Name: 연속 IV 주입은 뇌졸중 유발 뇌 부종을 연구하는 마우스에 아르기닌 - 바소프레신 수용체 차단 코니 밥탄의 선택 처리 경로입니다 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 44 s
Description: 학습하세요 뇌졸중 후 코니밥탄 정맥주입을 통한 뇌부종 감소 효과를 마우스 모델에서 검증하는 방법입니다. 이 기술은 약물 투여 경로가 중요성을 밝히고 향후 뇌졸중 연구 설계를 개선하는 데 기여합니다.

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우리는 자금 및 시설을 제공 스웨덴어 의료 센터 감사합니다. 우리는 또한 실험실 공간의 관대 한 사용을 위해 크레이그 병원 감사합니다.

실험 연구의 관심과 동물의 사용을위한 국립 보건원 (National Institutes of Health)의 지침에 따라 수행되었으며 스웨덴 의료 센터 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다. 모든 절차는 적절한 무균 기술을 사용하여 수행 하였다. 연구에 활용 실험 동물은 25 ~ 27g에 체중와 야생형 C57 마우스, 3 개월, 남성이었다. 생체 스트로크 유도 1. <ol><li> 프리 코트 전에 수술에 치과 수지와 필라멘트. <ol><li> 7-0 나일론 봉합사에서 필라멘트의 12mm 긴 조각을 잘라. 경화제 1 부분과 수지의 2 부를 혼합 한 후 즉시 1/3 전체 길이를 덮도록 혼합물에 필라멘트의 팁을 담근다. 신속하게 제거하고이 치과 수지의 부드러운 표면 코팅으로 덮여 있는지 확인합니다. </li><li> 공기는 사용하기 전에 2 시간 동안 필라멘트를 건조. </li></ol></li><li> 에 마우스를 놓고N 마취 유도 챔버 (2 L 부피), 및 2 L / 분으로 챔버에 들어가는 25 %의 산소가 풍부한 실내 공기 중의 1.5 % 이소 플루 란의 흐름을 설정한다. </li><li> 꼬리 핀치에 대한 응답의 부족에 의해 결정 완전히 팔을 마취 할 때까지 마우스가 유도 챔버에 남아있을 수 있습니다. </li><li> 가열 패드 수술대 위에 마우스를 놓고 코 콘을 통해 자발적으로 전달 마취의 유지 보수를 위해 1 %의 이소 플루 란 농도를 설정합니다. </li><li> 전면과 목 뒤쪽에 머리를 클립하고, 소독 용 알코올로 목 스프레이. 두 눈에 수의학 안과 연고를 적용합니다. </li><li> 연속적으로 체온을 모니터링하기 위해 수술 중 디지털 디스플레이에 접속 된 직장 온도 프로브를 사용한다. </li><li> , 누운 위치에 마우스를 놓고 소독 용 포비돈 - 요오드 10 % 스크럽 솔루션을 적용, 멸균 드레이프로 커버 한 다음 크기 (10) 수술 메스 블레이드와 목을 따라 중간 선 절개를합니다. </li> &lt;리&gt; 임시 6.0 실크 봉합사와 왼쪽 경동맥 (CCA)을 결찰. </li><li> 왼쪽 외부 경동맥 (ECA)의 다른 넥타이를 놓습니다. </li><li> 내부 경동맥 (ICA)의 미세 혈관 클립을 배치합니다. </li><li> 미세 혈관 가위로 외부 경동맥에 작은 구멍을 잘라. 클립을 제거하는 동안 저항합니다 (CCA의 분기 지점에서 약 5-7mm)를 느낄 때까지의 ECA의 구멍에 치과 수지로 코팅 7-0 나일론 봉합사로 만든 필라멘트를 삽입하고 cephalically를 진행합니다. </li><li> 위치에 필라멘트를 확보하기 위해 내부 경동맥 상에 임시 넥타이를 놓습니다. 그림, 그림 (1A)를 참조하십시오. 실크 봉합사로 피부를 닫고, 단계 260에서와 같이, 0.5 % 부피 바카 0.2 ml의 목의 전면에 상처 침투. </li><li> 마우스가 60 분 동안 복구 실에서 의식을 마취에서 각성과 회복 할 수 있습니다. 이 회복 될 때까지 무인 동물을 두지 마십시오충분한 의식은 흉골 드러 누움을 유지합니다. </li><li> = 나머지 3에서 반대쪽하지만 정상적인 자세로 선회 0 = 정상 운동 기능, 몸통과 꼬리 리프트에 반대측 앞다리 1 = 굴곡, 2 반대측에 기대어 = 다음과 같이 신경 학적 결손 점수 (NDS)에 마우스를 테스트 나머지 4의 측면 = 더 자연 모터 활동. 4,9 <ol><li> NDS를 테스트를 위해, 관찰 (2-3 분)에 대한 평평한 표면에 꼬리 곳으로 마우스를 올립니다. 대안 적으로, 상기 회수 실의 마우스를 관찰. 때문에 MCA의 부족 폐색에 낮은 실험 2보다 NDS을 전시 마우스를 제외합니다. 