Name: Deformability 및 Ektacytometry에 의해 혈액이 질 레드 셀 측정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 12 s
Description: 학습하세요 적혈구 변형성과 세포 이질성을 ektacytometry로 측정하는 방법을. 이 기법은 겸상적혈구빈혈 등 혈액 질환의 치료 반응을 모니터링하는 데 활용됩니다.

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이 작품은 교내 프로그램 연구는 국립 연구소의 당뇨병, 소화 및 신장 질환 및 국가 심 혼, 폐 및 혈액 연구소 건강의 국가 학회에 의해 지원 되었다. 본 계약 작가의 전적인 책임 하 고 반드시 국립 보건원의 공식 의견을 대표 하지는 않습니다.

이 연구에 모든 과목 했다 헬싱키의 선언 및 국가 학회 건강 기관 검토 위원회의 승인 프로토콜에 따라 서 면된 동의.
1.는 ektacytometer 설정
<ol><li>낮은 높은 osmolar polyvinylpyrrolidone (PVP) 솔루션을 청소 솔루션에서 튜브를 연결 합니다. 높은 osmolar 솔루션을 낮은 osmolar 솔루션 0 osmolar 튜브와 500 osmolar 튜브를 연결 하는 주의 해야 합니다. 참고: 7.25-7.45 25 ° C에서의 pH와 점성 37.0 ±에서 27.0와 33.0 centipoise (cP) 사이 낮은 osmolar PVP 솔루션 킬로그램 (mOsm/kg) 당 35 및 55 milliosmoles 사이 osmolality 있어야 0.5 ° c. 높은 osmolar PVP 솔루션 37.0 ° 764, 804 mOsm/kg, 25 ° C에서 7.25-7.45의 pH와 27.0 ~ 33.0 cP의 점도 측정 사이 osmolality 있어야 0.5 ° c.</li>
	<li>컵에 밥이 완전히 인하 됩니다 확인 하십시오. 소프트웨어를 시작 하 고 프라임 컴퓨터 (하드웨어 확인| IO 계측). 악기 못쓰게 주기 완료 허용. 주기가 완료 되 면 밥 컵에서 들어올리고는 밥과 컵 낮은 린 트 청소 조직을 완전히 건조 합니다. 참고: 잔여 물 적혈구, 간섭 생산 lyse 것입니다.</li>
</ol>2. 전단 응력 증가의 기능으로 deformability를 측정
<ol><li>적절 한 항 응고 제를 포함 하는 유리병에 혈액을 (1 mL는 이러한 기법을 수행 하기 위해 충분 한 보다는 더 적은 복제)를 가져옵니다. 참고: EDTA 끝났습니다 선호 덤플링을 적은 영향 hemorheological 매개 변수를 있기 때문에. 33 실 온 혈액의 6 시간 이내 측정을 수행에서 유지 혈액을 그립니다.</li>
	<li>부드럽게 여러 번 유리병을 반전 하 여 테스트 하기 전에 전체 혈액 샘플을 혼합. Pipetting으로 iso osmolar PVP 솔루션의 5 ml 전체 혈액의 25 µ L을 추가 하 고 유리병 뚜껑 여러 번 반전으로 부드럽게 혼합. Iso osmolar PVP 솔루션에서 있어야 합니다 284, 304 mOsm/kg, 7.3-7.4 25 ° C에서의 pH와 27.0 ~ 33.0 cP의 점도 osmolality 37.0 ± 0.5 ° c.</li>
	<li>소프트웨어에서 주 메뉴에서 deformability을 선택 합니다. 새로운 분석을 만들고 실험 세부 사항 추가 (Deformability | 원하는 세부 정보를 추가 | 그래).<ol>
<li>Ektacytometer 뚜껑, 밥은 완전히 컵으로 낮 췄 다 고 컵도 확인.</li>
		<li>Pipetting으로 컵 밥 사이 공간으로 PVP 피 솔루션의 1 mL를 추가 합니다.</li>
		<li>약간 샘플을가지고 밥을 올립니다. 모든 거품 솔루션을 밖으로 이동 될 때까지 기다립니다 다음은 ektacytometer에 뚜껑을 닫습니다. 필요한 경우, 거품을 제거 도움을 열망 단추를 누릅니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>소프트웨어에 따라 스크롤 막대 화살표를 이동 하 여 200 이득 조정 (참고 참조). 온도 37 ° C에서 안정적 이며 회절 이미지 안정, 보도 (시작) 시작 합니다. 참고: 많은 연구에 대 한 좋은 회절 이미지를 얻을 수 있습니다 건강 한 혈액 (헤모글로빈 농도 &gt; 12.0 g/dL, 80-96 fL의 의미 미 립 자 볼륨 및 33-36 g/dL의 의미 미 립 자 헤모글로빈 농도)에서 200로 설정 카메라 이득. 낫 세포 빈 혈의 혈액의 연구, 4.5 cm 회절 이미지를 생성 하기 위해 카메라 이득 조정 제안 되었습니다 연구와 실험실 결과의 비교를 허용 하도록 기본 설정으로. 9
</li>
	<li>그들은 원형, 타원형 유지 되도록 데이터 수집 진행 또는 다이아몬드 모양으로 회절 패턴을 관찰 합니다. 데이터 수집 완료 되 면 저장 하거나 보고서를 인쇄 (파일 | 저장 또는 파일 | 인쇄). 이 맥스와 SS 값은 자동으로 해당 사용자 지정 하는 신장 인덱스와 함께 보고 됩니다 또는 기본 ½ 전단 응력. 데이터 또한 소프트웨어에 의해 자동으로 저장 됩니다.</li>
	<li>끝에서 컴퓨터 모니터 (클린)에 대화 상자에 있는 깨끗 한 옵션을 누릅니다. 샘플 발음 후 악기 깨끗 한 사이클 동안 공간으로 이온된 수를 분출 하 여 컵과 밥 사이의 공간을 씻어. 깨끗 한 주기 완료 되 면 밥 컵에서 올리고 완전히 건조 한 밥과 컵 낮은 린 트 청소 조직 (중요: 잔여 물 간섭 생산 붉은 세포를 lyse 것입니다).</li>
	<li>메인 페이지 (메인 메뉴)를 소프트웨어에서 메인 메뉴 버튼을 클릭 합니다.</li>
</ol>3. 측정 세포질이
<ol><li>부드럽게 여러 번 유리병을 반전 하 여 테스트 하기 전에 전체 혈액 샘플을 혼합. 피펫으로 25 µ L iso osmolar PVP 솔루션의 새로운 5 mL 유리병에 전체 혈액의 유리병 뚜껑과 반전 혼합물이 동 질 때까지 부드럽게 혼합.</li>
	<li>주 메뉴에서 deformability를 선택 합니다. 새로운 분석을 만들고 실험 세부 사항 추가 (Deformability | 원하는 세부 정보를 추가 | 그래).<ol>
<li>Ektacytometer 뚜껑, 밥은 완전히 컵으로 낮 췄 다 고 컵도 확인.</li>
		<li>피펫으로 컵 밥 사이 공간으로 PVP 피 솔루션의 1 mL.</li>
