Name: Murine 콜린 불충분 한, Ethionine 보충 (CDE) 다이어트 만성 간 상해의 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 27 s
Description: 학습하세요 콜린 불충분 및 에티오닌 보충(CDE) 다이어트를 이용한 생쥐 만성 간 손상 유도 방법을 배우세요. 이 프로토콜은 지방간, 염증, 간 전구세포 증식 및 섬유화를 유발하는 신뢰할 수 있는 모델을 제공합니다.

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이 작품에서 국민 건강 및 의료 연구 위원회 (NHMRC) 호주 (APP1042370, APP1061332, APP1087125)의 교부 금에 의해 지원 되었다. 저자는 기술 지원에 대 한 커 틴 건강 혁신 연구소 직원을 감사 하 고 싶습니다.

1. 동물 실험 모든 동물 연구가이 조사에 설명 된 커 틴 대학 동물 윤리 위원회에 의해 승인 (승인 번호: AEC_2014_28)의 개시 이전에 실험 및 관심과 동물의 사용에 대 한 호주 코드에 따라 수행.
<ol><li>동물 <ol><li>6 주 오래 된 남성 C57BL/6J 마우스를 사용 하 여 실험에 대 한.</li>
	</ol></li> <li>실험 설계 <ol><li>동물 시설에 도착, 다음 허용 어떤 실험의 시작 전 4 일에 대 한 순응을 쥐.</li>
		<li>보이는 곡물과 줄기의 고갈 되어 12 시간 주/야 주기에서 쥐를 개별적으로 유지 하 급 왕 겨 불에 집 쥐 감 금 소 통풍이. 3 그리고 7 일에 침구 변경 다음 그 후 주간.</li>
		<li>콜린 결핍에 대 한 광고 libitum 액세스와 제공 쥐 식이 요법과 식 수 보충 DL ethionine의 0.15% 계속 DL ethionine 보충 물 4 ° C에서 고 신선도 보장 하 고 마시는 것이 좋습니다 두 번째 매일 식 수를 대체 합니다. 콜린-불충분 한 차 우 차 우의 완전 한 변화는 일주일에 한 번 두 번째 매일 최대 최고.</li>
		<li>관찰 쥐 휴식 및 처리 하는 동안입니다. 모니터 표준의 전반적인 모양, 자세, 손질, 사회적 상호 작용을 포함 하 여 동물의 건강 상태, 코트 표지판과 체중.</li>
		<li>무게 쥐 20% 이상 전시 하는 어떤 동물 든 지 몸 체중 감소 되도록 실험의 첫 2 주 동안 매일 부당한 고통을 제한 하 안락사 된다. 이것은 일반적으로 동물의 경우 5% 미만 에입니다. 2 주 후, 무게의 주파수 감소 될 수 있다 3 시간 (예를 들어, 월요일, 수요일, 금요일) 주간.</li>
	</ol></li> <li>간 관류 및 절연 <ol><li>복 주입에 의해 케 타 민 (100mg/kg)와 xylazine (10 mg/kg) (이 연구는 CDE 다이어트 1, 2, 및 6 주)에 표시 된 시간 지점에서 마우스를 Anesthetize. 적절 한 마 취를 위해 페달 철수 반사 테스트.</li>
		<li>70% 에탄올과 모피를 젖은 고 메이 위를 사용 하 여 횡 경 막까지 복 부 벽에 세로 중간 절 개를 합니다. 흉 곽 마음에 쉽게 액세스를 위해 제거 될 수 있다.</li>
		25 G x 1/2를 사용 하 여 느린 심장 찔린 <li>수집 피 &#34; 심장의 붕괴를 피하기 위해 일반 벽 바늘. Microcentrifuge 튜브 10 분 2000 x g에서 원심 분리 후 혈 청 샘플을 실 온에서 응고 혈액을 허용 한다. 나중에, 표준 절차 12 혈 청 알라닌 transaminase 수준을 측정.</li>
		<li>위장과 소장 쪽으로 이동한 포털 정 맥 노출 합니다. 메이 요가 위를 사용 하 여 종료 하 고와 버퍼링 하는 살 균 성 간 perfuse 체액 염 분 수 있도록 마음을 잘라 (pH = 7.4) cannulating 27 G x 1/2를 사용 하 여 문맥에 의해 &#34; 일반 벽 바늘. 균등 하 게 blanched 간 모든 간 엽의 성공적인 관류 나타냅니다.</li>
		<li>는 신중 하 게 간 분리 하 고 집게와가 위 메이 요를 사용 하 여 배양 접시에. 초과, 비 간 조직 및 쓸 개 제거.</li>
	</ol></li> <li>간 보존 <ol><li>전체 간 무게 기록 되었습니다, 1 개의 작은 엽 몇 평방 밀리미터의 여러 작은 조각으로 잘라 후 무 균 튜브에 그들을 전송 하 고 스냅 나중 RNA에 대 한 액체 질소에서 동결 그리고 단백질 추출, 표준 프로토콜에 의하여입니다. 어떤 조직 저하를 피하기 위해 기관 컬렉션 후 최대한 빨리 스냅-동결 조직 조각.</li>
		<li>표준 프로토콜에 당 10% 중립 버퍼링 된 포 르 말린 나중 처리 및 파라핀 포함 한 엽 수집.</li>
		<li>가득 최적의 절삭 온도 cryomatrix 수 지를 포함 하 고 스냅-동결 액체 질소에는 금형에 한 엽 장소.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Taub, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+regeneration%3A+from+myth+to+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Liver regeneration: from myth to mechanism.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 5, 836-847 (2004).</li>
<li>Kohn-Gaone, J., Gogoi-Tiwari, J., Ramm, G. A., Olynyk, J. K., Tirnitz-Parker, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+liver+progenitor+cells+during+liver+regeneration%2C+fibrogenesis%2C+and+carcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">The role of liver progenitor cells during liver regeneration, fibrogenesis, and carcinogenesis.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 310, G143-G154 (2016).</li>
<li>Lu, W. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+progenitor+cells+of+biliary+origin+with+liver+repopulation+capacity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Hepatic progenitor cells of biliary origin with liver repopulation capacity.</a> Nat Cell Biol. 17, 971-983 (2015).</li>
<li>Prakoso, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+the+intrahepatic+ductular+reaction+and+progenitor+cell+responses+in+hepatitis+C+virus+recurrence+after+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Transpl%22%5BJournal%5D)">Analysis of the intrahepatic ductular reaction and progenitor cell responses in hepatitis C virus recurrence after liver transplantation.</a> Liver Transpl. 20, 1508-1519 (2014).</li>
