Name: 행동 하는 쥐의 해 마에서 진동 제한 공간 기록 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-01T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 10 s
Description: 학습하세요 자유롭게 움직이는 생쥐의 해마에서 다중 샹크 실리콘 프로브를 이용한 국소 전기 활동 기록 방법입니다. 전류원 밀도 분석을 통해 기존 방법으로는 감지하기 어려운 국소 진동을 재구성하여 신경망 활동의 시공간 조직을 연구할 수 있습니다.

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우리는 기술 지원을 위해 카린 Winterhalter 및 Kerstin Semmler 감사입니다. 이 작품의 우수성 BrainLinks-BrainTools (EXC 1086) 독일 연구 재단의 클러스터에 의해 지원 되었다.

살아있는 동물을 포함 하는 모든 메서드는 독일 동물 복지 행위에 따라 Regierungspräsidium 프라이부르크에 의해 승인 되었습니다.
1입니다. 준비
<ol><li>디자인과 정도 들고 실리콘 프로브와 전극 커넥터 주입의 과정에서 적절 한 삽입 도구를 구축. 예를 들어 사용자 정의 내장된 삽입 도구에 대 한 그림 1 을 참조 하십시오.</li>
	<li>조심 스럽게 세라믹 밀고 집게를 사용 하 여 포장에서 실리콘 프로브 및 전극 커넥터를 해제 합니다.</li>
	<li>커넥터 보드를 들어올려 고 안전 하 게 악어 클램프 스탠드에 연결 된와 함께 그것을 해결.</li>
	<li>stereoscope를 사용 하 여 삽입 도구 프로브 세라믹 밀고 집게 맞춥니다. 프로브 삽입 도구를 접착제로 cauterizer와 녹 인 파라핀 왁 스의 ~ 2 mm 레이어를 적용 합니다. 이 절차 동안 프로브 정강이 건드리지 않도록 주의.</li>
	<li>표준 접착 테이프를 사용 하 여 삽입 도구의 샤프트에 전극 커넥터를 수정 합니다. 참고는 제조업체에 따라 접지 전선이 이식 전에 전극 커넥터 보드에 납땜을 해야 할 수 있습니다. 주석-납 납땜 (400 ° C)와 함께 적용을 사용 하 여 광택 절연 구리 와이어의 두 개의 짧은 조각에서 단 열을 제거 합니다. 전극 커넥터 보드에 적절 한 슬롯에 접지 전선 땜 납.</li>
	<li>구리 철사의 2 개의 추가적인 조각의 절연을 제거 합니다. 세 번 (1 밀리미터 직경, 2mm 길이) 스테인리스 나사 주위 각 벌 거 벗은 구리 와이어 랩. 플럭스 강철 솔더링에 적합을 적용 하 고 나사 뚜껑의 하단에 구리 철사를 납땜. 있는지 확인 하단의 나사 스레드 남아의 절반 주석 땜 납의 무료.</li>
	<li>표준 멀티 미터를 사용 하 여 와이어와 나사 사이 전기 접점에 대 한 확인.</li>
	<li>70% 에탄올에 침수에 의해 실리콘 프로브와 접지 나사의 정강이 소독 (10 s).</li>
	<li>절반에 플라스틱 파스퇴르 피 펫의 머리를 절단 하 여 프로브 임 플 란 트에 대 한 보호 커버를 준비 합니다.</li>
</ol>2. 이식 수술
<ol><li>수술 도구 (가 위, 뾰족한 집게, 외과 클램프)와 뜨거운 비드 소독 기 소독. 70% 에탄올과 모든 표면을 닦아냅니다.</li>
	<li>3 %isoflurane ~ 1 L/min에 전달 하는 산소에서와 마 취를 유도.<ol>
<li>유지 보수, 1-1.5 %isoflurane 사용 합니다. 참고 isoflurane 농도 외과 공차를 달성 하는 데 필요한 동물 동물에서 달라질 수 있습니다.</li>
		<li>안정적인 수술 공차 동물 발가락 곤란에 응답 하지 못할 때 이루어집니다. 마우스의 호흡 비율을 모니터링 하 고 필요한 경우 isoflurane의 농도 조정 합니다.</li>
		<li>동물의 눈을 밖으로 건조 방지에 연 고를 적용 됩니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>부드럽게 귀 바 외가도에 삽입 하 여 stereotaxic 프레임에 마우스를 탑재 합니다. 일단 마우스의 머리는 귀 바에 의해 안정, 지속적인 isoflurane 배달에 대 한 주 둥이 입 조각 장소. 마우스 패드 또는 수건에 위에 난방 패드를 놓고 buprenorphine를 피하 주사 (0.05-0.1 mg/kg 체중) 수술 후 진통 되도록.</li>