		<li>모든 거품 솔루션을 밖으로 이동 될 때까지 기다립니다 다음은 ektacytometer에 뚜껑을 닫습니다.</li>
		<li>안정적인 회절 이미지를 화면에 있는지 확인 합니다. 3.8 c m 회절 높이 생성 될 때까지 소프트웨어에 따라 스크롤 막대 화살표를 이동 하 여 카메라 이득을 조정 합니다. 눈금자를 사용 하 여 컴퓨터 화면에서 이미지의 높이 확인 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>온도 37 ° C에서 안정적 이며 회절 이미지 안정, 보도 (시작) 시작 합니다.</li>
	<li>그들은 원형, 타원형 또는 다이아몬드 모양 유지 되도록 데이터 수집 진행으로 회절 패턴을 관찰 합니다. 데이터 수집 완료 되 면 저장 하거나 보고서를 인쇄 (파일 | 저장 또는 파일 | 인쇄).</li>
	<li>끝에서 컴퓨터 모니터 (클린)에 대화 상자에 있는 깨끗 한 옵션을 누릅니다. 샘플 발음 후 악기 깨끗 한 주기에 남아 있는 동안 그것에 물 총 병에서 이온된 수를 분출 하 여 컵과 밥 사이의 공간을 씻어. 깨끗 한 주기 완료 되 면 밥 컵에서 올리고 완전히 건조 한 밥과 컵 낮은 린 트 청소 조직 (중요: 잔여 물 간섭 생산 붉은 세포를 lyse 것입니다).</li>
	<li>2.1-2.5 단계를 반복 하 고 카메라 이득 4.5 cm 회절 패턴 높이 (단계 2.2)를 조정 합니다.</li>
	<li>2.1-2.5 단계를 반복 하 고 카메라 이득 5.4 cm 회절 패턴 높이 (단계 2.2)를 조정 합니다.</li>
	<li>끝에, 소프트웨어 (메인 메뉴)의 메인 페이지로 돌아갑니다 메인 메뉴 버튼을 클릭 합니다.</li>
	<li>이 최대 백분율에 따라 회절 패턴 왜곡의 정도 확인 하려면 다음 방정식 (동일한 방정식 수행할 수 있습니다 4.5 cm 회절 패턴 높이에서 데이터와 원하는 경우)를 사용 합니다. <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/56910/56910eq1v2.jpg">
</li>
	<li>마찬가지로, 회절의 정도 결정 하기 위해 패턴 왜곡 사용에 따라 s s 1/2 보고 s s 1/2 값으로 동일한 방정식: <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/56910/56910eq2v2.jpg">
</li>
</ol>4. 삼 투 그라데이션 ektacytometry
<ol><li>1.1에 설명 된 대로 샘플을 가져옵니다. 부드럽게 여러 번 반전으로 테스트 하기 전에 전체 혈액 샘플을 혼합. Pipetting으로 5 mL iso osmolar PVP 유리병에 전체 혈액의 250 µ L을 추가 하 고 유리병 뚜껑 반전 혼합물이 동 질 때까지 부드럽게 혼합.</li>
	<li>메인 메뉴 (Osmoscan)에서 osmoscan를 선택 합니다. 혈액 PVP 솔루션 컴퓨터의 왼쪽에 바늘 아래를 포함 하는 유리병을 놓습니다. 유리병의 바닥 접촉 될 때까지 바늘을 낮춥니다. 튜빙 그라데이션 생산을 위한 낮은 및 높은 osmolar 솔루션에 제대로 연결 되어 있는지 확인 합니다. ektacytometer에 뚜껑 닫고 혈액 튜브를 입력을 볼 수 있도록 아래쪽에 문을 엽니다.</li>
	<li>누르고 새 분석 유형 실험 세부 사항에 (Osmoscan | 새로운 분석 | 원하는 세부 정보를 입력 | 그래). 소프트웨어에 그것을 제어 하는 화살표를 이동 하 여 200 카메라 이득 조정 하 고 혈액은 악기 아래 배관에서 컵을 입력 볼 수 때까지 실행 하는 컴퓨터를 허용.<ol>
<li>일단 피 컵 들어갔습니다 이며 안정적인 회절 패턴 이미지를 컴퓨터 화면에, 시작 데이터 수집 지금 시작을 눌러 (지금 시작) 대화 상자에서 단추.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Ektacytometer 약 500 mOsm/kg, 최대 데이터를 수집할 수 있도록 다음 악기를 중지 합니다. 저장 하거나 보고서를 인쇄 (파일 | 저장 또는 파일 | 인쇄). 데이터 자동으로 저장 됩니다.</li>
	<li>오래 된 PVP 혈액 유리병을 제거 합니다. 깨끗 한 유리병을 포함 하는 이온된 수로 교체. 바늘 아래 배치, 유리병의 바닥 이어지도록 합니다 바늘을가지고 버튼을 누릅니다는 린스 헹 굼 (린스) 그라데이션 시스템 대화 상자에서.</li>
	<li>린스는 완료 되 면 컴퓨터 모니터 (클린)에 대화 상자에 있는 깨끗 한 옵션을 누릅니다. 깨끗 한 주기 완료 되 면 밥 컵에서 올리고 완전히 건조 한 밥과 컵 낮은 린 트 청소 조직 (중요: 잔여 물 간섭 생산 붉은 세포를 lyse 것입니다). 참고: Osmoscan 보고서는 삼투성 기온 변화도에서 신장 인덱스를 제공합니다. 이 분, O (이 분),이 최대, O (이 최대), 하이퍼이 O 하이퍼는 자동으로 생성 하 고 보고서에 포함. 9 건강 한 지원자에서 혈액에서 얻은 삼 투 그라데이션 ektacytometry 매개 변수의 범위는:이 분 0.12-0.196 임의의 단위 (거리); O 분 117-144 mOsm/kg; 이 최대 0.551 0.573 거리; O (이 최대) 272-312 mOsm/kg; 이 하이퍼 0.278-0.286; O 하이퍼 454-505 mOsm/kg 기준입니다.</li>
</ol>5입니다. 해제는 ektacytometer
<ol><li>종료 하기 전에 악기를 제대로 청소.<ol>
<li>이렇게 하려면 연결할 튜브 낮은 및 높은 osmolar 솔루션에서 y-어댑터 청소 솔루션을 선도. 컴퓨터의 왼쪽에 바늘 아래 청소 솔루션을 포함 하는 유리병을 배치 하 고 유리병의 바닥 접촉 될 때까지 바늘을 내립니다. 컵에 밥이 완전히 인하 됩니다 확인 하십시오.</li>
		<li>소프트웨어, 그리고 보도 하루 깨끗 한 대화 상자 컴퓨터 모니터의 끝에 시작 하는 가까이 (가까이| 시작). 완전히 청소를 장비를 수 있습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>폐 병에 튜브를 분리 하 고 낭비를 삭제 하는 악기에서 그것을 제거. 밥을 완전히 건조. 컴퓨터를 끕니다.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 없다.

