Name: (A)의 안전주의 사항 및 운영 절차 BSL-4 실험실 4. 의료 영상 절차 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-03T11:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 36 s
Description: 학습하세요 BSL-4 실험실에서 기니피그를 이용한 안전한 의료 영상 촬영 절차와 비침습적 질병 진행 평가 방법. 이 기술은 치료제 및 백신 개발 연구에 필수적인 바이오마커 식별에 활용됩니다.

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이 출판물의 내용이 미국 보건복지부(DHHS) 또는 저자와 제휴한 기관 및 회사의 견해나 정책을 반드시 반영하는 것은 아닙니다. 이 작업은 Battelle Memorial Institute와 미국 국립 알레르기 및 전염병 연구소(NIAID)의 주요 계약을 통해 부분적으로 자금을 지원받았습니다. HHSN272200700016I. M.R.H., K.J., D.P., L.B. 및 J.W.는 Battelle Memorial Institute의 직원으로 이 작업을 수행했습니다. 이 작업을 수행한 Battelle Memorial Institute의 하청업체는 다음과 같습니다: R.B., Charles River Laboratories - Insourcing Solutions의 직원; L.K. 및 M.R.L., MEDRelief Staffing Inc.의 직원; Lovelace Respiratory Research Institute, Inc.의 직원으로서의 MGL; J.H.K.는 Tunnell Government Services, Inc.의 직원입니다.