참고 : 레이저 도플러 flowmetry 기술은 MCA 폐색을 확인하는 데 사용할 수 있습니다 9-11. </li></ol></li><li> 다시 마취 전술 한 바와 같이, 유도 챔버 회복 60 분 후 동물을 10 % 포비돈 - 요오드 용액 스크럽 이전 피부 절개 재 소독 및 상처 수술의 재개절단 및 실크 봉합사를 제거하여 목의 앞. </li><li> ECA에서 필라멘트를 제거하려면 다음 단계를 수행합니다 : <ol><li> ICA에의 미세 혈관 클립을 배치합니다. ICA에의 봉합을 풀어 오픈 클립을 누른 상태에서 필라멘트를 잡아 당깁니다. </li><li> 클립을 닫고 절단에 근위 ECA 상에 넥타이를 놓습니다. </li><li> 클립을 제거하고 뇌 혈류를 복원 할 CCA에서 합자를 제거합니다. 그림, 그림 1B를 참조하십시오. </li></ol></li></ol> 연속 48 시간의 처리를위한 경정맥에 IV 카테터의 2. 설치 참고 : 바로 마우스의 각성없이 단계 1.16.3 후 카테터의 설치를 진행합니다. <ol><li> 유연한 튜브의 두 개의 서로 다른 크기를 사용하여 내부 튜브 삽입 (, 내부 튜브의 보호를 위해 외부 직경 3.18 mm)를 외부 배관에 (외경 0.94 mm를 약물을 포함하도록 주입되는). </li><li> 피는 경향이 위치에 마우스를 레이스 소독 용 10 % 포비돈 - 요오드 스크럽 솔루션을 적용하고, 크기 (10) 수술 메스 블레이드와 목의 뒷면에 1cm 절개를합니다. , 앙와위로 마우스를 켜고 10 % 포비돈 - 요오드 스크럽 솔루션과 목의 전면을 다시 살균, 목의 전면에 수술 상처를 다시 엽니 다. 터널 목의 전면에 뒷면에 만든 절개의 피부 아래 튜브, 오픈 상처 1cm에서 그것을 외면 화하다. </li><li> 정중선 약 1cm 횡 목의 앞쪽의 좌측에서 피하 지방 조직을 제거한다. 좌측 경정맥을 찾습니다 5mm 간격 정맥을 따라이 관계를 배치하고 약간 정맥을 스트레칭. 미세 혈관 가위로 두 관계 사이의 경정맥에 작은 구멍을; (마음으로) 내부 튜브 5mm 깊이 꼬리 쪽의 끝을 삽입합니다. </li><li> 경정맥에 모두 관계로 튜브를 고정합니다. 목의 전면에 피부를 닫습니다3-0 실크 봉합사. 그림, 그림 1C를 참조하십시오. </li><li> 봉합와 목에의 뒷면에 피부에 튜브를 고정하고 회전을 통해 microinfusion의 IV 펌프에 튜브를 연결합니다. 스위블은 음식과 물에 대한 전체 액세스와 케이지 내부 마우스의 자유로운 이동을 허용한다. </li><li> 전면에 피부 절개 수술 후 통증을 방지하기 위해 0.5 % 부피 바카 0.2 mL를 목뒤 침투. 주 : 특정 기관, 동물 프로토콜에 따라 동물 오피오이드, 소염 진통제, 항생제 전후 동작 적으로 처리 될 수있다. 그러나, 언급 치료는 허혈성 뇌졸중의 결과의 결과를 변경할 수 있습니다 (토론 섹션 참조). 11 ~ 14 </li><li> 동물 실험의 종점까지 별도의 장에 동물을 회수 챔버에서 각성하고 수용하도록 허용한다. 이 흉골 유지하기 위해 충분한 의식을 회복 할 때까지 무인 동물을 두지 마십시오드러 누움. </li><li> 1.5 ㎖ / ㎏ / 시간, 4에서 연속 48 시간의 IV의 코니 밥탄의 치료 (5 % 포도당에서 0.14 ㎎ / ㎖) 또는 차량의 주입 속도를 설정하고 주입을 시작합니다. 참고 : IV 주입 코니 밥탄의 총량​​은 1.44 ML의 총 부피의 약 0.2 밀리그램 / 마우스 / 일해야한다. 주 : 1.44 ml의 5 % 포도당 0.2 mg의 총 양을 하루에 두 번 코니 밥탄의 복강 (IP) 주입을 수행합니다. IP 주입 앞서 설명한 구현한다. (15)는 몸체와 꼬리의 후방 표면의 피부를 파지하여 마우스 제지. 26 G / / 2 인치의 바늘을 사용하여 복부의 좌하 사분면에 코니 밥탄 또는 비히클을 주입한다. 15 </li><li> 실험 (48 시간)의 전체 지속 기간 동안 하루에 두 번 동물을 관찰한다. 동물들이 음식과 물에 대한 전체 액세스 권한을 허용합니다. 동물이 고통 또는 호흡 곤란의 증상이 나타나는 경우 수의사에게 문의하십시오. 안락사는 심각한 DIST에서 동물을 위해 필요한 경우RESS 아래의 단계 3.1를 참조하고, 연구에서 동물을 제외 할 수 있습니다. </li></ol> 엔드 포인트에서 뇌졸중 유발 뇌 부종 3. 평가 <ol><li> 5 % 이소 플루 란과 오버 마취하여 마우스를 희생. </li><li> 정중선을 따라 두개골 뼈 위에 피부 절개를하게 메스를 사용하여 뇌 위에 전체 두개골을 노출시키기 위해 피부를 철회. 난원 매그넘에서 시작, 측면 양쪽에있는 뇌의 둘레를 따라 두개골 뼈를 절단하고, 그 아래 뇌를 건드리지 않고 조심스럽게 들어 올립니다. 척추의 뇌와 두개골의베이스 상에 장착 된 신경 단절. </li><li> 뇌를 제거 후각 망울과 소뇌에서 분리하고, 전술 한 바와 같이, 허혈성 및 비 허혈성 대뇌 반구에 반구 균열을 따라 뇌를 해부하다. (9) </li><li> 습윤 건조 비교 비율 (WDR) -4,9- 이미 설명한 바와 같이하여 뇌 부종을 평가. 조직 무게전 오븐에서 100 ℃에서 3 일간 건조시킨 후. %의 H 2 O = 뇌의 수분 함량 (BWC) 계산 (1 건조 중량. / 습식 중량은.) × 100 %. </li></ol>