Ektacytometry 기법 설명 간단 하 고 잘 자동화, 유효 하 고 재현 가능한 결과 보장 있습니다. 그럼에도 불구 하 고, 몇 가지 중요 한 단계가 존재 한다. 혈액의 적절 한 온도 제어는 중요 하다. 8 시간 이상 실 온에서 보관 SS ½에 영향을 미칠 수 있습니다 값. 34 기계의 온도 37 ° C에서 안정적인 확보도 중요 하다, 중단 매체의 점도 온도 의존. 혈액 않는 이들은 관심의 실험적인 매개 변수 감소 deformability 비 산소 또는 부분적으로 산소 샘플에서 발생을 피하기 위해 완벽 하 게 산소 되어야 한다. 35 의 관점에서의 계측, 악기의 적절 한 청소 중요 하다 되도록 거기 아무 PVP 튜브 또는 밥의 진입점에 남은 그것 건조 및 블록 유체 흐름에 따라 악기를 통해 강화 됩니다. 이러한 세부 사항에 주의 정확한 결과 홍보 하 고 좋은 실행 조건에 악기를 계속 것입니다.
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Ektacytometry 레드 셀 deformability 전단 응력 (파스칼 (Pa)에서 측정 되는) 또는 중간 osmolality 중단에 변경에 대 한 응답에서의 편리한 측정을 제공 합니다. 레드 셀 deformability의 관련 매개 변수는 최대 신장 인덱스 (이 최대), 증가 전단 응력 및 전단 응력 ½ 레드 셀의 최대 deformability (SS ½)의 측정, 절반 최대한 달성 하는 데 필요한 전단 응력 deformability입니다. 1 삼 투 그라데이션 ektacytometry 여러 가지 유익한 매개 변수가 있다. 이러한 신장 인덱스 최소 (이 분), 표면 볼륨 비율의 측정 (O 분) 발생을 osmolality 등 삼 투 취약성의 측정입니다. 이 맥스와는 (O (이 최대)) 발생 osmolality 막 유연성 및 셀 영역에 정보를 제공 합니다. 삼투성 기온 변화도의 마 팔에서 절반 최대한 신장이 하이퍼로 표현 됩니다. 이 하이퍼와 osmolality를 발생, O 하이퍼, 헤모글로빈 농도 의해 결정 되는 붉은 세포의 세포내 점성에 대 한 정보를 제공 합니다. 2 , 3 이기종 혈액에서 측정 deformability sickled 붉은 혈액 세포와 같은 경직 된 셀 제대로 변형 세포 전단 응력을 증가에 대 한 응답 같은 흐름의 방향으로 정렬 되지 않습니다는 사실에 의해 복잡 합니다. 특성 타원형 회절 이미지를 생산 하는 대신 딱딱한 세포 다이아몬드 모양의 회절 패턴 변형 세포에 의해 생산 하는 타원에 중첩 하는 경우에 구형 패턴을 생성 합니다. 4 , 5 , 6 둥근 패턴 irreversibly sickled 세포 밀도 원심 분리에 따라 세포의 고립 된 분수에 ektacytometry를 수행 하 여 해당 표시 되었습니다. 6 신장 인덱스 계산 포함; 타원의 길고 짧은 축 측정 다이아몬드 모양 따라서 짧은 축의 폭을 증가 시켜 신장에 있는 명백한 감소를 생성 합니다. 7 그것은 이전 보였다 회절 패턴 왜곡의 정도 겸 상 적혈구 헤모글로빈 (HbS)의 비율와 겸 상 적혈구 빈 혈 환자에서 혈액에서 sickled 셀의 비율 상관. 5 회절 패턴 왜곡의 정도 복잡 한 수학적 분석에 의해 얻어질 수 있다. 8 그것은 또한 얻을 수 있습니다는 ektacytometer에 카메라 조리개의 개방 또는 회절 패턴 높이 변경 피팅 소프트웨어의 회색 레벨을 조정 하 여. 그러나 5 , 회색 레벨을 조정 하는 방법에 관한 세부 사항은 잘 정의 하 고 카메라 조리개는 상용 ektacytometer의 최신 세대에 쉽게 액세스할 수 없습니다. 이러한 문제를 회피, 쉽게 접근할 수 있는 카메라 이득 회절 패턴 높이 조정 하려면 사용할 수 있습니다. 9 이 메서드를 사용 하 여 세포질이 추정, 회절 패턴 왜곡의 정도 낫 세포 빈 혈 환자의 혈액에 태아 헤모글로빈의 비율으로 상관 될 수 있다. 10 여러 삼 투 그라데이션 ektacytometry 매개 변수는 마찬가지로 연관 태아의 비율 또는 겸 상 적혈구 헤모글로빈 낫 세포 빈 혈 환자에서 혈액에서. 회절 패턴 왜곡 상관 관계 가능성이 헤모글로빈 성분 엄밀 하 고, 비 변형 세포의 비율에의 기여를 반영합니다. 추가 관심의 전체 삼 투 그라데이션 ektacytometry 프로필 낫 세포 위기 동안 순환에서 밀도 세포의 비율에 해당 하는 복 형 변화를 겪 습. 11
Ektacytometry는 마찬가지로 다른 여러 가지 장애의 연구에 유용 합니다. 삼 투 그라데이션 ektacytometry spherocytosis 유전, 유전 elliptocytosis 유전 pyropoikilocytosis 등 상속된 붉은 세포 막 장애에 대 한 진단 이다. 3 , 12 , 13 , 14 감소 deformability 철 결핍에서 발생합니다. 15 "저장 병 변" 혈액의 ektacytometry 및 병 변 특성을 조사 하는 미래 연구를 고용 했다와 은행된 혈액의 저장 동안에 그것의 대형을 방지 하기 위해 개입을 누릴 가능성이 있는 여기에 제시 하는 기술. 16 감소 레드 셀 deformability microvascular 질병 당뇨병에 상관도 있다. 17 최근 연구 혈당을 연결, 레드 셀 하는데 농도 및 삼 투 취약성 제안 이러한 요인 microvascular 질병의 발달에 중요 한 있을 수 있습니다. 18 Ektacytometry 연구는 현재 진행이 가설을 조사 (Parrow와 레빈, 데이터를 게시). 혈액 단계 말라리아 감염 레드 셀 deformability 사의 또 다른 흥미로운 번가입니다. 세포질 deformability의 변형 체 falciparum 감염 schizont 단계로 반지 무대에서 기생충의 세포내 성숙의 48 시간 동안 극적으로 적혈구 감소. 증거는이 감소 deformability 기생충의 성숙에 따라 반대입니다 나타냅니다. 반전 순환에 감염 된 세포의 출시와 일치 한다. 감소 deformability 레드 셀의 격리를 홍보 하는 변형 체 단백질에 의해 중재 될 생각 이다. 19 이러한 연구 측정 적혈구 deformability 및 삼 투 그라데이션 매개 변수는 관련 된 임상적으로 중요 한 조건의 작은 샘플링을 나타냅니다. 연구의 몇 가지 추가 영역 존재 한다.
레드 셀 deformability를 측정 하기 위한 대체 기술은 광자의 물리적 속성을 사용 하 여 하나 이상의 방향으로 단일 붉은 세포를 스트레칭 하는 (레이저 트랩 라고도 함) 하는 광학 족집게를 포함 한다. 20 이 기술은 단일 적혈구, deformability 측정의 이점이 있다 하지만 강제로 교정에 몇 가지 불확실성 연구 21 에서 상당한 변화를 생산 하고있다 및 데이터 분석은 노동 집약 될 수 있습니다 하지 않는 한 자동. 22 micropipette 포부, 부정적인 압력을 사용 하 여 한 적혈구는 micropipette에 발음, 세포의 deformability를 측정 하 사용 되었습니다 또한. 7 , 23 레드 셀을 발음 하는 데 필요한 압력 같은 여러 측정 레드 셀의 다른 특성을 정의 하는 각 측정 가능 하다. 23 원자 힘 현미경 레이저 빔 편향도 지시자로 붉은 세포의 표면 따라 외팔보 편향의 측정에 의해 막 강성을 측정 하는 높은 해상도 기술입니다. 24 이러한 기술을 개별 적혈구에 대 한 정보를 제공, 붉은 혈액 세포의 인구에 있는 변화를 측정 하 고, 일반적으로, 상당한 기술력을 요구에 쉽게 적응 하지.
욕망 개인 및 세포의 인구를 동시에 샘플링을 자동화 및 마이크로 어레이 기반 방법의 개발을 주도하 고 있다. Ektacytometry, 같은 rheoscopy deformability 전단 응력의 기능으로 측정 하지만 이미지는 현미경을 통해 직접 취득. 25 높은 넣어 통해 분석, 자동된 세포 이미징은 고용은 rheoscope를 사용 하 여 deformability 배포판을 생산 하. 26 세포질이 건강 한 제어 대상에서 데이터를 사용할 수 있는 경우이 방법으로 측정할 수 있습니다. 27 마이크로 기술 또한 단일 셀;의 높은 넣어 통해 분석에 대 한 허용 여과,28 셀 교통 분석기,29 는 작은 통해 적혈구 흐름에 필요한 시간을 측정 하 고 오히려 적혈구 환승에 필요한 압력을 측정 하는 대안의 적응을 사용 하 여 여러 디자인 시간 30 보다 개발 되었습니다. 개별 셀의 높은 넣어 통해 분석을 위한 또 다른 플랫폼은 단일 셀 microchamber 어레이 칩, 셀의 다운스트림 형광 기반 특성에 대 한 허용의 추가 이점이 있다. 31 각 이러한 기술을 잠재적으로 유용 하 고 특정 응용 프로그램에 대 한 우수한 될 수 있습니다, 비록 ektacytometry의 비교 우위 감도, 사용, 및 정밀도의 용이성을 포함 합니다. 32 상용 ektacytometers의 최신 세대 또한 수행할 수 있는 분석 실험의 수에 있는 상당한 다양성을 소유한 다.