<li>Tirnitz-Parker, J. E., Tonkin, J. N., Knight, B., Olynyk, J. K., Yeoh, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+culture+and+immortalisation+of+hepatic+oval+cells+from+adult+mice+fed+a+choline-deficient%2C+ethionine-supplemented+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation, culture and immortalisation of hepatic oval cells from adult mice fed a choline-deficient, ethionine-supplemented diet.</a> Int J Biochem Cell Biol. 39, 2226-2239 (2007).</li>
<li>Van Hul, N. K., Abarca-Quinones, J., Sempoux, C., Horsmans, Y., Leclercq, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relation+between+liver+progenitor+cell+expansion+and+extracellular+matrix+deposition+in+a+CDE-induced+murine+model+of+chronic+liver+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Relation between liver progenitor cell expansion and extracellular matrix deposition in a CDE-induced murine model of chronic liver injury.</a> Hepatology. 49, 1625-1635 (2009).</li>
<li>Clouston, A. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrosis+correlates+with+a+ductular+reaction+in+hepatitis+C%3A+roles+of+impaired+replication%2C+progenitor+cells+and+steatosis%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Fibrosis correlates with a ductular reaction in hepatitis C: roles of impaired replication, progenitor cells and steatosis.</a> Hepatology. 41, 809-818 (2005).</li>
<li>Forbes, S. J., Newsome, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+regeneration+-+mechanisms+and+models+to+clinical+application%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Liver regeneration - mechanisms and models to clinical application.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 13, 473-485 (2016).</li>
<li>Akhurst, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+choline-deficient%2C+ethionine-supplemented+diet+protocol+effectively+induces+oval+cells+in+mouse+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">A modified choline-deficient, ethionine-supplemented diet protocol effectively induces oval cells in mouse liver.</a> Hepatology. 34, 519-522 (2001).</li>
<li>Shinozuka, H., Lombardi, B., Sell, S., Iammarino, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+histological+and+functional+alterations+of+ethionine+liver+carcinogenesis+in+rats+fed+a+choline-deficient+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Early histological and functional alterations of ethionine liver carcinogenesis in rats fed a choline-deficient diet.</a> Cancer Res. 38, 1092-1098 (1978).</li>
<li>Knight, B., Tirnitz-Parker, J. E., Olynyk, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C-kit+inhibition+by+imatinib+mesylate+attenuates+progenitor+cell+expansion+and+inhibits+liver+tumor+formation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">C-kit inhibition by imatinib mesylate attenuates progenitor cell expansion and inhibits liver tumor formation in mice.</a> Gastroenterology. 135, 969-979 (2008).</li>
<li>Kohn-Gaone, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Divergent+Inflammatory%2C+Fibrogenic%2C+and+Liver+Progenitor+Cell+Dynamics+in+Two+Common+Mouse+Models+of+Chronic+Liver+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Divergent Inflammatory, Fibrogenic, and Liver Progenitor Cell Dynamics in Two Common Mouse Models of Chronic Liver Injury.</a> Am J Pathol. 186, 1762-1774 (2016).</li>