<ol><li>Gueniau, C., Oberlander, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+kappa+opioid+agonist+niravoline+decreases+brain+edema+in+the+mouse+middle+cerebral+artery+occlusion+model+of+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Exp+Ther%22%5BJournal%5D)">The kappa opioid agonist niravoline decreases brain edema in the mouse middle cerebral artery occlusion model of stroke.</a> J Pharmacol Exp Ther. 282, 1-6 (1997).</li>
<li>Krafft, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Etiology+of+stroke+and+choice+of+models%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Stroke%22%5BJournal%5D)">Etiology of stroke and choice of models.</a> Int J Stroke. 7, 398-406 (2012).</li>
<li>Vakili, A., Kataoka, H., Plesnila, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+arginine+vasopressin+V1+and+V2+receptors+for+brain+damage+after+transient+focal+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Role of arginine vasopressin V1 and V2 receptors for brain damage after transient focal cerebral ischemia.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 25, 1012-1019 (2005).</li>
<li>Zeynalov, E., Jones, S. M., Seo, J. W., Snell, L. D., Elliott, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arginine-Vasopressin+Receptor+Blocker+Conivaptan+Reduces+Brain+Edema+and+Blood-Brain+Barrier+Disruption+after+Experimental+Stroke+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Arginine-Vasopressin Receptor Blocker Conivaptan Reduces Brain Edema and Blood-Brain Barrier Disruption after Experimental Stroke in Mice.</a> PloS one. 10, e0136121(2015).</li>
<li>Med Lett Drugs Ther.. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conivaptan+%28Vaprisol%29+for+hyponatremia%5BTitle%5D)+AND+%22The+Medical+letter+on+drugs+and+therapeutics%22%5BJournal%5D)">Conivaptan (Vaprisol) for hyponatremia.</a> The Medical letter on drugs and therapeutics. 48, 51-52 (2006).</li>
<li>Zhao, X. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+arginine+vasopressin+on+the+cortex+edema+in+the+ischemic+stroke+of+Mongolian+gerbils%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropeptides%22%5BJournal%5D)">Effect of arginine vasopressin on the cortex edema in the ischemic stroke of Mongolian gerbils.</a> Neuropeptides. 51, 55-62 (2015).</li>
<li>Manaenko, A., Chen, H., Kammer, J., Zhang, J. H., Tang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+Evans+Blue+injection+routes%3A+Intravenous+versus+intraperitoneal%2C+for+measurement+of+blood-brain+barrier+in+a+mice+hemorrhage+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Comparison Evans Blue injection routes: Intravenous versus intraperitoneal, for measurement of blood-brain barrier in a mice hemorrhage model.</a> J Neurosci Methods. 195, 206-210 (2011).</li>
<li>Adams, S., Pacharinsak, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+anesthesia+and+analgesia%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Mouse+Biol%22%5BJournal%5D)">Mouse anesthesia and analgesia.</a> Curr Protoc Mouse Biol. 5, 51-63 (2015).</li>
<li>Zeynalov, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+perivascular+pool+of+aquaporin-4+mediates+the+effect+of+osmotherapy+in+postischemic+cerebral+edema%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">The perivascular pool of aquaporin-4 mediates the effect of osmotherapy in postischemic cerebral edema.</a> Crit Care Med. 36, 2634-2640 (2008).</li>
<li>Zeynalov, E., Dore, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+doses+of+carbon+monoxide+protect+against+experimental+focal+brain+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotox+Res%22%5BJournal%5D)">Low doses of carbon monoxide protect against experimental focal brain ischemia.</a> Neurotox Res. 15, 133-137 (2009).</li>
<li>Zeynalov, E., Nemoto, M., Hurn, P. D., Koehler, R. C., Bhardwaj, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+effect+of+selective+kappa+opioid+receptor+agonist+is+gender+specific+and+linked+to+reduced+neuronal+nitric+oxide%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective effect of selective kappa opioid receptor agonist is gender specific and linked to reduced neuronal nitric oxide.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 26, 414-420 (2006).</li>
<li>Ma, M. C., Qian, H., Ghassemi, F., Zhao, P., Xia, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxygen-sensitive+%7Bdelta%7D-opioid+receptor-regulated+survival+and+death+signals%3A+novel+insights+into+neuronal+preconditioning+and+protection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Oxygen-sensitive {delta}-opioid receptor-regulated survival and death signals: novel insights into neuronal preconditioning and protection.</a> J Biol Chem. 280, 16208-16218 (2005).</li>
<li>Ahmad, M., Zhang, Y., Liu, H., Rose, M. E., Graham, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+opportunity+for+neuroprotection+in+experimental+stroke+with+selective+blockade+of+cyclooxygenase-2+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Prolonged opportunity for neuroprotection in experimental stroke with selective blockade of cyclooxygenase-2 activity.</a> Brain Res. 1279, 168-173 (2009).</li>
<li>Meisel, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preventive+antibacterial+treatment+improves+the+general+medical+and+neurological+outcome+in+a+mouse+model+of+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Preventive antibacterial treatment improves the general medical and neurological outcome in a mouse model of stroke.</a> Stroke. 35, 2-6 (2004).</li>
<li>Miner, N. A., Koehler, J., Greenaway, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraperitoneal+injection+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Intraperitoneal injection of mice.</a> Appl Microbiol. 17, 250-251 (1969).</li>
<li>Adis International Limited. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conivaptan%3A+YM+087%5BTitle%5D)+AND+%22Drugs+in+R%26D%22%5BJournal%5D)">Conivaptan: YM 087.</a> Drugs in R&D. 5, 94-97 (2004).</li>
<li>Murphy, T., Dhar, R., Diringer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conivaptan+bolus+dosing+for+the+correction+of+hyponatremia+in+the+neurointensive+care+unit%5BTitle%5D)+AND+%22Neurocrit+Care%22%5BJournal%5D)">Conivaptan bolus dosing for the correction of hyponatremia in the neurointensive care unit.</a> Neurocrit Care. 11, 14-19 (2009).</li>
<li>Liu, X., Nakayama, S., Amiry-Moghaddam, M., Ottersen, O. P., Bhardwaj, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arginine-vasopressin+V1+but+not+V2+receptor+antagonism+modulates+infarct+volume%2C+brain+water+content%2C+and+aquaporin-4+expression+following+experimental+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Neurocrit+Care%22%5BJournal%5D)">Arginine-vasopressin V1 but not V2 receptor antagonism modulates infarct volume, brain water content, and aquaporin-4 expression following experimental stroke.</a> Neurocrit Care. 12, 124-131 (2010).</li>
<li>Wallace, B. K., Jelks, K. A., O'Donnell, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemia-induced+stimulation+of+cerebral+microvascular+endothelial+cell+Na-K-Cl+cotransport+involves+p38+and+JNK+MAP+kinases%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Ischemia-induced stimulation of cerebral microvascular endothelial cell Na-K-Cl cotransport involves p38 and JNK MAP kinases.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 302, C505-C517 (2012).</li>
<li>O'Donnell, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+HOE-642+reduces+brain+edema+and+Na+uptake+in+the+rat+permanent+middle+cerebral+artery+occlusion+model+of+stroke%3A+evidence+for+participation+of+the+blood-brain+barrier+Na%2FH+exchanger%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Intravenous HOE-642 reduces brain edema and Na uptake in the rat permanent middle cerebral artery occlusion model of stroke: evidence for participation of the blood-brain barrier Na/H exchanger.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 33, 225-234 (2013).</li>
<li>Walcott, B. P., Kahle, K. T., Simard, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+treatment+targets+for+cerebral+edema%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotherapeutics%22%5BJournal%5D)">Novel treatment targets for cerebral edema.</a> Neurotherapeutics. 9, 65-72 (2012).</li>
<li>Shen, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+G+protein-coupled+receptor+81+%28GPR81%29+protects+against+ischemic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22CNS+Neurosci+Ther%22%5BJournal%5D)">Inhibition of G protein-coupled receptor 81 (GPR81) protects against ischemic brain injury.</a> CNS Neurosci Ther. 21, 271-279 (2015).</li>
</ol>

