G Protein-selective GPCR Conformations Measured Using FRET Sensors in a Live Cell Suspension Fluorometer Assay

Ansley Semack; Rabia U. Malik; Sivaraj Sivaramakrishnan

doi:10.3791/54696

G 단백질 선택적 GPCR의 입체는 라이브 셀 서스펜션 형광 분석에서 FRET 센서를 사용하여 측정

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Biology

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G Protein-selective GPCR Conformations Measured Using FRET Sensors in a Live Cell Suspension Fluorometer Assay

G 단백질 선택적 GPCR의 입체는 라이브 셀 서스펜션 형광 분석에서 FRET 센서를 사용하여 측정

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09:12 min

September 10, 2016

DOI: 10.3791/54696-v

Ansley Semack¹, Rabia U. Malik², Sivaraj Sivaramakrishnan¹

¹Genetics, Cell Biology, and Development,University of Minnesota, ²Department of Cell and Developmental Biology,University of Michigan

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

G 단백질 결합 수용체에 의한 G 단백질의 선택적 활성화를 감지하는 간단한 방법은 세포 신호 전달에서 뛰어난 과제로 남아 있습니다. Fӧrster 공명 에너지 전달(FRET) 바이오센서는 GPCR을 G 단백질 펩타이드에 쌍으로 연결하여 살아있는 세포의 제어된 농도에서 구조적 변화를 조사하는 방식으로 개발되었습니다.

이 라이브 셀 Forster 공명 에너지 전달 또는 FRET 기반 분석의 전반적인 목표는 다양한 작용제 조건에서 G 단백질 선택적 G 단백질 결합 수용체 또는 GPCR 구조를 평가하는 것입니다. 이 방법은 GPCR 분야의 GPCR 상호 작용과 다른 효과기와의 상호 작용 및 수용체 확인에 대한 다른 약물의 효과에 대한 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 센서가 모듈식이며 전체 및 G 알파 서브 유닛을 포함하여 다양한 GPCR 및 G 알파 펩타이드 조합에 대해 쉽게 재설계할 수 있다는 것입니다.

이 방법은 G 단백질 선택 및 다른 lygen에 대한 반응에 대한 통찰력을 제공할 수 있습니다. 또한 차등 G 단백질 활성화의 생리학적 결과를 탐구하는 데 적용될 수도 있습니다. 절차를 시작하기 전에 배양물이 포화에 도달할 때까지 5%의 이산화탄소로 가습된 분위기에서 섭씨 37도의 완전한 배지에서 관심 세포를 배양합니다.

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