이 프로토콜은 다음과 동물 보호 지침을 준수합니다. 동물 평가 및 실험 동물 관리 국제 인증 협회의 인증을 받았으며 시설에 수용되었다. 모든 실험 절차는 알레르기 및 전염병 국립 연구소, 임상 연구 부문, 동물 관리 및 사용위원회의 승인 및 동물 복지법 규정, 공공 보건 서비스 정책을 준수이었고, 관리 및 사용에 대한 가이드되었다 실험 동물 추천. 1. ( &quot;콜드 사이드&quot;에) CT 스캐너를 준비 <ol><li> X 선관을 컨디셔닝 <ol><li> 어떤 직원이 스캔 방에없고 주제 테이블이 비어 있는지 확인합니다. </li><li> 스캐너 제조업 자의 사양에 따라 튜브 컨디셔닝 절차를 실행. </li></ol></li><li> 에어 교정을 수행 <ol><li> 어떤 물체가 검색 필드에 없는지 확인합니다. </li&gt; <li> 스캐너 제조업 자의 사양에 따라 공기 교정 절차를 수행한다. 많은 플랫폼에서이 교정은 자동 또는 반자동이다. </li></ol></li><li> ( &quot;핫 사이드&quot;에) 품질 관리 검사를 수행 <ol><li> 추가 단계를 추가하여 (참고 5에서 자세히 설명)을 ABSL-4 정장 실험실 항목의 절차를 완료합니다. 절차는 방사성 물질에 대한 노출을 포함하는 경우, 보호 복하에 수술에 선량계 클립. 방사선 노출의 계산을 위해 매 2 개월 선량계에 돌립니다. </li><li> 스캔 테이블에 적절한 홀더, 공기, 물, 테플론으로 만들어진 된 CT의 머리와 몸 팬텀을 놓습니다. </li></ol></li><li> ( &quot;콜드 사이드&quot;에) 품질 관리 검사를 수행 <ol><li> 추위 측면에서, 보어 (6)의 중앙에 팬텀을 진행합니다. </li><li> ENS에 실험실 표준화 품질 관리 (QC) 파라미터를 이용하여 스캔을 취득URE 스캐너 제조업체의 사양에 있습니다. </li><li> 제조 업체의 프로토콜에 따라 각각의 재료 종류 (공기, 물 또는 테프론) 위에 중심이자 지역 내에서 신호 강도의 평균과 표준 편차를 계산하는 이미지의 QC 컴퓨터 분석을 수행합니다. </li><li> 중부 표준시 스캐너를 사용할 준비가되었음을 CM 직원에게 통지합니다. </li><li> 형상 관리 직원과 동물 정보 (식별 번호, 중량, 생년월일)를 확인합니다. </li></ol></li><li> 환자 데이터베이스에 주제 정보를 등록합니다. <ol><li> (이하 &quot;콜드 측&quot;에서) CT 스캐너 콘솔에서 스캐너의 방사선 정보 시스템 (RIS)를 액세스 할 수 있습니다. 를 RIS는 스캔 일정의 세부 사항으로 채워되어 있는지 확인합니다. </li><li> 현재의 제목과 같은 식별 번호, 나이, 생년월일, 및 시험 날짜와 인구 통계를 선택합니다; 다음, 시험 유형이 자동으로 채울한다. </li><li> 수동으로 대상 무게를 입력합니다. </li><li> 올바른셔서 선택(예를 들어, 첫번째 머리, 첫 발, 경향, 부정사) CT 갠트리에 bject 방향입니다. </li></ol></li></ol> 2. ABSL-4 소송 실험실에서 작업 영역을 준비 <ol><li> 동물 절차 룸에서 클래스 II 바이오 안전성 캐비닛 (BSC) 또는 하향 통풍 표를 준비합니다. BSC (또는 하향 통풍 표)를 켜고 최소 10 사용하는 분은 이전. <ol><li> 깨끗하고 승인 살균제와 같은 5 % 이중 급 암모늄하여 BSC 또는 하강 기류 테이블의 상부면의 내부 표면 소독 (알킬 N-N-알킬 디메틸 벤질 암모늄 클로라이드, 디메틸 에틸 벤질 암모늄 클로라이드) 소독액. BSC에 또는 하강 기류 테이블의 상부면의 내부 표면 스프레이 및 접촉 시간의 10 분 후 건조 표면을 닦으십시오. 스프레이 잔류 소독제를 제거하기 위해 70 %의 에탄올로 표면을 닦아주십시오. </li><li> 장소 장비 및 마취 유도 상자와 동물 취급 장갑을 포함하여 BSC 또는 하강 기류 표에 필요한 공급. </li></<html> 올&gt; </li><li> 중부 표준시 스캐너 침대를 준비합니다. <ol><li> 설정 동물 유지 장치를 CT 침대에. </li><li> 셋업 생체 징후 심박수, 산소 포화도를 검출하기 위해 모니터링한다. 스캐닝 세션 이상 10 분, 온도 모니터링 경우. </li></ol></li><li> 마취 기계를 준비합니다. <ol><li> 기화기의 이소 플루 란 볼륨을 확인하고 필요한 경우보다 이소 플루 란을 추가합니다. </li><li> , 산소와 마취 호흡 회로를 가압 탈출 가스 검사, 시각적으로 누출 1 마취 기계를 검사하여 누설 테스트를 수행합니다. <ol><li> 누출이 검출되면, 소스를 결정하는 문제를 해결하고, 적절하게 구현 된 보정을 검증하는 후속 누설 테스트를 수행한다. </li></ol></li><li> 폐기물 마취 가스를 캡처 일회용 청소 용기의 무게를. 캐니스터는 캐니스터의 초기 무게 이상 ≥50 g의 경우, 용기 (7)를 교체합니다. </li></ol></li></ol>&quot;(핫 측&quot;제목에) CT 스캐너 룸에서 동물 절차 룸과 마취 유도의 제조에서&gt; 3. 