<li>Knight, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attenuated+liver+progenitor+%28oval%29+cell+and+fibrogenic+responses+to+the+choline+deficient%2C+ethionine+supplemented+diet+in+the+BALB%2Fc+inbred+strain+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Attenuated liver progenitor (oval) cell and fibrogenic responses to the choline deficient, ethionine supplemented diet in the BALB/c inbred strain of mice.</a> J Hepatol. 46, 134-141 (2007).</li>
<li>Dwyer, B. J., Olynyk, J. K., Ramm, G. A., Tirnitz-Parker, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TWEAK+and+LTbeta+Signaling+during+Chronic+Liver+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">TWEAK and LTbeta Signaling during Chronic Liver Disease.</a> Front Immunol. 5, 39(2014).</li>
<li>Karin, M., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reparative+inflammation+takes+charge+of+tissue+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Reparative inflammation takes charge of tissue regeneration.</a> Nature. 529, 307-315 (2016).</li>
<li>Ruddell, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphotoxin-beta+receptor+signaling+regulates+hepatic+stellate+cell+function+and+wound+healing+in+a+murine+model+of+chronic+liver+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Lymphotoxin-beta receptor signaling regulates hepatic stellate cell function and wound healing in a murine model of chronic liver injury.</a> Hepatology. 49, 227-239 (2009).</li>
<li>Tirnitz-Parker, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+necrosis+factor-like+weak+inducer+of+apoptosis+is+a+mitogen+for+liver+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis is a mitogen for liver progenitor cells.</a> Hepatology. 52, 291-302 (2010).</li>
<li>Viebahn, C. S., Yeoh, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+fires+prometheus%3F+The+link+between+inflammation+and+regeneration+following+chronic+liver+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">What fires prometheus? The link between inflammation and regeneration following chronic liver injury.</a> Int J Biochem Cell Biol. 40, 855-873 (2008).</li>
<li>Hayner, N. T., Braun, L., Yaswen, P., Brooks, M., Fausto, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isozyme+profiles+of+oval+cells%2C+parenchymal+cells%2C+and+biliary+cells+isolated+by+centrifugal+elutriation+from+normal+and+preneoplastic+livers%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Isozyme profiles of oval cells, parenchymal cells, and biliary cells isolated by centrifugal elutriation from normal and preneoplastic livers.</a> Cancer Res. 44, 332-338 (1984).</li>
<li>Tee, L. B., Smith, P. G., Yeoh, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+alpha%2C+mu+and+pi+class+glutathione+S-transferases+in+oval+and+ductal+cells+in+liver+of+rats+placed+on+a+choline-deficient%2C+ethionine-supplemented+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">Expression of alpha, mu and pi class glutathione S-transferases in oval and ductal cells in liver of rats placed on a choline-deficient, ethionine-supplemented diet.</a> Carcinogenesis. 13, 1879-1885 (1992).</li>
<li>Chayanupatkul, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatocellular+carcinoma+in+the+absence+of+cirrhosis+in+patients+with+chronic+hepatitis+B+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Hepatocellular carcinoma in the absence of cirrhosis in patients with chronic hepatitis B virus infection.</a> J Hepatol. 66, 355-362 (2017).</li>
<li>Mittal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatocellular+Carcinoma+in+the+Absence+of+Cirrhosis+in+United+States+Veterans+is+Associated+With+Nonalcoholic+Fatty+Liver+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Hepatocellular Carcinoma in the Absence of Cirrhosis in United States Veterans is Associated With Nonalcoholic Fatty Liver Disease.</a> Clin Gastroenterol Hepatol. 14, 124-131 (2016).</li>
</ol>