	<li>표준 면도기로 머리를 면도 하 고 70% 에탄올으로 피부를 소독. 수술가 위를 사용 하 여 두개골의 중간 선 따라 피부에 절 개 하 고 수술 클램프를 사용 하 여 피부를 엽니다.</li>
	<li>레벨 bregma 및 람다 stereotaxic 정렬 도구의 도움으로 동물의 머리를 맞춥니다. Bregma 및 람다 사이의 높이 오프셋의 50 µ m 이어야 한다. 또한, 두개골에 bregma에서 깊이 측정 하 여 입장 축 머리에 표면 수준 정의 거리 왼쪽 및 오른쪽 (예를 들어, 왼쪽 1 mm와 bregma의 오른쪽). 필요한 경우 머리의 기울기를 조정 합니다.</li>
	<li>3% 과산화 수소와 함께 머리를 깨끗 하 고 마른 면 물티슈로 닦아 건조.</li>
	<li>Craniotomy bregma 적절 한 stereotaxic 아틀라스12를 사용 하 여 상대적인 위치를 결정 합니다.</li>
	<li>0.9 m m 드릴 머리를 사용 하 여, 지상 및 참조 나사를 소 뇌에 뼈에 두 개의 나사 구멍을 드릴. 또한, 고정 나사에 대 한 1-3 구멍 안정 이식 하는 것이 있다. 앵커 나사 위치는 craniotomy의 위치에 따라 달라 집니다. 해 마에 이식에 대 한 앵커 나사 contralateral 정수 리와 동측 담당에 배치. 적합 한 드라이버를 사용 하 여 뼈에 나사를 삽입 합니다. 알아서 하지 뇌에 침투.</li>
	<li>천천히 주입 측면 주위 직사각형 영역에 드릴으로 두개골을 엷게 해는 craniotomy를 수행 합니다. 멸 균된 인산 버퍼 (PB)와 뼈를 자주 축 축 하 게. 나머지 남았다 두개골을 부드럽게 피어 싱 하 고 괜 찮 아 요 (27 G) 주사 바늘과 핀셋 한 켤레의 도움으로 제거 될 수 있습니다.</li>
	<li>신중 하 게 얇은 (27 G) 주입 바늘 dura mater 피어스. 핀셋의 쌍을 가진 바늘의 팁을 절곡 하 여 작은 고리를 형성 하 고 제거에 대 한 경질을 당겨. PB 뇌 표면 밖으로 건조 하지 않도록 하려면 적용 됩니다.</li>
	<li>Stereotaxic 홀더에 전극 삽입 도구를 탑재 하 고 bregma에 프로브를 0에서 craniotomy를 통해 stereotaxic 좌표에 프로브를 이동 합니다. 천천히 뇌 표면 침투. 프로브 샤프트 구 부 하지 않는 다는 것을 확인 하십시오. 혈관을 통해 이식 하지 마십시오.</li>
	<li>천천히 원하는 깊이 이상 ~ 200 µ m까지 프로브를 낮춥니다. Craniotomy와 정강이의 보호에 대 한 멸 균된 바 셀 린과 실리콘 프로브 커버. 두개골에 고정 나사에 조사 자료를 해결 하기 위해 치과 시멘트를 적용 됩니다.</li>
	<li>시멘트 신청 후 바로, 조사 대상 깊이 천천히 이동. 시멘트의 응용 프로브의 측면 운동 감소 보장 대상 지역에서 최소한의 조직 손상 후 마지막 ~ 200 µ m를 전진. 참고 사용 하는 시멘트의 경화 시간 프로토콜의이 단계에 영향을 수 있습니다. 신속 하 게 시멘트 경화와 함께이 단계를 생략 하 고 직접 실리콘 프로브에 손상을 방지 하기 위해 대상 깊이 조사를 임 플 란 트.</li>
	<li>시멘트는 치료 삽입 도구에서 프로브를 cauterizer와 왁 스를 용 해 하 여 놓습니다.</li>
	<li>삽입 장치에서 커넥터 보드를 놓고 삽입 핸들에 부착 된 악어 클램프를 사용 하 여 두개골에 적당 한 장소에 배치. 해 마에 프로브 주입, 경우 contralateral 정수 리 뼈에 커넥터 보드를 놓습니다. 치과 시멘트를 사용 하 여 두개골에 커넥터 보드를 수정 합니다.</li>
	<li>소 뇌에 있는 두 개의 나사에 연결 된 전선 커넥터 보드의 지상 및 참조 선 땜 납.</li>
	<li>올바른 높이에 보호 커버를 장식 하 고 실리콘 프로브 위에 놓습니다. 커넥터 보드와 두개골 노출된 두개골 주위 피부를 피하고 치과 시멘트를 사용 하 여 표지를 수정 합니다. 이식 사이트 주위 피부를 봉합 일반적으로 필요 하지 않습니다.</li>