저자는 공개 아무것도 없어.

이 연구는 임상 뇌졸중 연구에 중요한 가치가있다. 이 연구는 쥐 실험 뇌졸중 후 코니 밥탄 (0.2 밀리그램 / 일)의 연속 IV 주입을 효율적으로 처리 48 시간 후 뇌부종을 감소 시킨다는 것을 알 수있다. 뇌부종에 코니 밥탄의 동일한 용량의 IP 주입의 효과도 조사 하였다. 모두 IV 및 IP 경로로 코니 밥탄 치료로 나타낸 바와 같이 마우스에 aquaresis을 생성합니다 약간 생리 학적 수준 위의 혈장 삼투압 1) 증가; 2)으로 인해 신장에서 물의 재 흡수의 차단에 소변 삼투압 감소. 따라서, 처리 결과에 기초하여, 우리는 IV 배송 방법은 뇌졸중 유발 부종 형성에 중요한 추가적인 유익한 효과가 있다고보고한다. 우리의 주요 결과는 IV 치료 코니 밥탄의 IP 경로보다 뇌 부종 완화에 더 나은 효과를 생산한다는 것이다. 임상 적으로 사용이 COR하는 코니 밥탄은 가능한 선택지 졸론 및 V2 수용체 길항제 인RECT 저 나트륨 혈증, 혈액 볼륨과 삼투압은. (1...