동물 운송 &quot; <ol><li> 클래스 II BSC에 이미징 스위트 룸에 인접한 설치류를 들고 방 중 하나에서 케이지 주택 기니 돼지를 전송합니다. <ol><li> 동물의 ID를 확인합니다. </li><li> 케이지 카드를 제거하고 동물로 유지. </li></ol></li><li> 케이지에 뚜껑을 열고 양압 정장 장갑을 통해 동물 보호 가죽 장갑을 돈. 부드럽게, 기니피그를 선택 마취 유도 상자에 동물을 배치하고 뚜껑 상자를 커버한다. </li><li> 클래스 II BSC에서 동물을 포함하는 마취 유도 상자를 제거하고 수송 카트에 놓습니다. </li><li> 카트를 사용하여 CT 스캐너 방 동물을. </li><li> 중부 표준시 스캐너 룸에서 즉시 유도 상자에 청소 용기와 마취 기계를 연결합니다. 유도 상자에 산소 가스를 켜고 납품에 기화기를 설정마취 8의 초기 유도 어 4 % 이소 플루 란. </li><li> 마취의 적절한 깊이 마취 유도시 동물을 모니터링 (예를 들어, 외부 자극, 근육 톤, 안정된 호흡과 심장 박동에 응답하지) 8. </li><li> 기니 돼지가 완전히 마취시 유도 상자에 마취를 끕니다. </li></ol> 4. ( &quot;핫 측&quot;에서) CT 스캐너의 이미징 침대에 주제를 정렬 <ol><li> 인덕션 박스에서 마취 기니 돼지를 제거하고 이미징 침대에 놓습니다. <ol><li> 경향이 위치에 유지 쿠션에 기니 돼지를 놓습니다. </li><li> 건조에서 각막 상피를 보호하기 위해 두 눈 안과 연고를 적용합니다. </li></ol></li><li> 유지 보수 아이소 플루 란 마취를 관리 할 수 ​​있습니다. <ol><li> 기니 돼지 코 콘을 놓고 코 콘 8 일 L / 산소 분을 제공하기 위해 가스를 켜십시오. </li><li> 2 ~ 3 %에 전달하기 위해 기화기를 설정노즈 콘 통해 기니피그에 이소 플루 란. </li><li> 피사체가 마취의 원하는 평면 (아무 운동, ~ 분당 60 숨을)에 도달하면, 마취의 유지 보수를 위해 이소 플루 란의 1.0-1.5 %를 제공하기 위해 설정 기화기을 줄일 수 있습니다. </li><li> 체온, 심박수 및 호흡 수를 포함한 생체 신호를 모니터링한다. 호흡은 각각 9, 이소 플루 란의 비율을 가속 또는 감속, 증가 또는 감소하기 시작합니다. </li></ol></li><li> C가, 필요한 경우, 데이터 수집 및 마취 깊이의 예상되는 길이에 따라이 8,9 유지 ° 37 내지 39 기니피그 체온을 유지하기 위해 별도의 열원을 제공한다. </li><li> 유지 쿠션의 맨 위에 플라스틱 덮개를 고정합니다. </li><li> 수용 튜브에 영상 침대를 진행합니다. </li></ol> 5.보기의 이미지 필드 설정 <ol><li> 중부 표준시 (SC)의 &quot;콜드 측&quot;에 레이저 시스템 (이미징 직원) 활성화anner 객실은 CT 스캔의 기니피그를 배치합니다. 레이저 십자선에서 관심의 해부학을 커버하고 &quot;아웃&quot;버튼 &quot;에서&quot;테이블을 사용합니다. </li><li> 시야를 설정하기 위해, 관심의 해부학 위에 시작점을 설정하는 레이저 버튼을 사용한다. </li><li> &quot;뜨거운 쪽&quot;에 연락 CM 직원은 자신과 CT 스캐너 사이의 리드 방패를 배치합니다. </li></ol> 6. 획득 이미지 <ol><li> 제조 업체의 프로토콜에 따라 CT 연구 이미지 슬라이스 배치를위한 설문 조사 스캔을 획득. </li><li> 설문 조사 이미지에 CT 연구 이미지 조각의 위치를 ​​규정. </li><li> 대조적 주입 사용될 경우 &quot;고온 측&quot;직원과 업무. </li><li> 제조 업체의 프로토콜에 따라 연구 스캔을 획득. </li><li> 제조사의 프로토콜에 따라 스캐너 콘솔 CT 영상을 재구성. </li><li> 사진 보관 및 통신 시스템에 이미지를 전송합니다. 더 질적 ...로서를 수행ntitative 제조 업체의 프로토콜에 따라이 보관 시스템에서 분석합니다. </li></ol> 7. 스캔 후 복구 <ol><li> 음식과 간식 깨끗한 microisolator 케이지에 스캐너 침대에서 기니피그를 전송합니다. </li><li> 카트를 사용하여, 다시 주택 지역에 동물 새장을 운반 할 것. </li><li> 완전히 마취에서 회복 될 때까지 동물을 모니터링합니다. </li><li> 완전히 회수되면, 고효율 입자상 공기 (HEPA)에 케이지 복귀 통풍 선반 -filtered. </li></ol> 스캐너 베이 및 장비 8. 소독 <ol><li> 스캐너 Bay 지역 소독 (예를 들어, 동물, 스캐너 베드 스캐너 실내 바닥, 도어 핸들과 직접 접촉했다 표면)에서 10 분의 접촉 시간 동안 5 %의 이중 급 암모늄 용액. </li><li> 린스 이중 급 암모늄 용액에 10 분 노출 후 70 % 에탄올 용액으로 표면. </li><li> 직접 분사 할 수없는 항목을 닦아에탄올 포화 된 천을이어서 이중 급 암모늄 포화 천 이중 급 암모늄 용액 (민감한 전자 장비)과. </li></ol>