작가 의해 공개 될 것입니다.

만성 간 질환은 종종 대부분의 환자 들은 무 증상 되와 조용한 질병 그리고 병 적 상태와 사망률 전세계 주요 참여자 중 하나입니다. 만성 알코올 중독 및 C 형 간염 바이러스 감염이 주요 원인 있습니다. 만성 간 부상 간 염증, 특징은 섬유 증 및 심한 경우 간 경 변, 암 및 궁극적으로 간부에. 현재 아무 치료도 제공 하 고 있지만 주요 발전 간 질병의 메커니즘을 이해 한, 새로운 치료도 여전히 시급히.
CDE 다이어트는 유도 및 장기 실험에서 그리고 지방 변경 또는 간 steatosis, 염증, 섬유 증, LPC 확산의 간세포 암 종6의 개발 연구에 대 한 단순, 시간-효과적이 고 쉽게 관리 모델 ,,1112,13,,<...

간 본문의 가장 큰 선 대사 기관 이며 많은 복잡 한 기능을가지고 있다. 간장에 대 한 주요 역할 소화, 대사, 해독, 혈액 플라스마 단백질 구성 요소 및 주민 대 식 세포 또는 Kupffer 세포 중재 면역의 생산 필수 영양소의 저장 포함 됩니다. 간 최대 총 질량의 70-90% 손실 됩니다 경우에 재생성 중대 한 기능이 있다. 급성 간 상해의 경우 본 부분 hepatectomy 또는 아 세트 아미노 펜 중독, 다음과 같은 높은 조정된 프로세스1에 손상을 복구 하 나머지 건강 한 hepatocytes 확산. 그러나,는 hepatocytes 만성 장기 바이러스 감염, 알코올 또는 무알코올 지방 간 질병, 부상 하는 염증 성 microenvironment 트리거 섬유 증 운전 간장 방사상 세포의 활성화와 cholangiocytes 또는 hepatocytes2,3,,45으로 차별화 하는 잠재력을 가진 간 조상 세포 (LPCs)의 확산. 정확한 기원을 LPCs, 간 재생, 그리고 hepatocarcinogenesis에 그들의 공헌의 분화 운명 강렬한 토론의 주제 그리고 가장 가능성이 부상 심각도 및 컨텍스트2에 따라 달라 집니다. 초기 재생 관련 이벤트의 순서는 또한 논쟁 적으로 토론, 간장 방사상 세포 활성화 및 매트릭스 리 모델링은 LPC 선호 틈새6, 다른 사람들의 세대에 대 한 필수적인 몇 가지 조사와 보고서 LPC 확장 및 소위 Ductular 반응 트리거 fibrogenesis7필요 됩니다. 질병의 진행을 조절 하는 모든 기본 요소를 이해 하 고 궁극적으로 환자8에 대 한 새로운 치료 전략을 개발 하는 시도에 상해 및 재생의 특정 측면을 연구 하는 수많은 동물 모델을 확인 하 고 있습니다.
콜린 결핍 및 ethionine 보충 (CDE) 식이 모델 원래 쥐에 사용 하기 위해 개발 되었고 나중 쥐9,10만성 간 부상 유도 대 한 수정. 콜린의 식이 결핍 결과 장애인된 어셈블리 및 아주 저밀도 지 단백질의 분 비. DL-ethionine hepatocarcinogen와 결합,이 처방 리드 로드, 지속적인 염증, 섬유 증 periportal, LPC 응답 과도 한 간 지방 및 간세포 암 개발11,12 장기 . 그러나 다른 마우스 긴장 염증, fibrogenic 및 LPC의 특유 한 본을 전시 하는 중요 한 것은,, 응답 역학13. 이 프로토콜 만성 간 부상 감 응 작용에 가장 일반적으로 사용 하는 C57BL/6J 쥐 근 친 마우스 변형을 설명합니다.
만성 간 질환 연구, 일반적인 분석 포함 되며 오신 뿐만 아니라 시리우스 레드 얼룩 콜라겐 증언, immunohistochemical, 또는 간장 세포 인구의 immunofluorescent 탐지를 시각화 하 여 조직학 평가 그리고 복잡 한 성장 인자와 사이토카인 네트워크14,15,,1617 를 통해 유도 세포 변화를 총괄 하는 간 microenvironment의 transcriptomic 분석 , 18.