뇌졸중은 환자와 임상의에게 계속해서 엄청난 부담이 되고 있습니다. 동물 뇌졸중 모델은 거의 20년 동안 실험실 환경에서 사용되어 왔습니다. 1 그럼에도 불구하고, 동물에게 효과가 있는 실험적 치료법은 종종 인간에게는 실패한다. 2 이러한 치료 결과의 불일치는 동물 연구에 사용되는 약물의 투여 경로, 약물 대사 및 제거율 및 기타 여러 측면과 같은 다양한 요인에 기인할 수 있습니다. 뇌졸중의 주요 합병증 중 하나인 뇌부종은 현재 신경과학 연구의 초점입니다. 뇌부종 형성 기전은 허혈성 뇌 손상에 대한 아르기닌-바소프레신(AVP) 반응에 의해 유발되는 수분과 전해질 균형의 장애를 포함합니다. 3 그러므로, AVP와 그 수용체(V1a 및 V2)는 허혈 후 뇌부종 형성에 대한 연구의 주요 초점입니다. 3
우리는 생쥐의 허혈후 뇌부종에 대한 혼합 아르기닌-바소프레신(V1a 및 V2) 수용체 차단제 코니밥탄의 효과를 연구하기 위한 방법론을 개발했습니다. 4 코니밥탄5의 분자 표적은 이 약물을 뇌부종 완화에 대한 특성 탐색에 적합한 후보로 만듭니다. 또한, 코니밥탄은 뇌졸중의 병태생리학적 사건의 맥락에서 연구될 필요가 있다. 6 본 연구를 설계할 때, 우리는 코니밥탄에 대한 두 가지 다른 투여 경로, 즉 정맥 주사(IV)4와 복강내(IP)를 사용하여 치료 결과를 비교하는 것을 고려했다. 7 뇌졸중 유발 뇌부종에 대한 치료의 효과를 평가했다. 여기에서는 중대뇌동맥 폐색(MCAO)에 의한 실험적 뇌졸중의 외과적 유도에 대한 자세한 프로토콜과 경정맥 IV 카테터 설치를 사용한 지속적인 코니밥탄 치료에 대한 자세한 프로토콜이 설명되어 있습니다. 뇌졸중 유도 후, 동물을 다음 그룹에 무작위로 할당했습니다: 비히클 또는 코니밥탄(0.2mg/일) 치료된 IV 또는 IP.

<table><tbody><tr><td>가열 패드</td><td>K& H Manufacturing Inc</td><td>1060</td><td></td></tr><tr><td>온도 모니터와 직장 프로브</td><td>Physitemp</td><td>7029</td><td></td></tr><tr><td>실크 봉합 스풀, 6-0</td><td>Surgical Specialties Corporation</td><td>SP114</td><td></td></tr><tr><td>실크 봉합사 바늘, 3-0</td><td>Ethicon</td><td>1684G</td><td></td></tr><tr><td>나일론 봉합사, 7-0</td><td>Ethicon</td><td>1696G</td><td></td></tr><tr><td>치과 레진 폴리실록산 경화제</td><td>Heraeus Kulzer</td><td>65817930</td><td></td></tr><tr><td>Microinfusion IV 펌프</td><td>Kent Scietific</td><td>GT0897</td><td></td></tr><tr><td>Swivel 22GA</td><td>Instech</td><td>375/22PS</td><td></td></tr><tr><td>실험실용 튜브, 0.94 mm x 0.51 mm</td><td>다우코닝</td><td>508-002</td><td></td></tr><tr><td>실험실용 튜브, 3.18 mm x 1.98 mm</td><td>다우코닝</td><td>508-009</td><td></td></tr></tbody></table>

연속 iv 주입은 뇌졸중 유발 뇌 부종을 연구하는 마우스에 아르기닌 - 바소프레신​​ 수용체 차단 코니 밥탄의 선택 처리 경로입니다

Continuous IV Infusion is the Choice Treatment Route for Arginine-vasopressin Receptor Blocker Conivaptan in Mice to Study Stroke-evoked Brain Edema

스트로크는 세계에서 이환율과 사망률의 주요 원인 중 하나입니다. 뇌졸중은 뇌의 부종 및 기타 병태 생리 학적 사건에 의해 복잡하다. 스트로크 유발 뇌부종의 개발 및 전개에있어 가장 중요한 선수 중 호르몬 아르기닌 - 바소프레신​​과 수용체 졸론 및 V2이다. 최근 졸론 및 V2 수용체 차단제 코니 밥탄 뇌졸중 후 뇌 부종을 감소시키는 잠재적 인 약물로서 주목 받고있다. 그러나 행정 연구 코니 밥탄 응용 프로그램을 포함하는 동물 모델은 관리 가능한 노선에 따라 수정 될 필요가있다. 여기에 48 시간 연속 정맥 주사 (IV)의 결과는 쥐 실험 뇌졸중 후 복강 내 (IP) 코니 밥탄 치료와 비교된다. 우리는 중간 대뇌 동맥 폐색이 코니 밥탄 (0.2 mg)의 IV 또는 비히클의 치료 경정맥에 카테터를 설치하여 결합시킨 프로토콜을 개발했다. 동물의 다른 동료는 0.2로 처리 하였다매일 코니 밥탄 또는 차량 IP mg의 덩어리. 실험 스트로크 유발 뇌부종 연속 IV 및 IP 치료 후 마우스에서 평가 하였다. 결과의 비교 코니 밥탄의 연속 IV 정부는 코니 밥탄의 IP 관리는 달리, 마우스의 후 허혈성 뇌 부종을 완화 것으로 나타났습니다. 우리의 모델은 뇌졸중 및 뇌 부종의 컨텍스트에서 애플리케이션 코니 밥탄의 앞으로의 연구에 사용될 수 있다는 결론.