<table><tbody><tr><td>LoRRca MaxSis 표준 버전</td><td>메카트로닉스</td><td>LORC109000</td><td></td></tr><tr><td>LoRRca MaxSis Osmoscan</td><td>메카트로닉스</td><td>LORC109001</td><td></td></tr><tr><td>폴리비닐피롤리돈 용액(PVP) 0mOsm</td><td>메카트로닉스</td><td>QRR030910</td><td></td></tr><tr><td>폴리비닐피롤리돈 용액(PVP) 500mOsm</td><td>메카트로닉스</td><td>QRR030930</td><td></td></tr><tr><td>폴리비닐피롤리돈 용액(PVP) 5mL 바이알</td><td>메카트로닉스</td><td>QRR030901</td><td></td></tr><tr><td>X 클린</td><td>메카트로닉스</td><td>QRR010946</td><td></td></tr><tr><td>P1000&nbsp;</td><td>MilliporeSigma</td><td>Z646555</td><td></td></tr><tr><td>P200</td><td>MilliporeSigma</td><td>Z646547</td><td></td></tr><tr><td>P200 필터 팁</td><td>MidSci</td><td>AV200-H</td><td></td></tr><tr><td>P1250 필터 팁</td><td>MidSci</td><td>AV1250-H</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>MidSci</td><td>8091</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL 에펜도르프 튜브</td><td>MidSci</td><td>AVSS1700</td><td></td></tr><tr><td>15 mL 원추형 바이알</td><td>MidSci</td><td>C15R</td><td></td></tr></tbody></table>