<table><tbody><tr><td>생후 6주 된 수컷 C57BL/6J 마우스&nbsp;</td><td>서호주 동물 자원 센터, 머독, 워싱턴,&nbsp; 호주</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>10 Kg 스팀 컷 휘튼 채프&nbsp;</td><td>Specialty Feeds, 글렌 포레스트, 워싱턴, 호주&nbsp;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>관개용 물 1000ml 병(Baxter)&nbsp;</td><td>Surgical House, 퍼스, 워싱턴, 호주&nbsp;</td><td></td><td></td>AHF7114A</tr><tr><td>콜린 결핍 다이어트, 변형 (펠릿)&nbsp;</td><td>MP Biomedicals Australasia Pty Limited, WA, Australia 02960210</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DL-에티오닌&nbsp;</td><td>시그마-알드리치, 캐슬 힐, NSW,&nbsp; 호주&nbsp;</td><td>E5139-25G</td><td></td></tr><tr><td>케타밀 주사&nbsp;</td><td>Troy Laboratories Pty Limited, 글렌데닝, NSW, 호주&nbsp;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Ilum Xylazil-20 주사&nbsp;</td><td>Troy Laboratories Pty Limited, 글렌데닝, NSW, 호주&nbsp;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>27G x 1/2", 일반 벽 바늘&nbsp;</td><td>Terumo Australia Pty Limited, NSW, 호주&nbsp;</td><td>NN-2713R</td><td></td></tr><tr><td>주사기 테루모 1ml 및 10ml&nbsp;</td><td>Terumo Australia Pty Limited, 맥쿼리 파크, 뉴사우스웨일즈, 호주&nbsp;</td><td>1018242, 1018037</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek OCT 컴파운드&nbsp;</td><td>VWR International Pty Limited, Tingalpa, QLD, 호주&nbsp;</td><td>25608-930</td><td></td></tr><tr><td>중성 완충 포르말린&nbsp;</td><td>Amber Scientific, 미드베일, 워싱턴, 호주&nbsp;</td><td>NBF-2.5L</td><td></td></tr><tr><td>에탄올 절대 anaLaR normalpur&nbsp;</td><td>VWR International Pty Limited, Tingalpa, QLD, 호주&nbsp;</td><td>20821.33</td><td></td></tr><tr><td>Superfrost Plus 슬라이드&nbsp;</td><td>Grale Scientific Pty Limited, 호주 빅토리아주 링우드&nbsp;</td><td></td><td></td>SF41296SP</tr><tr><td>Dako 단백질 블록, 무세럼&nbsp;</td><td>Dako Australia Pty Limited, 노스 시드니, 뉴사우스웨일즈, 호주&nbsp;</td><td>&nbsp; X090930-2</td><td></td></tr><tr><td>Dako 항체 희석제&nbsp;</td><td>Dako Australia Pty Limited, 노스 시드니, 뉴사우스웨일즈, 호주&nbsp; &nbsp;</td><td>s0809</td><td></td></tr><tr><td>쥐 안티 CD45&nbsp;</td><td>eBioscience, 미국 캘리포니아주 샌디에이고&nbsp;</td><td>M0701&nbsp;</td><td>1/200 희석</td></tr><tr><td>토끼 안티 팬CK&nbsp;</td><td>Dako Australia Pty Limited, 노스 시드니, 뉴사우스웨일즈, 호주&nbsp; &nbsp;</td><td>Z0622</td><td>1/300 희석</td></tr><tr><td>염소 안티-토끼 (Alexa Fluor 488)</td><td>Life Technologies Australia Pty Limited, Mulgrave, VIC, Australia</td><td>A-11008</td><td>1/500 희석</td></tr><tr><td>염소 안티-랫트 IgG (Alexa Fluor 594)&nbsp;</td><td>Life Technologies Australia Pty Limited, 호주 빅토리아주 멀그레이브&</td><td>nbsp; A-11007</td><td>1/500 희석</td></tr><tr><td>ProLong Gold Antifade 시약과 DAPI&nbsp;</td><td>Life Technologies Australia Pty Limited, 호주 빅토리아주 멀그레이브&nbsp;</td><td>P36935&nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Picrosirius Red Stain Kit</td><td>Polysciences Inc., 미국 펜실베니아 워링턴&nbsp;</td><td>AB150681&EMSP;</td><td></td></tr></tbody></table>

murine 콜린 불충분 한, ethionine 보충 (cde) 다이어트 만성 간 상해의 모델

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented (CDE) Diet Model of Chronic Liver Injury

만성 간 질환, 바이러스 성 간염, 알코올 성 간 질환, 비 알코올 지방산 간 질환 등 지속적인 염증, 진보적인 파괴 및 간 실질, 간 조상 세포의 재생을 특징으로하는 확산, 그리고 섬유 증입니다. 모든 만성 간 질환의 말기 간 경 변, 간세포 암 종 개발을 위한 주요 위험 요소 이다. 공부 하 고 규제 하는 질병 개시, 설립, 및 진행 하는 프로세스, 여러 동물 모델에서에서 사용 됩니다. 여기는 콜린 결핍 및 ethionine 보충 (CDE) 마우스 모델의 불충분 한 콜린 차 우와 0.15% DL ethionine 보충 하는 식 수와 6 주 오래 된 남성 C57BL/6J 쥐 먹이 포함 6 주 시간 과정에 설명 합니다. 동물 건강 및 일반적인 몸 무게 손실 곡선의 모니터링은 설명 했다. 프로토콜 이후 혈 청 분석에 대 한 심장 찔린 하 여 CDE 취급 간 및 혈액 컬렉션의 총 검사를 보여 줍니다. 다음, 간 관류 기술과 표준 평가 대 한 다른 간 엽의 컬렉션은 포함 하 여, 표시 간 조직학 평가 되며 고 오신 또는 시리우스 레드 stainings, 간 세포 인구의 immunofluorescent 검색 뿐만 아니라 transcriptome 간 microenvironment의 프로 파일링. 이 마우스 모델은 염증 성 공부, fibrogenic, 및 간 조상 세포 역학 만성 간 질환을 통해 유도 하 고 테스트 이러한 프로세스 조절 수 있습니다 잠재적인 치료 에이전트를 사용할 수 있습니다 적합 합니다.