동물의 체온은 생리 학적 범위 내이고 스트로크 유도 수술을 통해 안정적. MCAO이 연구에서 제외 된 직후 2보다 낮은 NDS를 나타내 두 쥐. 쥐에서 MCAO은 48 시간에서 동측 반구에서 경색 볼륨을 생성합니다. TTC에 묻은 조각의 평가는 뇌 허혈성 뇌졸중의 발병이 심한 원인이 2009 년 10 Zeynalov, E. 및 도레, S., 공표 한 반구의 약 50 %, MCAO (그림 1D) 후 경색에 의해 영향을받는 것을 알 수 산소와 영양분이 뇌 조직의 박탈. 이 로컬 뇌 조직 저산소증의 결과로서, 뉴런 및 신경교 세포는 뇌의 경색 부분을 형성하는 다이.도 1d는 MCAO 유도 경색에 의해 영향을 대표 마우스 뇌 조각을 나타내고, 상처의 크기의 추정을 제공한다. <suP&gt...

본 연구는 코니밥탄의 유익한 효과가 생쥐의 실험적 뇌졸중 후 분만 방법에 따라 달라진다는 것을 밝혔습니다. 우리는 마우스의 뇌졸중 유발 뇌부종 형성에 IV 카테터를 통해 수용체 차단제를 전달하기 위한 연구 프로토콜을 개발했습니다.

연속 IV 주입은 뇌졸중 유발 뇌 부종을 연구하는 마우스에 아르기닌 - 바소프레신​​ 수용체 차단 코니 밥탄의 선택 처리 경로입니다

Stroke is one of the major causes of morbidity and mortality in the world. Stroke is complicated by brain edema and other pathophysiological events. Among ...

