건강 한 아이에서 미생물 분석을 위한 구두 Biofilm 샘플링

이 절차의 전반적인 목표는 건강한 어린이의 마이크로바이옴 분석을 위한 구강 생물막 샘플링을 위한 표준화된 방법을 제시하는 것입니다. 이것은 먼저 기구와 재료를 준비하고 살균함으로써 달성됩니다. 다음으로, 아동은 생물막 샘플링을 준비합니다.

그런 다음 치은하 열구, 전정 주름의 점막, 타액의 세 가지 부위에서 생물막 샘플링을 수행합니다. 마지막으로, 샘플이 체계적으로 저장됩니다. 궁극적으로 구강 마이크로바이옴 분석은 임상적, 과학적 질문에 답하기 위해 수행될 것입니다.

안녕하세요, 저는 치열 교정 전문의인 Elizabeth입니다. 제 연구는 교정 치료에 수반되는 구강 마이크로바이옴 변화에 초점을 맞추고 있습니다. 구강 생물막의 샘플링은 까다로울 수 있습니다.

치은하 열구의 공간은 특히 어린이의 경우 제한적입니다. 당사의 마이크로바이옴 데이터를 전 세계 연구와 비교한 결과, 표준화된 샘플링 프로토콜이 부족하다는 것을 발견했습니다. 이 비디오를 통해 이 격차를 메우기 위한 첫 번째 단계를 밟습니다.

근관 치료에 일반적으로 사용되는 보정되고 멸균된 종이 점은 길이를 표준화하기 위해 첫 번째 링 표시에서 절단됩니다. 절단 후에는 DNA와 RNA 오염을 방지하기 위해 종이 점에 UV 방사선을 조사해야 합니다. 보관용 튜브는 고압 멸균 처리되고 UV 조사됩니다.

생물막 샘플링 전에 코코아 버터를 바르는 것부터 시작하여 치아를 완전히 청소해야 합니다. 그런 다음 치아는 플라그 노출로 얼룩집니다. 염색 후 입안을 물로 헹굽니다.

전동 칫솔과 물로 제대로 양치질합니다. 치약을 바르지 않으면 구강 생물막이 변할 수 있습니다. 뺨과 혀 견인기는 입을 벌리고 건조하게 유지하는 데 사용됩니다.

견인기를 배치하려면 어린이의 불편 함을 최소화하고 절차를 가능한 한 짧게 유지하기 위해 숙련되고 꾸준한 손이 필요합니다. 멸균 치과 핀셋이 사용되며 샘플링 부위는 시술 내내 영향을 받지 않습니다. 치아는 종이 포인트 샘플링 중 치은상액의 흡수를 방지하기 위해 멸균 면봉으로 세척하고 건조합니다.

구강 내 생물막 샘플링을 위해 다양한 방법을 사용할 수 있습니다. 어린이의 치은하 열구의 공간이 제한되어 있기 때문에 종이 포인트 샘플링이 선택 방법입니다. 종이 점은 20초 동안 정의된 길이 최대 4mm까지 접선으로 삽입됩니다.

접합 상피에 외상을 입히지 않도록 특별한 주의를 기울여야 합니다. 그런 다음 종이 포인트는 세 번째 표시에서 4mm의 표준화된 길이로 절단됩니다. 종이 포인트를 동일한 사이트에 동시에 삽입하거나 여러 사이트에서 샘플을 풀링할 수도 있습니다.

건조 필드 장치는 점막 및 타액 샘플링을 위해 제거됩니다. 종이 포인트는 전정 주름에서 점막 생물막을 샘플링하는 것과 같은 방식으로 적용할 수 있습니다. 타액 생물막은 자극되지 않은 타액을 뱉음으로써 수집할 수 있습니다.

연구 설계에 따라 종이 포인트는 단일, 통합 또는 병렬 샘플로 저장됩니다. 색상으로 구분된 보관 시스템은 추가 샘플 관리를 용이하게 합니다. 마지막으로, 샘플은 마이크로바이옴 분석을 위해 섭씨 영하 80도에서 보관됩니다.

치주 병원성 박테리아를 빠르고 정확하게 식별하기 위해 여러 상용 키트가 개발되었습니다. 종이 포인트는 전문 실험실로 보내집니다. 그런 다음 DNA 추출, 준비 및 분석이 3시간 이내에 수행됩니다.

DNA는 마이크로바이옴 연구를 위한 연구에도 사용할 수 있습니다. 예를 들어, 차세대 염기서열분석을 통해 완전한 마이크로바이옴 데이터 세트를 얻을 수 있습니다. 특정 박테리아 종의 전반적인 상대적 풍부도를 분석할 수 있으며, 조건 변화로 인한 미생물총(microbiota)의 변화도 분석할 수 있습니다.

이 막대 차트와 히트 맵은 문과 순서 수준에서 치은하 미생물총(subgingival microbiota)의 상대적 풍부도를 표시합니다. 시간 경과에 따른 미생물 구성의 차이, 개체 간 또는 개체 간의 비교 또는 다른 샘플링 방법이 히스토그램으로 표시됩니다. 이 그림은 서로 다른 분류 수준에서 두 가지 샘플링 방법인 모드 A와 모드 B를 비교한 결과를 보여줍니다.

차세대 염기서열분석으로 생성된 값의 통계적 분석은 표로 표현될 수 있습니다. 이 표에 표시된 것과 같이 다른 시점은 다른 분류 수준에서 분석할 수 있습니다. P-값은 유의미한 결과를 증명하기 위해 계산됩니다.

마지막으로, OTU 수준의 구강 마이크로바이옴은 주요 좌표 분석을 통해 시각화할 수 있습니다. 이 그림은 5개 피험자의 개인 간 및 개인 간 차이를 보여줍니다. 특정 그룹의 클러스터링은 마이크로바이옴 구성의 변화를 보여줄 수 있습니다.

이 3D 애니메이션은 사례 대조군 연구의 결과를 보여줍니다. 빨간 점이 경우입니다. 파란색 점은 컨트롤입니다.

T3에서 교정 중재 후 사례의 명확한 클러스터링, 큰 빨간 점은 마이크로바이옴의 변화를 시각화합니다. 대조군을 나타내는 파란색 점이 고르게 분포되어 있습니다. 이 방법은 건강한 어린이의 치은하 열구에서 임상 생물막 샘플링에 대한 통찰력을 제공할 수 있습니다.

우리는 이 취약한 구획에 가장 적합한 종이 포인트를 선택했습니다. 이 비디오에서는 영구적인 조건에만 이 방법을 적용했습니다. 그것은 또한 혼합 또는 성숙한 상태에 적용 할 수 있습니다.

일부 환자의 경우 동일한 프로토콜에 따라 치주가 질환된 부위를 샘플링할 수도 있습니다. 안녕하세요, 제 이름은 바바라이고 분자 미생물학자입니다. 실험실에서 생물막을 분석할 때는 편향되지 않은 임상 시료 라이브러리에 의존해야 합니다.

구강 미생물 연구의 학제 간 분야의 각 단계는 완전히 표준화되어야 합니다. 그리고 한 가지 더 중요한 사실이 있습니다. 팀에서만 성공할 수 있습니다.

그러니 항상 동료를 친절하게 대하십시오.