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이 시리즈의 이전 기사 세부 사항, 안전 절차 및 최대 봉쇄 실험실 12, 13에서 안전하게 작업하는 데 필요한 추가 공학적 관리에 대한 광범위한 교육,주의를 강조했다. 안전하게 작업을 수행하면이 실험실에서 가장 높은 우선 순위입니다. 감염된 동물에 물린 또는 상처를 입힐 또는 에어로졸 (7)을 생성하는이 철학 때문에 이러한 가능성 등의 추가 위험에 더욱 살아있는 동물과 함께 작업 할 때 중요합니다. 이 절차는 영상 객실에 유지 방에서 동물의 안전한 취급 및 운송을 강조한다. 마취 동안 동물 조작 및 모니터링는 ABSL-4 실험실에서 작업하는 동안 필요한 세부 사항과 안전을 고려 시청자에게 관심의 사실적인 묘사를 제공하는 입증된다. 우리는 기니피그의 CT 스캔을 사용하여 ABSL-4 실험실에서 비 침습적 의료 이미징을 수행하는 프로토콜을 설명예로서. 몇 가지 단계는 BSL-4 실험실에서 성공적으로 이미지에 매우 중요합니다. 첫 번째 중요...

국립 알레르기 전염병 연구소 (NIAID) 프레드릭 MD (IRF-프레드릭)에서 포트 데 트릭에서 통합 연구 시설의 임무는의 정도와 상관 관계 임상 질병 과정을 이해하는 전염병 연구 신흥 수행하는 미생물에 의한 질병. IRF-프레드릭은 ABSL-4 실험 1에서 높은 결과 병원균의 동물 모델에서 의료 영상을 수행 할 수있는 독특한 기능이 있습니다. 연구자가 사용할 수있는 이미징을 포함 : 컴퓨터 단층 촬영 (CT), 자기 공명 영상 (MRI), 양전자 방출 단층 촬영 (PET), 단일 광자 단층 촬영 (SPECT), 초음파, X 선 및 형광 투시. 연구진은 종 연구에서, 이러한 약물 치료 및 예방 접종 등의 개입의 효과를 질병의 진행을 모니터링하고 평가하는 데 사용할 수 이미징 기능을 사용합니다. IRF-프레드릭의 영상 방식은 구체적이었다높은 억제 2,3- 외부 장비의 핵심 구성 요소를 유지하도록 설계 및 유지 보수를위한 접근. 이 디자인은 &quot;핫&quot;(포함 병원체)과에 촬영 슈트 분리 &quot;차가운면을.&quot; 이러한 분리를 달성하기 위해 특별히 설계된 튜브는 각각의 영상 기법 (도 1)의 구멍으로 높은 수납 공간을 확장하도록 구성 하였다. 생물학적 봉쇄를 제공 할뿐만 아니라,이 튜브는 높은 봉쇄 실험실의 오염을 제거하는 데 사용되는 가스 및 화학 물질 촬영 장비를 보호한다. 비교 의학 (CM) 직원 손잡이가 &quot;뜨거운 쪽&quot;에 동물을 모니터링하면서 이미징 과학자와 기술자는 &quot;콜드 측&quot;에서 스캐너를 운영하고 있습니다. 형상 관리 직원이 실험을 조정 이미징 과학자들과 긴밀하게 협력해야하기 때문에, 이러한 분리는 통신 문제가 발생할 수 있습니다. 옵션을 사용할 수 평가 한 후, CM 직원은 밖으로 있었다외부 봉쇄 촬상 직원 전화를 사용하는 휴대폰을 단파장 초고 주파수의 전파를 송신 블루투스 이어 피스 장착. 때문에 설비의 설계, 무선 액세스 포인트는 &quot;핫&quot;사이 시멘트 강 층과 &quot;저온 측&quot;에 의한 신호 간섭을 극복하기 위해 각 객실에 설치되어야했다. 따라서, 높은 봉쇄 외부 소음 양압 정장 및 이미징 직원을 입고 CM 직원 사이의 통신은 이제 신뢰할 수있다. 카메라는 또한 &quot;뜨거운 쪽&quot;의 활동을보고 직원 이미징 이미징 객실의 뜨거운 측면에 설치되어 있습니다. 카메라로, 영상 직원은 동물의 위치 또는 이미징 프로토콜에 대한 마지막 순간의 변화와 CM 기술자를 안내 할 수 있습니다. IRF-프레드릭 ABSL-4 정장 실험실에서 모든 작업 정장 (4)를 캡슐화 긍정적 인 압력을 착용하는 직원을 필요로한다. 이 정장을 입고 이동성을 감소시키고, 무거운 말X 장갑 소송에 부착 플러스 장갑의 최대 세 개의 추가 레이어 손재주를 타협. 결과는 절차를 완료하는 데 시간이 더 걸릴 미세 운동 기술이 필요한 작업이 훨씬 더 어려운 것입니다. 바이오 안전성 레벨이 증가, 동물 취급 및 조작으로 더 도전적이고 시간이 특히 작은 동물로,이 소요된다. ABSL-4 실험실에서 절차는 ABSL-2 실험실보다 2 ~ 3 배의 시간이 걸릴 수 있습니다. 시각적으로 예로서 기니 돼지 CT 스캔 절차를 사용하여 ABSL-4 환경에서 이미징 동물 모델과 관련된 문제를 설명하기 위해이 문서의 목적이다.