이 전임상 연구의 전반적인 목표는 뇌졸중 후 Conivaptan 투여에 대한 성공적인 마우스 모델을 구축하여, 향후 뇌졸중 분야의 연구 설계 개선에 기여하는 것입니다. 이 방법은 마우스의 뇌졸중 회복에 미치는 Conivaptan의 유익한 효과에 있어 투여 경로의 중요성은 무엇인지와 같은 뇌졸중 연구 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 연구자들이 Conivaptan의 모델링 연구 및 뇌졸중으로 유발된 뇌부종에 미치는 영향에 대한 연구를 수행하는 데 도움을 줄 수 있다는 점입니다.수술 최소 2시간 전에 7-0 나일론 봉합사에서 12 mm 길이의 필라멘트를 자른 다음, 치과용 레진 2부와 경화제 1부를 혼합하고, 필라멘트의 약 4 mm가 코팅될 때까지 혼합물에 빠르게 담급니다. 즉시 필라멘트 끝부분이 치과용 레진으로 매끄럽게 코팅되었는지 확인하십시오. 그 후, 필라멘트를 2시간 동안 공기 건조시킵니다.레진이 준비되면, 마취된 마우스를 수술대 위의 가열 패드 위에 놓고 발가락 꼬집기(toe-pinch)에 반응이 없는지 확인합니다. 클리퍼로 목의 앞뒷면 털을 제거하고, 목에 소독용 알코올을 뿌린 후 양쪽 눈에 연고를 바릅니다. 수술 중 체온을 지속적으로 모니터링하기 위해 디지털 디스플레이에 연결된 직장 온도 프로브를 사용합니다.마우스를 해부 현미경 아래에서 배와 위를 향하게 눕히고, 필요한 경우 목 아래에 말아놓은 거즈를 놓아 목이 아치형이 되도록 조절합니다. 그다음 Povidone Iodine 10% 스크럽 용액으로 목 부위를 소독합니다. 이후 동물에게 멸균 드레이프를 씌우고, 10번 수술용 칼날을 사용하여 목을 따라 중앙선을 절개합니다.6-0 실크 봉합사를 사용하여 왼쪽 총경동맥을 일시적으로 결찰한 다음, 왼쪽 외경동맥을 결찰합니다. 내경동맥에 미세혈관 클립을 장착하고, 미세혈관 가위로 외경동맥에 작은 구멍을 냅니다. 치과용 레진이 코팅된 필라멘트를 구멍에 삽입한 후, 저항이 느껴질 때까지 클립을 제거하며 필라멘트를 머리 방향으로 전진시킵니다.필라멘트를 제자리에 고정하기 위해 내경동맥에 임시 결찰사를 묶고, 실크 봉합사로 피부를 봉합합니다. 그 후 목 앞쪽의 상처 부위에 0.5% Bupivacaine 0.2 mL를 투여하고, 흉골 복위(sternal recumbance)가 유지될 때까지 모니터링하며 회복실로 마우스를 옮깁니다. 신경학적 결손 점수(Neurological Deficit Scoring) 측정을 위해 마우스의 꼬리를 들어 올려 평평한 표면에 2~3분 동안 둡니다.텍스트에 따라 동물의 행동 점수를 산출하되, 중대뇌동맥의 폐쇄가 불충분하여 신경학적 결손 점수(Neurological Deficit Score)가 2점 미만인 마우스는 제외합니다. 필라멘트를 제거하려면 10% Povidone Iodine 세정액으로 절개 부위를 다시 멸균하고, 봉합사를 절단 및 제거하여 수술 창을 다시 엽니다. 그런 다음 해부 현미경 하에서 내경동맥에 미세혈관 클립을 장착하고 내경동맥 봉합사를 풉니다.클립을 연 상태로 유지하여 필라멘트를 밀어냅니다. 그 다음 즉시 클립을 다시 닫고, 절단 부위의 근위측 외경동맥을 봉합합니다. 외경동맥 결찰이 확실하게 되었으면, 클립을 제거하고 총경동맥 주변의 봉합사를 풀어 뇌로 가는 혈류를 복원합니다.총경동맥 봉합 직후, 10% Povidone Iodine 세정액으로 목 뒷부분을 소독하고 10번 수술용 메스 날을 사용하여 1cm 절개를 수행합니다. 그 다음 목 앞부분을 다시 멸균하고 수술 상처 부위를 다시 엽니다. 이제 외경 3.18 mm 튜브 내부에 외경 0.94 mm 튜브를 삽입하여 동물의 목 뒷부분에서 앞부분까지 피부 아래로 터널을 만들고, 튜브가 앞쪽 절개 부위에 도달하면 튜브를 외부로 노출시킵니다.정중선에서 외측으로 약 1cm 떨어진 목 전면 왼쪽 부위에서 피하 지방 조직을 제거합니다. 그런 다음 해부 현미경으로 왼쪽 경정맥의 위치를 확인하고, 혈관을 약간 늘린 상태에서 정맥을 따라 5mm 간격으로 두 곳을 결찰합니다. 이어서 미세혈관 가위를 사용하여 두 결찰 지점 사이의 경정맥에 작은 구멍을 내고, 내부 튜브의 팁을 심장 방향인 꼬리 쪽으로 5mm 깊이까지 삽입합니다.두 개의 타이로 튜브를 경정맥에 고정하고, 3-0 silk 봉합사를 사용하여 목 전면의 피부를 봉합합니다. 그런 다음 봉합사로 튜브를 목 뒷부분의 피부에 고정하고, 스위블을 통해 튜브를 미세 주입 정맥 펌프에 연결합니다. 수술 후 통증을 예방하기 위해 목 전면과 후면의 피부 절개 부위에 0.2 mL의 0.5% Bupivacaine을 투여하고, 회복실에서 모니터링하며 동물이 깨어날 때까지 기다립니다.동물이 누워 있는 상태에서 Conivaptan 또는 vehicle을 1.5 mg/kg/hr의 속도로 48시간 동안 지속적으로 정맥 투여하도록 설정하고 주입을 시작합니다. 또는 Conivaptan 0.2 mg과 5% Dextrose 1.44 mL를 2일 동안 매일 2회 복강 내 투여한 후, 각 주사 후 동물들을 짧게 관찰합니다. 마우스에서 중간 뇌동맥 폐쇄를 유도하면, tetrazolium chloride 염색으로 시각화했을 때 48시간 후 동측 뇌반구의 약 50%가 영향을 받은 경색 부피가 생성됩니다.60분간의 중뇌동맥 폐쇄 유도 후 48시간째에 뇌 수분 함량을 평가한 결과, Conivaptan을 정맥 투여했을 때 동측 및 대측 반구 모두에서 뇌부종이 유의미하게 감소하는 것으로 나타났습니다. 반면, 0.2 mm 볼루스로 Conivaptan을 매일 복강 투여한 경우에는 뇌졸중으로 유발된 뇌부종에 대해 유사한 긍정적 효과를 나타내지 못했습니다. 이 기술을 숙달하면 적절히 수행했을 때 2시간 이내에 완료할 수 있습니다.이 절차를 수행할 때, 실험 동물의 과도한 출혈은 연구 결과에 영향을 미치고 사망률을 높일 수 있으므로 이를 방지하는 것이 중요합니다. 본 절차 이후에는 뇌혈관 장벽(blood brain barrier) 손상 평가와 같은 다른 연구를 수행하여, 허혈 후 뇌부종에서 염증의 관여 정도에 관한 추가적인 질문들에 답할 수 있습니다. 이 기술의 개발 이후, 신경과학 분야의 연구자들은 임상 연구를 위한 약물 투여 경로의 중요성을 탐구할 수 있는 길을 열게 되었습니다.이 영상을 시청한 후에는 생쥐에서 외과적으로 허혈 상태를 유도하는 방법, 경정맥에 정맥 카테터를 삽입하는 방법, 그리고 지속적인 정맥 주입을 통해 생쥐에게 Conivaptan을 투여하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다. 살아있는 동물을 다루는 작업은 매우 위험할 수 있으므로, 이 절차를 수행하는 동안에는 항상 수술용 장갑과 마스크를 착용하는 등의 예방 조치를 취해야 함을 잊지 마십시오.

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Medicine

의학

신생아 생쥐의 중추 신경계에 치료 요원들을 소개하는 뇌 (intracerebroventricular)와 (정맥 주사) 2) 체계로 : 1)이 문서 분사의 두 가지 방법을 보여줍니다.