</ol>3입니다. 수술 후 회복
<ol><li>최소 2 일 (예: 모든 6 h 낮 동안 및 식 수에 하룻밤 함께 carprofen (4-5 밀리 그램/kg 체중) 피하 모든 24 h buprenorphine의 피하 주사)에 대 한 적절 한 진통 치료를 적용 합니다. 단일 주택 이식의 손상을 방지 하는 것이 좋습니다.</li>
	<li>적어도 1 주 복구를 허용 합니다. 로컬 동물 복지 가이드라인에 게 문의 하십시오.</li>
</ol>4. 데이터 수집
<ol><li>자유롭게 이동 하는 정류를 통해 연결 하는 적합 한 데이터 수집 시스템을 사용 하 여 마우스에서 기록 LFPs. 1-5 kHz의 샘플링 주파수를 사용 하 여 LFPs를 취득. 높은 샘플링 속도 (20-30 kHz) 단일 단위 방전은 LFP 함께 기록 하는 경우 필요 하다</li>
	<li>오프 라인 분석을 위해 개별 채널의 원시 기록 파일을 저장 합니다.</li>
</ol>5입니다. 조직학
<ol><li>녹음 완료 후 깊이 동물 (예: 2g/kg 몸 무게 우 레 탄 주입 intraperitoneally) anesthetize. 곤란 하 게 발가락에 응답의 부족에 의해 마 취 상태를 확인 합니다.</li>
	<li>얼음 처럼 차가운 인산 염 버퍼 식 염 수 (~ 1 분) 4 %paraformaldehyde (~ 10 분) 표준 intracardial 관류 방법13를 사용 하 여 다음으로 마우스 transcardially perfuse 관류, 전에 전해 lesioning 녹음 사이트의 수에 의해 수행 (예: 10-20 V의 정 전압 최대 1을 적용 하 여 s). 또는, 형광 염료에 적용 칼 팁 이식 식별 추적을 사용할 수 있습니다. 실리콘 감지기의 종류와 최적의 결과 얻기 위해 전극 위치의 식별에 대 한 다양 한 방법을 테스트 하는 것이 좋습니다.</li>
	<li>뇌 섹션 (~ 100 µ m) 고 4'-6-diamidino-2-phenylindole (DAPI, 1 µ g/mL) 샌드위치 (실 온에서 각 10 분)에 3 개의 세척 단계 다음으로 분할 영역을 얼룩.</li>
	<li>섹션 현미경 슬라이드에, 적용 매체를 포함 한 방울 놓고 커버 슬립으로 섹션을 커버 합니다. 포함 매체 실 온에서 하룻밤 건조 하자.</li>
	<li>Using epifluorescence 또는 confocal 레이저 스캐닝 현미경, 녹음 사이트의 위치를 식별 합니다.</li>
	<li>추가 사용에 대 한 실리콘 감지기의 복구를 시도, 악어 클램프 프로브 잡고과 신중 하 게 납땜 (400 ° C)와 치과 시멘트를 용 해 하 여는 났으며에서 프로브를 놓습니다. 이 절차 동안 프로브 정강이 건드리지 않도록 주의!</li>
	<li>효소 솔루션 다음 뜨거운 증류수 (~ 80 ° C, 15 분)에 프로브를 세척 (1% 증류수, 실 온에서 30 분에에서 Tergazyme)와 다른 세척 증류수 (15 분). 참고 검색 복구 성공률 낮습니다.</li>
</ol>6. CSD 분석
<ol><li>적합 한 분석 환경 (예: 파이썬), 변환으로 정강이 따라 두 번째 공간 파생에 가깝게 하 여 CSD에 개별 칼의 LFP 데이터를 사용 하 여 <img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/57714/57714eq1.jpg"> 어디 LFPn, t는 시간 t 에서 n번째 전극에 LFP 신호 이며 Δz 전극 간 간격. Note는 n-1과 n+ 1 작업, 칼의 처음과 마지막 전극의 CSD 수 없습니다 예상할 수, 프로브 배치 중 고려 주의가 있다. (참조 추가 코드 파일)을 반복 하는 동안 각 전극에 대 한 CSD 신호를 계산 하는 코드의 짧은 세그먼트를 사용 하 여 근사 공식을 구현 합니다.</li>
	<li>추가 분석 (예를 들어, 밴드 패스 필터를 적용 하 여 뇌 진동의 특정 주파수 대역을 공부)에 대 한 획득된 CSD 신호를 사용 합니다.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 없다.