<table><tbody><tr><td>Micro-Chem Plus</td><td>National Chemical Laboratories</td><td>255</td><td></td></tr><tr><td>CT 스캐너</td><td>Philips Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CT 팬텀</td><td>Philips Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isovue-300 (CT 조영제 시약)</td><td>Bracco Diagnostics</td><td>NDC 0270-1315-30</td><td></td></tr><tr><td>환기 랙</td><td>실험실 제품</td><td></td><td></td></tr><tr><td>마이크로 아이솔레이터 케이지</td><td>실험실 제품</td><td></td><td></td></tr><tr><td>생물 안전 캐비닛</td><td>Nuaire</td><td></td><td></td></tr><tr><td>마취 기계</td><td>SurgiVet</td><td>WWV9000</td><td></td></tr><tr><td>마취 유도 상자</td><td>VetEquip</td><td></td><td></td></tr><tr><td>마취 마스크</td><td>Henry Schein</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Henry Schein</td><td></td><td></td></tr><tr><td>폐가스 청소 용기</td><td>Fisher</td><td>F/AIR</td><td></td></tr><tr><td>홀딩 쿠션</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>안과 연고</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>바이탈 사인 모니터</td><td>Bionet</td><td>BM3Vet</td><td></td></tr><tr><td>휴대폰</td><td>Spectralink</td><td>8440</td><td></td></tr><tr><td>블루투스 이어피스</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>무선 액세스 포인트</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sperian 양압 슈트</td><td>Honeywell Safety Products</td><td>BSL 4-2</td><td></td></tr><tr><td>외부 슈트 장갑 (라텍스, Ansell 통조림 및 핸들러)</td><td>Fisher</td><td>19-019-601</td><td></td></tr><tr><td>외부 슈트 장갑 (니트릴 / 고무, MAPA)</td><td>Fisher</td><td>2MYU1</td><td></td></tr><tr><td>스크럽</td><td>Cintas</td><td>60975/60976</td><td></td></tr><tr><td>양말</td><td>Cintas</td><td>944</td><td></td></tr><tr><td>덕트 테이프</td><td>Pack-N-Tape</td><td></td><td></td>51131069695</tr><tr><td>타월</td><td>Cintas</td><td>2720</td><td></td></tr><tr><td>지퍼 루브</td><td>아마존</td><td>B000GKBEJA</td><td></td></tr></tbody></table>

(a)의 안전주의 사항 및 운영 절차 bsl-4 실험실 4. 의료 영상 절차

Safety Precautions and Operating Procedures in an (A)BSL-4 Laboratory: 4. Medical Imaging Procedures

인간 질병에 대한 동물 모델을 사용한 의료 영상은 수십 년 동안 활용되어 왔지만, 최근까지 결과가 큰 병원체에 의해 유발된 질병에 대한 의료 영상은 불가능했습니다. 2014년, 미국 국립보건원(National Institutes of Health), 미국 국립 알레르기 및 전염병 연구소(National Institute of Allergy and Infectious Diseases), 포트 데트릭(Fort Detrick)의 통합 연구 시설(Integrated Research Facility)은 실험적으로 감염된 동물의 감염병의 임상 경과 및 병리학을 평가하기 위해 동물 생물안전 레벨 4(ABSL-4) 시설을 개설했습니다. 컴퓨터 단층 촬영(CT), 자기 공명 영상, 양전자 방출 단층 촬영 및 단일 광자 방출 컴퓨터 단층 촬영을 포함한 여러 이미징 방식을 연구자들은 이러한 평가를 위해 사용할 수 있습니다. 이 기사의 초점은 ABSL-4 시설에서 살아있는 기니피그의 CT 이미지를 안전하게 얻기 위한 워크플로우를 설명하는 것입니다. 이러한 절차에는 동물 취급, 마취, 진정제에서 회복될 때까지 동물을 준비하고 모니터링하는 것이 포함됩니다. 또한 이미징 장비 준비, 품질 검사 수행, "핫 사이드"(병원균 포함)에서 "콜드 사이드"로의 통신 방법, 동물을 보관실에서 이미징 스위트로 옮기는 방법에 대해서도 설명합니다.

동물 취급에 대한 모든 안전 절차 및 표준 운영 절차에 대한 엄격한 준수는 ABSL-4 실험실에서 안전하게 작업을 위해 필수적이다. 촬상 스위트 동물 절차 방에서 유도 박스 내에서 감염된 동물을 전송하는 공통 통로의 오염의 위험을 최소화한다. 절차는 필요에 따라, 더 실험실 획득 감염이나 동물 과목의 교차 오염은 IRF-프레드릭에 ABSL-4 연구를 수행하는 동안 기록되지 않았다. ABSL -4- 바이러스 병원체 관련 폐 병변 10,11을 유도 할 수 있고, CT 감염의 동물 모델에서 질병의 진행을 모니터하기위한 유용한 도구이다. CT 이미지는 조직으로 엑스레이 방사선의 흡수로부터 생성되고, 촬상 실험이 필요 마취 량을 최소화 비교적 신속하게 수행 될 수있다. CT에서, 큰 densi개체의 타이는 뼈로, 이미징, 밝은 물체 (...