마우스에 Intracerebroventricular을 통해 치료 대리점 납품 (ICV)과 정맥 (IV) 사출

이 비디오에서는 미세삼투압 펌프 뇌 주입 시스템을 조립한 후 쥐의 두개골에 외과적으로 이식하는 방법을 보여줍니다. 이 시스템은 잠재적인 약물의 지속적인 전달을 가능하게 하고 뇌와 뇌 조직에 미치는 영향에 대한 연구를 용이하게 합니다.

마우스 모델의 연속 약물 주입 시스템: 지속적인 약물 전달을 위해 마우스 뇌에 미세삼투압 펌프 주입 시스템을 이식하는 수술 절차

출처: Zeynalov, E. et. al., 지속적인 IV 주입은 뇌졸중 유발 뇌 부종을 연구하기 위한 마우스의 아르기닌-바소프레신 수용체 차단제 Conivaptan에 대한 선택 치료 경로입니다. J. Vis. 경험. (2016년)이 비디오는 마우스 모델에서 아르기닌-바소프레신(AVP) 수용체 길항제의 정맥 전달을 보여줍니다. 일시적인 중대뇌동맥 폐색은 뇌부종을 유발합니다. AVP 수용체 길항제는 좌경정맥의 카테터를 통해 투여되어 부종을 완화합니다.

마우스 모델에서 뇌부종을 줄이기 위한 수용체 차단제의 정맥 전달

우리는 카테터를 이식하거나 마우스의 오른쪽 측면 뇌실에 알약 주입을 수행하여 중추 신경계에 약물을 대상으로하는 방법을 설명합니다. 우리는 안티센스 올리고 뉴클레오티드의 전달에 특히 초점을 맞 춥니 다. 이 기술은 다른 약물과 쥐에 쉽게 적응할 수있다.

설치류 중추 신경계에 약물을 직접 심실 배달

혈역학을 측정하고, 체액을 제공하고, 혈액 샘플링을 수행하기 위한 혈관 접근은 모든 소동물 모델 연구에 중요합니다. 우리는 마취된 쥐의 경동맥과 총경정맥에 카테터를 이식하여 모니터링, 주입 및 샘플링을 수행하기 위해 시스템에 연결하는 기술을 제시합니다.

경동맥과 경정맥의 도관은 의식 쥐 모델에서, 혼합 및 혈액 샘플링을 혈역학 적 조치를 수행하는

대류 강화 전달 (CED)은 큰 조직 볼륨의 직접 관류에 의해 뇌로 치료제의 효과적인 전달을 가능하게하는 방법입니다. 절차는 카테터와 최적화 된 주입 절차의 사용을 필요로한다. 이 프로토콜은 마우스 뇌로 항체의 CED에 대한 방법론을 설명합니다.

대류 강화 전달을 통해 뮤린 뇌로 항체 전달

신경 줄기 세포를 전달하는 방법, 용액 또는 현탁액을 주입하기 위한 적응성, 일반적인 경동맥을 통해 (마우스) 또는 외부 경동맥 (쥐) 허혈성 뇌졸중 후보고된다. 주입된 세포는 뇌 의 자당종 전체에 광범위하게 분포되며 전달 후 최대 30d까지 검출될 수 있다.

쥐와 마우스 두뇌에 신경 줄기 세포의 동맥 내 납품: 대뇌 허혈에 응용 프로그램

비 외상성 뇌실 내 출혈의 설치류 모델에서 두개 내압을 모니터링하는 것은 현재 문헌에서 일반적이지 않습니다. 본원에서, 우리는 래트 동물 모델에서 뇌실내 출혈 동안 두개내압, 평균 동맥압, 및 뇌관류 압력을 측정하는 기술을 시연한다.

비외상성 뇌실내 출혈 설치류 모델의 두개내압 모니터링

이 프로토콜은 마우스에서 다중 정맥 볼루스 용량 투여 및 침습적 혈류역학적 모니터링을 실행하기 위한 단계별 절차를 제공합니다. 조사관은 폐동맥 고혈압에 대한 향후 치료 화합물 스크리닝을 위해 이 프로토콜을 사용할 수 있습니다.

저산소증 유도 마우스 폐동맥 고혈압 모델에서 다중 정맥 볼루스 투여 및 침습적 혈류역학 평가

이 프로토콜은 반복적인 약물 치료를 위해 경정맥 카테터를 갖는 혈관 접근 포트의 아포리포단백질 E(ApoE) 결핍 마우스에서 안지오텐신 II 방출에 의해 복부 대동맥류를 유도하기 위한 삼투압 펌프의 연속 이식을 기술한다. 3D 초음파에 의한 동맥류 발달 모니터링은 등쪽 임플란트에도 불구하고 효과적으로 수행됩니다.

안지오텐신 II의 마우스 모델에서 중앙 정맥 카테터에 의한 약물 치료 유도 복부 대동맥류 및 3D 초음파에 의한 모니터링

학습하세요 뇌졸중 후 코니밥탄 정맥주입을 통한 뇌부종 감소 효과를 마우스 모델에서 검증하는 방법입니다. 이 기술은 약물 투여 경로가 중요성을 밝히고 향후 뇌졸중 연구 설계를 개선하는 데 기여합니다.

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