deformability 및 ektacytometry에 의해 혈액이 질 레드 셀 측정

Measuring Deformability and Red Cell Heterogeneity in Blood by Ektacytometry

감소 레드 셀 deformability 여러 가지 장애의 특징입니다. 어떤 경우에 결함이 deformability의 범위는 질병의 심각도 또는 심각한 합병증의 발생을 예측할 수 있습니다. Ektacytometry를 사용 하 여 레이저 회절 viscometry 적혈구 증가 전단 응력 또는 적용된 전단 응력의 상수 값에 삼투성 기온 변화도의 deformability를 측정. 그러나, 직접 deformability 측정은 견고 하 고 변형 세포의 존재에 의해 특징은 이기종 혈액을 측정 하는 때 해석 하기 어려운. 이것은 전단 응력 및 명백한 deformability에 과장 된 감소에 의해 표시 하는 왜곡 된 회절 패턴에서 결과 제대로 정렬 경직 된 세포의 무 능력 때문. 왜곡의 정도 측정 혈액에서 적혈구의이 성분의 지표를 제공합니다. 낫 세포 빈 혈,이 헤모글로빈 농도는 적혈구의 헤모글로빈 구성 반영 경직 된 셀의 비율으로 상관 된다. Deformability 측정, 삼 투 그라데이션 ektacytometry 삼 투 취약성 및 적혈구의 수 분 상태에 대 한 정보를 제공 합니다. 이러한 매개 변수는 또한 겸 상 적혈구 환자에서 적혈구의 헤모글로빈 구성 반영. Ektacytometry 세포의 인구에 있는 deformability를 측정 하 고, 따라서, 정보를 제공 하지 deformability 또는 개별 적혈구의 기계적 특성에. 관계 없이, 여기 설명의 목표 deformability 및 혈액의 세포이 측정을 위한 편리 하 고 안정적인 방법을 제공입니다. 이러한 기술을 시간적 변화, 질병의 진행 및 여러 가지 장애에 치료 적 개입에 대 한 응답을 모니터링 하는 데 유용 수 있습니다. 낫 세포 빈 혈 하나 잘 성격을 나타낸 예입니다. 레드 셀 deformability이 측정의 관심은 다른 잠재적인 장애 혈액 저장, 당뇨병, 변형 체 감염, 철 분 결핍, 그리고 막 결함으로 인해 용 anemias 포함 됩니다.

