1차 항체를 제거한 후, 2차 항체 용액에서 1시간 동안 흔들어주며 암소 배양합니다. 이후 PBS로 3회 세척하여 2차 항체를 제거하고 조직을 암소에 보관합니다.그런 다음 실체 현미경 하에서 근육의 상단 표면에 있는 결합 조직을 추가로 제거합니다. 세척이 완료되면 조직을 고정하고 정립 에피 형광 현미경으로 촬영하여 염색된 횡격막 반쪽의 형태를 정량적으로 분석합니다. 횡격막을 전체 마운트로 분석하므로 20배 및 40배 배율을 사용하십시오.형광 염색의 대부분이 초점에서 벗어나 있습니다. 일반적인 현미경을 사용할 때는 실시간으로 분석을 진행하는 것이 가장 좋습니다. 개별 NMjs의 형태학적 점수를 적절히 매기기 위해, 척수의 지형학적 신경 분포 패턴을 기반으로 근육을 세 개의 구역으로 나누어 분석하십시오.가장 복측 부위부터 시작하여, 근섬유를 따라 관찰되는 모든 신경근接合部(NMJ)를 분석하십시오. 항체의 침투가 완전하지 않으므로 표면에서 처음 3~4개의 섬유보다 더 깊은 곳은 분석하지 마십시오. 온전한 NMJ는 굵은 말단 전 축삭을 가지며, 신경 말단의 모든 영역이 하부 근육의 아세틸콜린 수용체와 완전히 겹칩니다. 부분적으로 탈신경화된 NMJ는 하부 아세틸콜린 수용체의 일부 영역이 비어 있게 됩니다.완전히 탈신경된 NMJ는 신경 말단의 아세틸콜린 수용체와 일치하는 양상을 보이지 않을 것입니다. 해당 영역의 다른 NMJ들은 다른 형태를 보여야 하며, 만약 하나 이상의 말단 전 축삭이 하나의 NMJ를 지배하고 있다면 항체 침투의 성공 여부가 불확실해질 것입니다. 해당 NMJ는 다중 지배 상태입니다.본 사례에서는 신경 분포가 제거된 후 다시 신경이 분포되는 재신경지배가 일어났을 가능성이 있습니다. 신경 말단이 하부의 아세틸콜린 수용체와 겹쳐 있고 말단 전 축삭이 매우 가늘다면, 이는 신경근접합부(NMJ)에 신경 분포가 희박함을 의미합니다. 이는 또한 재신경지배의 징후이기도 합니다.성체 Sprague-Dawley 쥐를 이용한 실험에서, 대조군은 척추궁절제술(laminectomy)을 받았고, 다른 그룹은 일측성 반부분 타격 척수손상(hemi contusion SCI)을 유도하였다. 4.5주 후, 척추궁절제술 또는 손상 부위의 동측 횡격막에서 최대 복합근활동전위(cmap) 진폭을 기록하였다.변이된 인간 SOD1 단백질을 발현하여 LS 모델로 사용한 쥐를 대상으로 한 별도의 실험에서, SCI 쥐의 수치는 척추박리술만 시행한 대조군 쥐에 비해 유의미하게 감소했습니다. 야생형 대조군 동물의 반횡격막 내 NMJ 형태는 완전히 온전했습니다. 하지만 형질전환 쥐의 NMJ에서는 심각한 병변이 나타났습니다. 일부에서는 화살표로 표시된 완전한 탈신경 증상이 관찰되었습니다.화살표로 표시된 바와 같이 다른 신경절(nj)들은 부분적으로 탈신경되었으며, 오른쪽의 신경근접합부(NMJ)에서 볼 수 있듯이 일부 신경절들은 다중 신경 지배를 받았고, 또 다른 신경절들은 여기 화살표로 표시된 것과 같이 얇은 말단 전축삭을 가지고 있었습니다. 이 영상을 시청하신 후에는 횡격막 신경 운동 뉴런에 의한 횡격막의 기능적 및 형태적 신경 지배를 정량적으로 평가하는 방법에 대해 충분히 이해하셨을 것입니다. 시청해 주셔서 감사하며, 모든 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.

functional-morphological-assessment-diaphragm-innervation-phrenic

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

이 비디오는 횡격막 신경 자극을 통해 쥐의 횡격막 근육 섬유에 복합 근육 활동 전위(CMAP)를 기록하는 방법을 설명합니다. 횡격막 신경의 고강도 전기 펄스 자극은 횡격막 근육 섬유에 활동 전위를 생성하며, 이는 반응 곡선을 얻어 관찰됩니다.