CDE 유도 만성 간 상해의 6 주 시간 과정 전반에 걸쳐 매개 변수 7 (유도 단계), 14, 21 (설립 단계) 및 42 (유지 보수 단계) 일에 평가 됐다. 제어 마우스에 비해, CDE 취급 생쥐 초기 적응 단계에 그들의 초기 체중의 20%를 잃었다 고 설립 및 유지 보수 단계 (그림 1)에서 체중을 회복 하는 경향이. 몸 무게는 반비례 상관 혈 청 알라닌 transaminase 수준, 간세포 상해 (그림 2)의 지표. 4 마이크로미터 얇은, 포 르 말린 고정 파라핀 끼워 넣어진 간 조직 섹션 hematoxylin와 간 아키텍처를 평가 하기 위해 오신 얼룩이 있었다. 건강 한 간은 간 실질을 형성 하는 중앙 정 맥에서 발산 hepatocytes의 질서 코드와 일반 건축 표시. 반면, CDE 취급 간 ...

여기는 콜린 결핍 및 ethionine 보충 (CDE) 다이어트의 먹이로 쥐에 만성 간 상해를 유발 하는 일반적인 방법에 설명 합니다. 상태 모니터링, 간 관류, 절연 및 보존 설명합니다. 6 주 시간 코스 간 부상, pathohistology, 섬유 증, 염증, 간 조상 세포 응답에 대 한 알릴 수 있다.

Murine 콜린 불충분 한, Ethionine 보충 (CDE) 다이어트 만성 간 상해의 모델

Chronic liver diseases, such as viral hepatitis, alcoholic liver disease, or non-alcoholic fatty liver disease, are characterized by continual ...