이 원고에 설명 된 ektacytometry 결과 어떤 조건 든 지에 레드 셀 deformability 측정을 사용할 수 있습니다. ektacytometer의 일반 설정의 회로도 그림 1에 표시 됩니다. 적혈구의 균질 인구는 그림 2와 같이 신장 인덱스를 계산 하는 데 사용할 수 있는 전단 응력을 증가에 대응 한 타원형 회절 패턴을 생산할 예정 이다. 회절 패턴 왜곡 이기종 혈액 샘플 엄밀한 적혈구 변형 세포와 제대로 정렬 및 구형 패턴 오버레이 다이아몬드 결과 타원 모양의 회절 패턴을 생성 하지 않는 때문에 발생 합니다. 이 왜곡 된 패턴은 점점 감지 카메라 이득 큰 회절 패턴 크기에 그림 3과 같이 생성 하 조정. 동종 혈액 인구, 건강 한 지원자에서 볼 때 다른 회절 크기 측정 다른 deformability...

여기 선물이 레드 셀 deformability 및 세포질이 ektacytometry에 의해 측정 하는 기법. 이러한 기술은 붉은 세포 deformability의 일반적인 조사 및 혈액 질병 낫 세포 빈 혈 등 혈액 순환에 견고 하 고 변형 세포의 존재에 의해 특징의 특정 조사에 적용 됩니다.

Deformability 및 Ektacytometry에 의해 혈액이 질 레드 셀 측정

Decreased red cell deformability is characteristic of several disorders. In some cases, the extent of defective deformability can predict severity of ...