증가 증거 hippocampal 신경 회로에서 두뇌 진동 개별 공간 도메인10,,1116발생을 나타냅니다. CSD 분석은 크게 볼륨 전도, 현지 발진 이벤트의 연구에 대 한 중요 한 필수의 영향을 줄일 수 있습니다. 이 비디오와 함께 우리 CSD 데이터의 분석에 대 한 마우스의 해 마에 실리콘 프로브를 이식 하는 가이드를 제공 합니다. 우리는 CA1 및가 뇌에 지역화 된 감마 진동의 날카로운 파도 물결의 CSD 신호의 대표적인 예를 보여줍니다. 그러나,이 프로토콜 세타 등 호흡 관련 네트워크 진동17다른 hippocampal 진동 활동 패턴을 공부도 사용할 수 있습니다.
주입의 성공을 결정적인 stereotaxic 프레임에 동물의 머리의 적절 한 맞춤에 따라 달라 집니다....

LFP에 진동 정보 신경 회로 의해 처리에 비판적으로 참여 하는. 그들은 주파수, 느린 파도 (~ 1 Hz)에서 빠른 리플 진동 (~ 200 Hz)1의 넓은 스펙트럼을 커버. 고유한 주파수 대역 메모리, 감정 처리와 탐색2,3,,45,,67포함 한 인지 기능으로 연결 됩니다. 신경 세포 막에 걸쳐 전류 흐름 LFP 신호8의 가장 큰 부분을 구성. 입력 셀 (예: glutamatergic 흥분 성의 시 냅 스의 활성화를 통해) 양이온 (충전 나뭇잎 extracellular 매체)로 활성 전류 싱크를 나타냅니다. 반면, 긍정적인 GABAergic 억제 시 냅 스의 활성화에 의해 예를 들면, extracellular 매체의 net 흐름 그 위치에서 활성 전류 소스 묘사. 신경 쌍 극 자에서 전류 싱크 먼 사이트에서 막 요금에 영향을 미치는 전류 보상 때문 수동 소스와 결합 됩니다.
원격 신경 과정에 의해 생산 하는 전기 분야 또한 기록 전극에 상당한 전압 심한 귀 착될 수 있다 하 고 지역 이벤트로 이렇게 거짓으로 간주 될 수 있습니다. 이 볼륨 전도 LFP 신호 해석에 심각한 도전 포즈. CSD 분석 로컬 전류 싱크 및 LFP를 기본 소스에 대 한 정보 신호를 따라서 구성 볼륨 전도8의 영향을 줄이기 위해 수단을 제공 합니다. 해 마 같은 적 층된 구조, 1 차원 CSD 신호 LFP9층 류 평면 수직으로 배열 하는 등거리 전극에서 기록의 두 번째 공간 파생 하 여 얻을 수 있습니다. 상용 선형 실리콘 감지기의 출현 해 마에서 현지 진동 활동 연구를 위한 CSD 메서드를 활용 하는 연구자를 허용 했다. 예를 들어 별개 감마 진동 CA1 지역10층 특정 방식으로 등장할 입증 되었습니다. 또한, CSD 분석이 이랑11주 셀 계층에서 감마 활동의 독립적인 뜨거운 관광 명소를 발견 했다. 중요 한 것은, 이러한 결과 로컬 CSD 하지만 안에 LFP 신호에서만 했다. CSD 분석은 따라서 해 마의 마이크로 회로 작업에 대 한 통찰력을 얻을 수 있는 강력한 도구를 제공 합니다.
이 프로토콜에서 우리 실리콘 프로브 1 차원 CSD 신호를 얻기 위해 포괄적인 가이드를 제공 합니다. 이러한 메서드는 사용자가 지역화 된 진동 이벤트 동작 쥐의 해 마에서 조사를 수 있게 된다.