본 프로토콜의 전반적인 목표는 마우스에서 만성 간 손상을 유도하는 신뢰할 수 있는 방법을 제시하고, 6주간의 유도, 확립 및 유지 단계 동안 간 손상 파라미터를 분석하는 것입니다. 만성 간 손상을 위한 CDE 식단은 지방증(또는 지방간), 염증, 간 전구 세포 증식 및 간 섬유화를 안정적으로 유도합니다. 지정된 시점에서 혈청과 조직을 수집하고 분석함으로써 간 재생과 만성 간 질환 진행의 근간이 되는 분자 및 세포 과정을 추적할 수 있습니다.해당 기술들은 본 연구실의 박사후 연구원인 Jully Gogoi-Tiwari가 시연합니다. 콜린 결핍 식이 제공 및 식수에 DL-ethionine을 첨가하여 급성 및 만성 간 손상을 유도합니다. 지정된 시점에 마우스를 마취시킨 후, 심장 천자를 수행하여 간 손상의 혈액 기반 마커 분석을 위한 혈청을 수집합니다.간은 문맥을 통해 관류시킨 후, 추가 처리 및 분석을 위해 적출합니다. CDE 식이를 섭취한 마우스는 처음 2주 동안은 매일 관찰하고, 그 이후에는 3주마다 한 번씩 관찰합니다. 식수에 에티오닌을 첨가한 후에는 4°C에서 보관합니다.물병은 2~3일마다 교체하며, 생쥐는 필요할 때마다 보충되는 콜린 결핍 사료 펠릿을 자유롭게 섭취할 수 있도록 합니다. 깔짚으로는 눈에 보이는 곡물과 줄기를 모두 제거한 밀 짚을 사용합니다. 전반적인 외형, 자세, 사회적 상호작용, 그루밍 및 모질 상태, 체중을 포함하여 동물 건강 상태의 표준 지표를 모니터링합니다.CDE 처리된 마우스는 식이 요법에 적응하는 유도 단계 동안 초기 체중의 최대 20%까지 감소할 수 있으나, 이후에는 회복됩니다. CDE 식이를 섭취하는 마우스는 때때로 털이 기름지게 변하는 경우가 있습니다. 이는 그루밍 부족의 지표가 아니라 식단의 높은 지방 함량으로 인한 결과입니다.마우스의 체중을 측정하고 마취시킨 후, 마취가 충분히 이루어졌는지 확인하기 위해 발 withdraw reflex(발Withdraw Reflex)를 테스트합니다. 수술을 시작하기에 충분한 마취 깊이에 도달하면, 70% ethanol로 털을 적시고 복벽의 횡격막까지 수직 중앙 절개를 실시합니다. 심장에 더 쉽게 접근하기 위해 흉곽을 제거하여 흉강을 노출시킬 수 있습니다.그 후 심장 천자를 실시하여 심장이 허탈되는 것을 방지하기 위해 심실에서 혈액을 천천히 수집합니다. 수집된 혈액을 멸균 튜브로 옮긴 후 실온에서 응고시키며, 이후 저속 원심분리를 통해 혈청 샘플을 얻습니다. 장과 위를 조심스럽게 옆으로 밀어내어 문맥을 노출시킵니다.체액이 배출될 수 있도록 심장을 절개하고, 간의 모든 엽이 하얗게 변하여 완전히 관류되었음이 확인될 때까지 문맥에 멸균 인산염 식염수를 관류합니다. 그 후 간을 조심스럽게 분리하여 페트리 접시에 담고, 간 이외의 조직과 담낭을 제거합니다. 간의 무게를 기록한 후, 간을 각각의 엽으로 분리합니다.간엽 하나를 지름 몇 밀리미터의 작은 정육면체 형태로 추가 절단합니다. 정육면체 하나는 나중에 RNA 추출을 위해 별도의 튜브에 수집하고, 나머지 정육면체들은 향후 DNA 및 단백질 분석과 잠재적인 추가 RNA 추출을 위해 두 번째 튜브에 수집합니다. 이 튜브들은 장기 수집 후 가능한 한 빨리 액체 질소에 급속 냉동합니다.더 큰 엽은 공식 고정 후에 사용하며, 나중에 파라핀 임베딩을 거쳐 마이크로톰 절편 제작 및 조직학 및 면역조직화학 평가에 사용합니다. 다른 두 개의 엽은 조직 조각이 매트릭스로 완전히 덮이도록 확인하면서 크라이오 매트릭스에 임베딩합니다. 이 간 엽들은 이후 액체 질소에서 급속 냉동하여 크라이오스탯 절편 제작 및 면역형광 또는 공초점 현미경 실험에 사용합니다.효소 alanine transaminase는 간세포 손상의 바이오마커로서 혈청에서 측정될 수 있습니다. 건강한 동물은 모든 주요 시점에서 낮은 혈청 ALT 수치를 보이는 반면, CDE 처리된 마우스는 ALT를 혈류로 방출합니다. 이는 유도 단계에서 큰 정점을 보이며, 확립 및 유지 단계에서는 천천히 정상화됩니다.포르말린 고정 및 파라핀 임베딩된 간 조직은 간 조직학적 평가를 위해 헤마톡실린 및 에오신으로 염색할 수 있습니다. CDE 처리된 간은 유도 및 확립 단계에서 간 구조의 심각한 파괴와 많은 호염기성 세포의 실질 침윤을 보이며, 유지 단계에서는 정상화됩니다. 섬유화를 평가하기 위해, 포르말린 고정 및 파라핀 임베딩된 간 조직을 폴리아조 염료인 시리우스 레드로 염색하여 간의 콜라겐 침착을 시각화할 수 있습니다.유도 단계에서는 실질에 콜라겐이 축적되며, 확립 및 유지 단계에서는 정상화됩니다. Cryo matrix에 포매하여 급속 냉동시킨 간 조직을 Cryostat을 사용하여 약 7 µm 두께의 얇은 절편으로 절단할 수 있습니다. 이후 담관 및 간 전구세포 마커인 panCK와 염증 세포 마커인 CD45에 대해 면역형광 염색을 수행할 수 있습니다.사이토카인 및 성장 인자의 전사 수준이 초기에 증가하는 것을 관찰할 수 있습니다. 예를 들어, 종양 괴사 인자, 종양 괴사 인자와 유사한 약한 세포 사멸 유도 인자(TWEAK), 림프톡신 베타, 간세포 성장 인자, 변형 성장 인자 베타 및 인터루킨 6 등이 이에 해당합니다. 이 영상을 시청하신 후에는 만성 간 손상의 CDE 모델에 대해 충분히 이해하시게 될 것입니다.여러분은 간의 관류 및 분리 분석 과정과 더불어, 6주간 콜린 결핍-에티오닌 보충 식이(choline deficient, ethionine supplemented diet)를 섭취한 마우스의 간에서 유도된 조직학적, 세포적 및 분자적 변화에 대한 지식을 습득하셨을 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

주요 인간 autoantigen을 표현 아데노 바이러스와 생쥐의 감염은 CYP2D6의 광범 간염, 섬유증 및 생성을 특징으로 면역 - 매개 간 질환의 영구적인 형태로 제 2 형자가 면역 간염 결과에서 고통받는 환자 세라 인정 P450 2D6 (hCYP2D6)를 시토크롬 특정 면역 반응.