이 기술의 전반적인 목표는 엑타사이토메트리(ektacytometry)를 통해 적혈구 변형성과 세포 이질성을 측정하는 것입니다. 이 방법은 적혈구가 얼마나 변형될 수 있는지, 혈액 샘플이 얼마나 이질적인지, 실험이 질병의 함수로 어떻게 변화하는지와 같은 엑타사이토메트리의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 적혈구 집단의 변형성 및 이질성을 측정할 때 접근성, 편의성 및 신뢰성입니다.이 기술은 겸상 적혈구 빈혈 환자의 치료에 대한 반응을 모니터링하는 데 유용할 수 있습니다. 적혈구 변형성과 이질성은 헤모글로빈 구성 및 농도와 상관관계가 있기 때문입니다. 이러한 방법은 적혈구 변형성 감소가 특징인 당뇨병과 같은 다른 질병에 적용할 수 있으며, 적혈구 변형성 감소는 미세혈관 질환에 기여할 수 있습니다.먼저 제로 삼투압 튜브를 저삼투압 PVP 용액에 연결하고 500 삼투압 튜브를 고삼투압 PVP 용액에 연결합니다. 밥이 컵 안으로 완전히 내려갔는지 확인하십시오. 소프트웨어를 실행하고 Hardware Check를 선택하여 기계를 프라임한 다음 IO를 계측합니다. 기기가 프라이밍 주기를 완료할 수 있도록 합니다.사이클이 완료되면 컵에서 밥을 들어 올리고 보푸라기가 적은 티슈로 밥과 컵을 완전히 말리십시오. 갓 채취한 전혈 샘플을 바이알을 여러 번 뒤집어 부드럽게 혼합합니다. 그런 다음 25마이크로리터의 전혈을 5ml의 iso-osmolar PVP 용액에 피펫팅합니다.바이알의 뚜껑을 씌운 후 다시 여러 번 뒤집어 부드럽게 섞습니다. 소프트웨어 메인 메뉴에서 변형성을 선택한 다음 새 해석을 생성하고 실험 세부 사항을 추가합니다. 다음으로, 엑타사이토미터의 뚜껑을 들어 올리고 밥이 컵 안으로 완전히 내려갔고 컵이 돌아가고 있는지 확인합니다.PVP 혈액 용액 1ml를 컵과 밥 사이의 공간에 피펫으로 넣습니다. 그런 다음 밥을 약간 들어 올려 샘플을 아래로 가져옵니다. 모든 기포가 용액에서 나올 때까지 기다렸다가 엑타사이토미터의 뚜껑을 닫습니다.소프트웨어의 스크롤 막대를 따라 화살표를 이동하여 게인을 200으로 조정합니다. 온도가 섭씨 37도로 안정하고 회절 이미지가 안정적이면 시작을 누릅니다. 데이터 수집이 진행됨에 따라 회절 패턴을 관찰하여 원형, 타원형 또는 다이아몬드 모양으로 유지되는지 확인합니다.데이터 수집이 완료되면 보고서를 인쇄하고 정리합니다. 전단 응력에 대한 반응으로 건강한 혈액에서 얻은 회절 패턴은 예상되는 타원형 패턴을 보여줍니다. 연신율 지수는 여기에 표시된 방정식을 사용하여 계산됩니다.샘플이 흡인되면 기기가 세척 주기에 남아 있는 동안 탈이온수를 공간에 분출하여 컵과 밥 사이의 공간을 헹굽니다. 세척 주기가 완료되면 컵에서 밥을 들어 올리고 보푸라기가 적은 청소 티슈로 밥과 컵을 완전히 말리십시오. 잔류 물은 적혈구를 용해시켜 간섭을 일으키기 때문에 적절한 건조가 중요합니다.내보내기를 선택하여 보고서를 저장합니다. 마지막으로 소프트웨어의 기본 메뉴 버튼을 클릭하여 기본 페이지로 돌아갑니다. 이전과 같이 다른 샘플을 엑타사이토미터에 로드한 후 안정적인 회절 이미지가 화면에 나타나는지 확인합니다.3.8cm의 회절 높이가 생성될 때까지 화면을 따라 눈금자를 움직여 카메라 게인을 조정합니다. 눈금자를 사용하여 컴퓨터 화면에서 이미지의 높이를 확인합니다. 그런 다음 시작을 누르고 이전과 같이 데이터 수집을 관찰합니다.이 이미지는 겸상 적혈구 빈혈 환자의 혈액에서 얻은 3.8cm 회절 패턴을 보여줍니다. 앞서 보여진 바와 같이 엑타사이토미터를 세척한 후 절차를 반복하여 4.5cm 및 5.4cm 높이에서 회절 패턴을 얻습니다. 회절 패턴 왜곡은 이질적인 혈액 샘플에서 발생하는데, 그 이유는 단단한 적색 세포가 변형 가능한 세포와 제대로 정렬되지 않아 다이아몬드 모양의 회절 패턴이 발생하기 때문입니다.이 왜곡 패턴은 더 큰 회절 패턴을 생성하도록 카메라 게인이 조정됨에 따라 점점 더 감지될 수 있습니다. 삼투압 구배 ektacytometry의 경우, 5ml의 iso-osmolar PVP가 들어 있는 바이알에 250마이크로리터의 전혈을 넣고 부드럽게 혼합하는 것으로 시작합니다. 소프트웨어의 메인 메뉴에서 Osmoscan을 선택합니다.그런 다음 혈액 PVP 용액이 들어 있는 바이알을 기계 왼쪽의 바늘 아래에 놓습니다. 바늘이 바이알 바닥에 닿을 때까지 바늘을 내립니다. 튜빙이 그래디언트 생성을 위해 저삼투압 및 고삼투압 용액에 제대로 연결되어 있는지 확인하십시오.엑타사이토미터의 뚜껑을 닫고 아래쪽 절반의 도어를 열어 튜브로 들어가는 혈액을 볼 수 있습니다. 새 분석을 누르고 실험 세부 정보를 입력합니다. 카메라 게인을 200으로 조정한 후 기기 아래의 튜브에서 컵으로 혈액이 들어갈 때까지 기계를 작동시킵니다.컴퓨터 화면에 안정적인 회절 패턴이 표시되면 대화 상자에서 지금 시작 버튼을 눌러 데이터 수집을 시작합니다. 엑타사이토미터가 킬로그램당 최대 약 500밀리오스몰까지 데이터를 수집할 수 있도록 한 다음 기기를 중지합니다. 보고서를 인쇄합니다.다음으로, 오래된 PVP 혈액 바이알을 제거하고 탈이온수가 들어 있는 깨끗한 바이알로 교체합니다. 바늘이 바이알 바닥에 닿도록 아래로 내린 다음 대화 상자의 헹굼 버튼을 눌러 그라디언트 시스템을 헹굽니다. 헹굼이 완료되면 컴퓨터 모니터의 대화 상자에서 청소 옵션을 누르고 내보내기를 선택하여 보고서를 저장합니다.이전과 같이 밥과 컵을 말리십시오. 건강한 지원자에서 발견되는 동질의 혈액 집단은 회절 크기를 측정할 때 다른 변형성 곡선을 생성하지 않습니다. 대조적으로, 겸상 적혈구 빈혈 환자의 혈액과 같은 이질적인 혈액 집단은 회절 패턴 크기의 함수로 변형성 측정에서 상당한 감소를 보여줍니다.겸상혈에서 회절 패턴 왜곡의 정도를 EI max의 함수로 측정하면 헤모글로빈 S 및 성인 헤모글로빈 변이체인 헤모글로빈 A2와 상관관계가 있습니다. 수혈은 뒤틀린 현상을 바로잡는데, 이는 혈액 내 정상적인 성인 헤모글로빈의 비율과 반비례하는 관계로 알 수 있다. 회절 패턴 왜곡의 정도가 절반 최대 변형성을 달성하는 데 필요한 전단 응력의 함수로 측정되든 EI max의 함수로 측정되든 상관관계가 있습니다. EI max, EI min 및 O min과 같은 주요 삼투압 구배 엑타사이토메트리 매개변수는 각각 세포 수화, 표면 대 부피 비율 및 삼투압 취약성에 대한 추가 정보를 제공합니다.이러한 기술은 일단 숙달되면 제대로 수행되면 약 1시간 안에 완료할 수 있습니다. 이 절차에 따라 현미경 검사와 같은 다른 방법을 수행하여 개별 적혈구의 변형성과 관련된 추가 질문에 답할 수 있습니다. 이 동영상을 시청한 후에는 혈액 샘플에서 변형성과 혈청 이질성을 측정하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.

measuring-deformability-red-cell-heterogeneity-blood

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

hyperbranched polyglycerol (HPG)와 적혈구의 세포막 수정 (적혈구)가 제공됩니다. 수정 적혈구는 수성 2 상 분할, 삼투 취약성과 보완 매개 용해에 의해 특징되었습니다. 표면 단백질과 항원의 위장은 유동 세포 계측법 및 마이크로 타이핑 시스템 (MTS) 혈액 phenotyping 카드를 사용 평가되었습니다.