쥐의 횡격장 신경을 자극하여 복합 근육 활동 전위를 측정합니다.

신경 근육 학 교차로 (NMJ)의 기능 평가 근육과 신경 사이 통신에 필수 정보를 제공할 수 있습니다. 여기는 포괄적으로 두 개의 서로 다른 근육-신경 준비, 즉 soleus 좌 골 인할지 다이어 프 램을 사용 하 여 NMJ 및 근육 기능을 평가 하는 프로토콜에 설명 합니다.

신경 근육 학 교차로 기능을 측정

여기, 우리 intrapleural 배달 fluorophore의 활용 콜레라 독 소 단위 베타 후 쥐에서 인할지 모터 뉴런 식별 프로토콜을 설명 합니다. 흉 막 캐비티 삽입 하 두 기술을 비교: transthoracic 접근 대 transdiaphragmatic.

마우스에 인할지 모터 신경의 퇴행 성 신경 해부학 추적

본 연구에서는 랫트 다이어프램 모터 유닛 연결성을 정량화하기 위해 모터 유닛 수와 크기를 추정하는 in vivo 방법을 제시합니다. 이러한 기술에 대한 단계별 접근 방식에 대해 설명합니다.

Assessing Rat Diaphragm Motor Unit Connectivity Outcome Measures: as Quantitative Biomarkers of Phrenic Motor Neuron Degeneration and Compensation(쥐 다이어프램 운동 단위 연결성 결과 측정, 골격막 운동 뉴런 퇴행 및 보상의 정량적 바이오마커로서의 측정)

호흡기 합병증은 경추 척수 손상(cSCI)이 있는 개인의 주요 사망 원인입니다. cSCI의 동물 모델은 기계론적 평가 및 전임상 연구에 필수적입니다. 여기에서는 쥐에서 편측 C2 척추 반절 (C2SH) 후 횡격막 근육 (DIAm) 활동의 기능적 회복을 평가하는 재현 가능한 방법을 소개합니다.

쥐에서 편측 경추 척수 반절개 후 완충 횡격막 활동의 기능적 회복 평가

현장 진료 초음파(POCUS)는 휴대성, 비침습성 및 실시간 이미징 기능으로 인해 횡격막 기능 장애를 선별하는 데 필수적인 기술입니다. 현재 다이어프램 POCUS 프로토콜이 존재하지만 운영자 간 신뢰성이 낮고 합의 지침이 부족합니다. 여기에서는 재현 가능하고 간단하게 수행할 수 있는 기술에 대해 설명합니다.

성인의 횡격막 초음파: 이미지 획득 및 해석

미세 모터 조정에 적자가 균형 빔 테스트와 평가를하실 수 있습니다. 빔의 성능은 광선이 통과하는 속도와 마우스이 빔을에 미끄러져 횟수에 의해 계량입니다.

마우스에 모터 밸런스 조정의 평가는 밸런스 빔을 사용하여

기술은 운동하는 동안 포유류의 뉴런의 생체내 생리적 반응을 수량과의 연결 형태, neurochemical 표현형 및 시냅스 microcircuitry와 신경 세포의 생리 신원을 확인하도록 설명되어 있습니다.

운동에 의해 변조된 뉴런의 생리, 형태학의 및 Neurochemical 특성화

Extracellularly의 근육 모터 풀에 모터 뉴런을 확인<em&gt; Aplysia californica</em

이 원고는 정상 마우스에서 리본 시냅스의 형태학적 특성 및 기능 상태를 평가하기 위한 실험 프로토콜을 설명합니다. 본 모델은 또한 소음 유발 및 노화 관련 달팽이관 시냅토병 제한 모델에 적합합니다. 이전 마우스 연구의 상관 결과 또한 논의.

마우스 달팽이관의 특정 주파수 영역에서 리본 시냅스의 형태학적 및 기능적 평가

학습하세요 횡격막 모터 뉴런에 의한 다이어프램 신경 분포의 기능 및 형태학적 평가 방법을. 복합 근육 활동 전위 기록과 전체 장착 면역조직화학을 활용하여 쥐 모델에서 호흡 기능 회복 연구에 활용할 수 있습니다.

횡격막 모터 뉴런에 의해 다이어프램 신경 분포의 기능 및 형태 학적 평가

더 많은 동영상 탐색