여기에서는 동물 생물 안전성 4등급 실험실에서 의료 영상 촬영을 안전하게 수행하는 데 필요한 준비 및 동물 취급 절차에 대한 개요를 제공합니다. 모의 감염 기니피그의 컴퓨터 단층 촬영은 결과가 높은 병원체로 인한 질병을 평가하는 데 사용할 수 있는 이러한 절차를 보여줍니다.

(A)의 안전주의 사항 및 운영 절차 BSL-4 실험실 4. 의료 영상 절차

Medical imaging using animal models for human diseases has been utilized for decades; however, until recently, medical imaging of diseases induced by ...

본 영상 촬영 절차의 전반적인 목표는 동물 생물안전 4등급(BSL-4) 시설에서 동물의 의료 영상을 촬영하는 데 필요한 안전 절차를 시연하는 것입니다. 동물 생물안전 4등급 환경에서의 영상 촬영을 통해 질병의 진행 상황을 비침습적으로 평가하고, 잠재적인 치료제 및 백신 평가에 도움이 되는 바이오마커를 식별합니다. 영상 촬영실은 핫존(hot side)과 콜드존(cold side)으로 분리되어 있어, 감염된 동물은 핫존에서 안전하게 촬영하며, 대부분의 영상 장비는 유지관리가 용이하도록 외부의 콜드존에 배치됩니다.본 영상의 목적은 치명적인 바이러스 질환의 동물 모델을 안전한 방식으로 촬영할 수 있음을 입증하고, 이러한 환경에서 작업할 때의 제한 사항들을 다루는 것입니다. 동물 실험 절차 시연은 통합 연구 시설의 동물 시설 관리자인 Russ Byrum이 담당합니다. 영상 기술자인 Chris Bartos는 비교 의학 담당 직원들과 협력하여 동물을 스캐너에 배치하고 영상을 획득하는 과정을 조정합니다.동물 실험 대상이 포함된 절차는 동물실험윤리위원회(Animal Care and Use Committee) 및 기관생물안전위원회(Institutional Biosafety Committee)의 승인을 받았습니다. 컴퓨터 단층촬영(computed tomography) 스캐너를 준비하려면, 스캔실의 hot side 또는 cold side에 직원이 없는지 확인하고 피검체 테이블이 비어 있는지 확인하십시오. 공기, 물, Teflon으로 제작되어 피검체의 머리와 몸의 밀도를 나타내는 팬텀(phantom)이라 불리는 물체가 스캐닝 테이블의 hot side에 있는 적절한 홀더에 배치되었는지 확인하십시오.냉각부 측에서 팬텀이 베드에 제대로 고정되었는지 확인하십시오. 팬텀을 보어 중앙으로 이동시킵니다. 실험실 표준 품질 관리 파라미터를 사용하여 팬텀을 스캔하고, 스캐너가 제조업체 사양 범위 내에 있는지 확인하십시오.비교의학 담당 직원에게 컴퓨터 단층촬영(CT) 스캐너의 사용 준비가 완료되었음을 알립니다. 사용하기 최소 10분 전에 동물 처치실의 다운드래프트 테이블(downdraft table)을 켭니다. 5% 이중 4급 암모늄 소독액과 같이 승인된 소독제를 사용하여 다운드래프트 테이블의 표면을 세척하고 소독합니다.내부 표면에 분무하고 10분간 접촉시킨 후 표면을 닦아 건조시키며, 그 다음 70%ethanol을 분무하고 닦아내어 잔류 소독제를 제거합니다. 마취 유도 박스와 동물 핸들링 장갑을 포함하여 필요한 장비와 소모품을 다운드래프트 테이블 위에 배치합니다. 컴퓨터 단층촬영 스캐너 베드에 동물 고정 장치를 설치한 후, 생체 징후 모니터를 설정합니다.기화기 내의 isoflourane 잔량을 확인하고, 필요한 경우 isoflourane을 추가하십시오. 마취기의 누출 여부를 육안으로 점검하고, 누출을 유발하는 문제가 발견되면 이를 수정하십시오. 폐마취가스를 포집하는 scavenging canister의 무게를 측정하십시오.기니피그가 들어있는 케이지를 영상 촬영실 인접 설치된 설치류 보관실 중 한 곳에서 다운드래프트 테이블로 옮깁니다. 케이지 카드에 기재된 동물 식별 번호를 확인합니다. 케이지 뚜껑을 열고, 양압복 장갑 위에 동물 보호용 가죽 장갑을 착용합니다.기니피그를 조심스럽게 들어 올립니다. 동물을 마취 유도 상자에 넣고 뚜껑을 덮습니다. 5% 이중 4급 암모늄 소독액으로 동물 핸들링 장갑과 클린수트 장갑을 세척하여 제거합니다.동물이 들어 있는 마취 유도 박스와 케이지를 다운드래프트 테이블에서 제거하여 운반 카트에 올립니다. 카트를 이용하여 동물을 컴퓨터 단층촬영(CT) 스캔실로 이동시킵니다. CT 스캐너실에 도착하면 즉시 폐가스 회수 캐니스터와 마취기를 유도 박스에 연결합니다.