항원은 컴팩트 Hyperbranched Polyglycerols 중 이식 막으로 기능 적혈구를 보호

이 의정서는 세포 계측법, 다중 분광 영상의 흐름에 의해 정색 적혈구 모세포를 탈핵 적혈구 모세포의 핵의 제거 프로세스의 시각화를 제공하는 인구를 식별하는 새로운 방법을 설명합니다.

멀티 스펙트럼 이미징 유동 세포 계측법에 의한 탈핵 이벤트에 쥐의 적혈구 모세포 모집단 인리 치드의 확인

프로토콜은 화상 처리 기술에 기초하여 상세를 제어하고 일정한 전단 속도 하에서 적혈구 (RBC) 응집체 정량화 실험 방법을 설명했다. 이 프로토콜의 목적은 제어 된 미세 환경에서 대응하는 전단 속도로 RBC 집합체 크기를 관련시키는 것이다.

적혈구 집계 동적 조사를위한 미세 유체 제어 환경

기증자에서 파생 된 셀의 정량화는 engraftment hemoglobinopathies 환자에 줄기 세포 이식 후 모니터링 해야 합니다. 교류 cytometry 기반 셀 정렬, 식민지 대형 분석 결과, 및 짧은 탠덤 반복 확산을 평가 하는 데 사용할 수 있습니다의 후속 분석 및 erythroid 구획에 창시자의 차별화의 조합입니다.

Hemoglobinopathies 환자에 대 한 조 혈 줄기 세포 이식 후 잔여 기증자 Erythroid 조상 세포의 검출

여기에서, 우리는 통제된 탈산소 및 재산소화의 밑에 겸상적혈구 질병을 가진 환자에게서 견본에 있는 적혈구 변형성을 측정하는 산소 구배 ektacytometry, 신속하고 재현가능한 방법을 제시합니다. 이 기술은 적혈구 낫을 연구하고 겸상적혈구 치료 효능을 모니터링하는 방법을 제공합니다.

산소 그라데이션 Ektacytometry를 사용하여 제어 된 자동 탈산소 동안 병든의 특성

이 방법의 목적은 적혈구 CR1 밀도가 알려진 세 명의 피험체와 비교하여 임의의 적혈구에서 CR1 밀도를 결정하는 것입니다. 이 방법은 피코에리트린(PE)을 사용하여 증폭된 시스템에 결합된 항 CR1 단일클론 항체에 의한 피험자의 적혈구의 면역 염색 후 유세포분석을 사용한다.

유세포 분석을 사용하여 적혈구 보체 1 보체 측정

여기서는 메가카요세포 분화의 특성화를 위한 면역페노티핑 전략을 제시하고, 이 전략이 형광 활성화 세포 선별기로 다른 단계에서 메가카요사이클을 분류하는 방법을 보여준다. 방법론은 인체 에 있는 문화에서 생성된 거대 karyocytes뿐만 아니라 인간 1차 조직에적용될 수 있다.

인간 1차 출처에서 인간 MK의 면역페노티핑 및 세포 분류 또는 헤마토포이틱 전조자로부터 시험관내 분화

여기에서는 세포의 유변학적 특성을 측정하기 위해 광학 핀셋과 디포커싱 현미경을 기반으로 하는 통합 프로토콜이 설명되어 있습니다. 이 프로토콜은 다양한 생리병리학적 조건에서 적혈구의 점탄성 특성을 연구하는 데 광범위하게 적용할 수 있습니다.

광학 핀셋과 디포커싱 현미경을 사용한 적혈구의 점탄성 특성에 대한 정량적 분석

여기에 제시된 것은 세포 분열 수, 표면 세포 표현형 및 세포 친족 관계를 동시에 측정할 수 있는 유세포 분석 기반 기술입니다. 이러한 속성은 순열 기반 프레임워크를 사용하여 통계적으로 테스트할 수 있습니다.

조혈 줄기 및 전구 세포에 대한 유세포 분석을 통한 친족, 분열 수 및 표현형의 동시 평가

여기에 제시된 프로토콜은 진폭 변조 전극 형성 접근법을 사용하는 인간 적혈구의 경우 기계적 피로 테스트를 위한 프로토콜입니다. 이러한 일반적인 접근법은 순환 변형으로부터 현탁액에서 생물학적 세포의 형태학적 및 생체역학적 특성의 체계적인 변화를 측정하는 데 사용될 수 있습니다.

생물학적 세포의 기계적 피로를 평가하기 위한 진폭 변조 전형성

적혈구 모델링은 이 과정에서 행위자의 생물학적 중요성을 이해하고 분화 결함을 완화할 수 있는 새로운 치료 접근법을 평가할 수 있는 귀중한 기회를 제공합니다. 여기에서는 CD34+ 조혈모세포와 전구세포를 체외에서 효율적으로 구별할 수 있는 간단하고 신뢰할 수 있는 방법을 설명합니다.

In vitro 및 ex vivo human erythropoiesis의 효율성을 평가하기 위한 포괄적인 파이프라인

학습하세요 적혈구 변형성과 세포 이질성을 ektacytometry로 측정하는 방법을. 이 기법은 겸상적혈구빈혈 등 혈액 질환의 치료 반응을 모니터링하는 데 활용됩니다.

Deformability 및 Ektacytometry에 의해 혈액이 질 레드 셀 측정

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