CYP2D6 동물 모델 : 마우스에 면역 간염을 유발하는 방법

이 비디오는 쥐 모델에서 장 절제에 대한 자세한 프로토콜을 설명합니다. 이 기술은 쥐 장에서 회장절제술로 인한 담즙 흡수 장애, 과다 축적 및 독성에 대한 통찰력을 제공합니다.

쥐 회장 절제 모델: 쥐 모델에서 회장절제술로 인한 담즙 대사 연구

담즙 흐름의 중단은 형태학적 변화의 특징적인 시간 의존적 순서와 함께 심각한 염증성 담즙 유발성 간 손상을 초래합니다. 여기에서는 21일에서 28일 후에 강한 섬유화 반응을 유도할 수 있는 마우스의 총담관 수술 결찰에 대한 프로토콜을 제시합니다.

마우스의 담관 결찰 : 폐쇄성 담즙에 의한 염증성 간 손상과 섬유화의 유도

쥐에서 간 섬유증의 동물 모델을 제작하는 방법을 설명하고, 간의 조직학적 검사를 통해 섬유화의 정도를 평가합니다. 이 모델은 간 질환의 발병을 연구하고 잠재적인 항섬유화제의 효능을 테스트하는 데 사용할 수 있습니다.

쥐에이 dimethylnitrosamine 유도 된 간 섬유화 모델

간단 하 고 신뢰할 수 있는 식이 유발 설치류 동물 모델에 대 한 무 알콜 지방 각 막 염 (내 쉬)에 대 한 설명, 동물의 비 SPF 주택을 통해 달성 하 고 특정 높은 뚱뚱한 다이어트의 관리. 우리는 마우스를 환경 세균에 노출 시 킴으로써 인간 면 역학적 조건을 다시 캡처하는 간 및 지방 면역 세포 하위 세트의 식별을 설명 합니다.

타입-2 당뇨병과 관련 하 여 무 알콜 수 막 염을 위한 진보 된 뮤 린 모형

이 프로토콜의 목표는 간 손상을 유발하지 않고 오히려 기존의 간 손상을 악화낮은 수준의 독성 노출의 뮤린 모델을 개발하는 것이었습니다. 이 패러다임은 더 나은 인간의 노출과 안전한 것으로 간주되는 독성 농도에 노출시 발생하는 미묘한 변화를 재현.

환경과 비만 상호 작용의 모델로 비닐 염화물 과 고지방 다이어트

이 프로토콜은 오로 위관을 통해 CCl4 노출을 통해 급성 간 손상 (ALI)을 유도하는 일반적이고 실행 가능한 방법을 설명합니다. CCl4 노출은 간에서의 생체 변환 동안 반응성 산소 종의 형성을 통해 ALI를 유도합니다. 이 방법은 ALI의 병리생리학을 분석하고 다른 간 보호 전략을 검사하는 데 사용됩니다.

탄소 테트라 클로라이드를 통해 쥐에 급성 간 상해를 유도 (CCl4)오로 위관을 통해 노출

이 프로토콜은 마우스에서 가능한 정밀 절단 간 조각의 생산을위한 간단하고 신뢰할 수있는 방법을 제공합니다. ex vivo 조직 샘플은 여러 날 동안 실험실 조직 배양 조건 하에서 유지될 수 있으며, 간 병리학을 검사하는 유연한 모델을 제공합니다.

뮤린 정밀 절단 간 슬라이스 간 생물학의 Ex Vivo 모델로

우리는 담도 폐쇄증(BA)에 대한 바이러스 유발 간 섬유증 기계론적 연구에 적합한 동물 모델과 향후 BA 치료를 위한 플랫폼을 제공하는 만성 간 섬유증의 마우스 모델을 확립했습니다.

담도 폐쇄증 연구를 위한 만성 간 섬유증의 마우스 모델

대사 기능 장애, 간 유전자 발현 변화 및 진행성 섬유증 3기로 진행되는 섬유증을 포함하여 인간 MASLD와 유사한 간 조직병리학적 변화를 동반한 대사 기능 장애 관련 지방성 간 질환(MASLD)의 마우스 모델. 이 모델은 MASLD 병태생리학 연구 및 새로운 치료법의 전임상 연구에 사용할 수 있습니다.

섬유증을 동반한 대사성 기능 장애 관련 지방성 간 질환의 마우스 모델

학습하세요 콜린 불충분 및 에티오닌 보충(CDE) 다이어트를 이용한 생쥐 만성 간 손상 유도 방법을 배우세요. 이 프로토콜은 지방간, 염증, 간 전구세포 증식 및 섬유화를 유발하는 신뢰할 수 있는 모델을 제공합니다.

Murine 콜린 불충분 한, Ethionine 보충 (CDE) 다이어트 만성 간 상해의 모델

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