텍스트 프로토콜에 안내된 대로 마취를 시작한 후, CT 스캐너실의 온측(hot side)에서 동물이 외부 자극에 반응하지 않는지 확인하고 근긴장도를 체크하여 마취 유도 중 마취 깊이가 적절한지 모니터링합니다. 마취된 기니피그를 유도 상자에서 꺼내어 영상 촬영 베드 위 고정 쿠션에 복와위(prone position)로 놓습니다. 추가적인 유지 마취를 위해 기니피그에게 노즈콘을 씌우고 가스를 켜서 산소를 1 L/min으로 공급합니다.텍스트 프로토콜에 명시된 대로 이소플루레인(isoflurane)을 투여합니다. 호흡수와 심박수가 안정적인지 확인합니다. 기니피그가 완전히 마취되면 유도 박스로 공급되는 마취제를 차단합니다.각막 상피의 건조를 방지하기 위해 양쪽 눈에 안연고를 도포합니다. CT 스캐너실의 콜드 사이드(cold side)에서 레이저 시스템을 활성화하여 기니피그를 CT 스캔 위치에 맞춥니다. 테이블 이동 버튼(in 및 out)을 사용하여 관심 해부학적 부위가 레이저 십자선 아래에 오도록 조절합니다.시야를 설정하려면 레이저 버튼을 사용하여 관심 해부학적 부위 위에 시작점을 설정하십시오. 비교의학 담당 직원에게 요청하여 본인과 컴퓨터 단층촬영(CT) 스캐너 사이에 납 차폐물을 배치하도록 하십시오. 제조업체의 프로토콜에 따라 CT 연구 영상의 슬라이스 배치를 위한 서베이 스캔을 획득하십시오.서베이 이미지 상에 CT 검사 이미지의 슬라이스 위치를 지정하십시오. 조영제 주입을 사용하는 경우 핫 사이드 담당자와 협의하십시오. 제조사의 프로토콜에 따라 검사 스캔을 획득한 후, 마찬가지로 제조사의 프로토콜에 따라 스캐너 콘솔에서 컴퓨터 단층 촬영 이미지를 재구성하십시오.영상을 의료영상 저장 전송 시스템(PACS)으로 전송합니다. 필요한 경우, 저장 시스템에 저장된 이 데이터에 대해 추가적인 정성 및 정량 분석을 수행합니다. 기니피그를 스캐너 베드에서 CT 스캐너실 내의 먹이가 제공된 마이크로 격리 케이지로 옮깁니다.동물을 취급한 후 니트릴 장갑을 세척하십시오. 카트를 사용하여 케이지를 동물 실험실 내의 사육 구역으로 운반하십시오. 케이지를 HEPA 환기 랙으로 되돌리기 전까지 동물이 마취에서 완전히 회복되었는지 모니터링하십시오.동물 실험실의 다운드래프트 테이블과 스캐너 베이 구역 모두를 5% 이중 4급 암모늄 용액으로 소독하십시오. 이중 4급 암모늄 용액을 도포하고 10분간 방치한 후, 70% 에탄올 용액으로 표면을 닦아내십시오. 모니터 및 마취기처럼 직접 분사할 수 없는 민감한 전자 장비는 이중 4급 암모늄 용액을 적신 천으로 닦은 다음, 에탄올을 적신 천으로 닦아내십시오.ABSL4 실험실에서 안전하게 작업하기 위해서는 모든 안전 절차와 동물 취급 표준 작업 지침을 엄격히 준수하는 것이 필수적입니다. 유도 박스 내의 감염된 동물을 동물 처치실에서 영상 촬영실로 이동시키면 공용 복도의 오염 위험을 최소화할 수 있습니다. 콜드 사이드(cold side)의 영상 촬영 담당자가 핫 사이드(hot side)의 비교 의학 담당자와 연락할 수 있도록 헤드셋이 포함된 블루투스 전화기를 이용한 통신 시스템을 구축하고 시각적 소통을 병행함으로써, 분리된 인원 간의 의사소통 오류 가능성을 줄일 수 있습니다.적절한 절차를 준수함으로써 IRF Frederic에서 동물 생물안전 4등급(ABSL4) 연구를 수행하는 동안 실험실 획득 감염이나 실험 동물의 교차 오염은 기록되지 않았습니다. ABSL4 바이러스 병원체는 폐 관련 병리를 유발할 수 있으며, CT는 감염 동물 모델에서 질병 진행 상황을 모니터링하는 데 유용한 도구입니다. CT 영상은 조직에 흡수된 x-선 방사선을 통해 생성됩니다.CT에서는 뼈와 같이 영상화된 객체의 밀도가 높을수록 객체가 더 밝게 나타납니다. 심장이나 간과 같이 밀도가 높은 장기 조직은 중간 정도의 강도를 띠는 경향이 있으며, 건강한 폐와 같이 공기로 채워진 조직은 검게 나타납니다. CT는 360도 시야에 걸쳐 여러 장의 방사선 사진을 획득하며, 이는 신체의 3차원 영상으로 재구성됩니다.이 기술을 완전히 익히면 적절하게 수행했을 때 약 30분 정도 소요됩니다. 이와 유사한 절차를 통해 PET, SPECT, MRI와 같은 다른 영상 기법을 활용하여 질병 발병 기전에 관한 추가적인 질문에 답할 수 있으며, 어쩌면 바이러스 자체를 영상화하는 것도 가능할 것입니다. 이 영상을 시청하고 나면, 동물 생물 안전 등급 4(animal biosafety level 4) 시설 내 실험동물을 대상으로 의료 영상을 촬영하는 데 필요한 자원과 절차의 복잡성에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