<table><tbody><tr><td>악어 클램프와 스탠드</td><td>Reichelt Elektronik</td><td>HALTER ZD-10D</td><td></td></tr><tr><td>실리콘 프로브</td><td>Cambridge Neurotech</td><td>P-series 32</td><td></td></tr><tr><td>스테레오스코프</td><td>Olympus</td><td>SZ51</td><td></td></tr><tr><td>바니시 절연 구리 와이어</td><td>B&uuml; rklin Elektronik</td><td>89 F 232</td><td></td></tr><tr><td>접지 나사</td><td>나사 및 More GmbH (screwsandmore.de)</td><td>DIN 84 A2 M1x2</td><td></td></tr><tr><td>플럭스</td><td>Stannol</td><td>114018</td><td></td></tr><tr><td>세라믹 팁 집게</td><td>Fine Science Tools</td><td>11210-60</td><td></td></tr><tr><td>파라핀 왁스</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>327204</td><td></td></tr><tr><td>소작 Fine</td><td>Science Tools</td><td>18010-00</td><td></td></tr><tr><td>납땜 인두</td><td>Kurtz Ersa</td><td>OIC1300</td><td></td></tr><tr><td>멀티 미터</td><td>Uni-T</td><td>UT61C</td><td></td></tr><tr><td>에탄올</td><td>Carl Roth</td><td>9065.1</td><td></td></tr><tr><td>파스퇴르 피펫</td><td>Carl Roth</td><td>EA65.1</td><td></td></tr><tr><td>열 살균기</td><td>Fine Science Tools</td><td>18000-45</td><td></td></tr><tr><td>입체 택시 프레임</td><td>David Kopf</td><td>모델 1900</td><td></td></tr><tr><td>입체 택시 전극 홀더</td><td>David Kopf</td><td>모델 1900</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Abbvie</td><td>B506</td><td></td></tr><tr><td>산소 발생기</td><td>Respironix</td><td>1020007</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td>Indivior UK Limited</td><td></td><td></td></tr><tr><td>전기 면도기</td><td>Tondeo</td><td>Eco-XS</td><td></td></tr><tr><td>가열 패드</td><td>Thermolux</td><td>463265/-67</td><td></td></tr><tr><td>수술용 클램프</td><td>정밀 과학 도구</td><td>18050-28</td><td></td></tr><tr><td>과산화수소</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1009</td><td></td></tr><tr><td>멸균 면 물티슈</td><td>Carl Roth</td><td>EH12.1</td><td></td></tr><tr><td>드릴</td><td>Proxxon</td><td>Micromot 230/E</td><td></td></tr><tr><td>21G 주사 바늘</td><td>B. Braun</td><td>4657527</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충액/인산염 완충 식염수</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>입체 아틀라스</td><td>Elsevier</td><td>9.78012E+12</td><td></td></tr><tr><td>수술 용 가위</td><td>미세 과학 도구</td><td>14094-11</td><td></td></tr><tr><td>수술 겸자</td><td>미세 과학 도구</td><td>11272-40</td><td></td></tr><tr><td>27G 주사 바늘</td><td>B. Braun</td><td>4657705</td><td></td></tr><tr><td>바셀린</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>치과 시멘트</td><td>Sun Medical</td><td>SuperBond T & M</td><td></td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>Zoetis</td><td>Rimadyl 50mg/ml</td><td></td></tr><tr><td>녹음 증폭기</td><td>Intan Technologies</td><td>C3323</td><td></td></tr><tr><td>USB 수집 보드</td><td>Intan Technologies</td><td>C3004</td><td></td></tr><tr><td>녹음 케이블</td><td>Intan Technologies</td><td>C3216</td><td></td></tr><tr><td>전기 정류자</td><td>Doric 렌즈</td><td>HRJ-OE_FC_12_HARW</td><td></td></tr><tr><td>수집 소프트웨어</td><td>OpenEphys (www.open-ephys.org)</td><td>GUI</td><td>는 플랫폼 독립적인 데이터 수집을 가능하게 합니다</td></tr><tr><td>데이터 수집</td><td></td><td></td><td></td>을 위한 컴퓨터</tr><tr><td>분석 환경</td><td>Python (www.python.org)은</td><td></td> <td>플랫폼 독립적인 데이터 분석을 가능하게 합니다</td></tr><tr><td>우레탄</td><td>시그마-알드리치</td><td></td><td></td></tr><tr><td>비브라톰</td><td>라이카</td><td>VT1000</td><td></td></tr><tr><td>현미경 슬라이드</td><td>Carl Roth</td><td>H868.1</td><td></td></tr><tr><td>커버 슬립</td><td>Carl Roth</td><td>H878.2</td><td></td></tr><tr><td>임베딩 매체</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>81381-50G</td><td></td></tr><tr><td>증류수</td><td>Millipore</td><td>Milli Q</td><td>증류수 생산용 탁상용 기계</td></tr><tr><td>Tergazyme Alconox</td><td></td><td>Tergazyme</td><td></td></tr></tbody></table>