연구자들은 일반적으로 생물안전성 1등급 또는 2등급(BSL-1/2) 실험에 필요한 절차와 안전 예방 조치에 대해 잘 알고 있지만, BSL-4 슈트 실험실의 실험 절차에 대해서는 익숙하지 않을 수 있습니다. 이 기사는 BSL-4 슈트 실험실 시스템 점검, 실험실 진입, 이동 및 탈출 절차에 대한 자세한 시각적 데모를 제공합니다.

(A)의 안전주의 사항 및 운영 절차 BSL-4 실험실 : 1. 바이오 안전성 레벨 4 정장 연구소 스위트 출입국 절차

BSL-4 실험실에서 바이러스 분석을 수행하는 것은 필요한 추가 안전 예방 조치로 인해 BSL-2 실험실에서 수행하는 작업에 비해 더 복잡합니다. 여기에서는 BSL-4 실험실 내에서 사용되는 관행 및 절차에 대한 개요를 제시하여 적절한 Class II 생물 안전 캐비닛 사용, 폐기물 관리/처리 및 샘플 제거를 보여줍니다.

(A)의 안전주의 사항 및 운영 절차 BSL-4 실험실 2. 일반 사례

고위험 병원체는 공기 중 입자를 통해 피험자를 감염시킬 수 있기 때문에 공기 생물학은 병인 연구 및 의료 대책 개발에 점점 더 많이 적용되고 있습니다. 우리는 동물 생물 안전 레벨 4 최대 봉쇄 환경에서 비인간 영장류의 에어로졸 챌린지 중 항공 생물학 절차에 대한 자세한 시각적 시연을 제시합니다.

(A)의 안전주의 사항 및 운영 절차 BSL-4 실험실 3. 공중 생물학

신속 하 게 구축, 오프-그리드 실험실 설계 되었고 원격, 리소스 제한 전역 설정에 대 한 내장. 기능 및 물류 개선, 확장, 다기능 실험실 모듈의 중요 한 측면을 탐구 된다. 기본적인 실험실 작업에 대 한 점검 및 호흡기 바이러스 진단 테스트에 대 한 프로토콜 개발 이며 제시.

원격 실험실 관리: 호흡기 바이러스 진단

이 프로토콜은 전체 세포의 급속한 탐지 다음 토마토와 다른 신선한 농산물의 표면 샘플링을위한 간단한 접착제 테이프 기반의 접근 방식을...

접착제 테이프 기반의 샘플링 및 형광의 조합 현장에서</em의 신속한 감지를 위해> 하이브 리다이 제이션 살모넬라균 신선한 농산물에 대한

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(A)의 안전주의 사항 및 운영 절차 BSL-4 실험실 4. 의료 영상 절차

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