행동 하는 쥐의 해 마에서 진동 제한 공간 기록

Recording Spatially Restricted Oscillations in the Hippocampus of Behaving Mice

로컬 필드 가능성 (LFP) 신경 세포 막에 걸쳐 이온 움직임에서 나온다. LFP 전극에 의해 기록 된 전압 반영 뇌 조직의 큰 볼륨의 총계 전기 분야, 이후 지역 활동에 대 한 정보를 추출은 도전적 이다. 그러나 공부 신경 칩,, 진정으로 지역 행사 및 볼륨 실시 신호 먼 뇌 영역에서 신뢰할 수 있는 구별을 요구 한다. 현재 소스 밀도 (CSD) 분석 전류 싱크 및 소스 전극 주변에 대 한 정보를 제공 하 여이 문제에 대 한 솔루션을 제공 합니다. 뇌 해 마 같은 층 류 cytoarchitecture와 영역, 1 차원 CSD는 LFP의 두 번째 공간 파생을 추정 하 여 얻을 수 있습니다. 여기, 우리는 기록 multilaminar LFPs 사용 하 여 선형 실리콘 프로브 등 해 마에 이식 하는 방법을 설명 합니다. CSD 추적 조사의 개별 정강이 따라 계산 됩니다. 이 프로토콜은 이렇게 자유롭게 이동 하는 쥐의 해 마에서 공간적으로 제한 된 신경 네트워크 진동 해결 하는 절차를 설명 합니다.

그림 1 에서는 실리콘 프로브의 주입에 사용 되는 삽입 도구를 보여 줍니다. 만성 이식된 실리콘에서 녹음 CA1 영역을 대상으로 조사 하 고가 뇌의과 립 세포 층은 그림 2에 표시 됩니다. 우리는 homecage에서 자유로운 이동 하는 동안 프로브 정강이에서 LFPs을 기록 했다. 볼륨 전도의 효과 최소화 하기 위해 얻은 신호 프로브 (그림 2BD)의 각 생크 따라 CSD 변환 했다. 그림 2B에서 나와 첫 번째 예제에서 단일 샤 프 웨이브 리플 CA1의 지층 radiatum에서 저명한 현재 싱크 이벤트 리드. 그림 2C-E에 표시 하는 두 번째 ...

이 프로토콜 로컬 필드 전위 선형 실리콘 프로브 멀티 생크와의 녹음을 설명 합니다. 현재 소스 밀도 분석을 사용 하 여 신호 변환 마우스 해 마에 지역 전기 활동의 개조를 허용 한다. 이 기술을 공간적으로 제한 된 뇌 진동 자유롭게 마우스를 이동에 공부 될 수 있다.

The local field potential (LFP) emerges from ion movements across neural membranes. Since the voltage recorded by LFP electrodes reflects the summed ...

이 방법은 신경 세포 네트워크 활동이 미세한 시간 및 공간 규모로 어떻게 구성되는지와 같은 신경 과학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 선형 실리콘 프로브를 사용하여 전류 데이터 분석을 통해 기존의 전위 기록에서 쉽게 감지할 수 없는 국소 진동을 재구성할 수 있다는 것입니다. 이 절차를 시작하려면 뜨거운 비드 살균기로 수술 기구를 살균한 다음 모든 작업 표면을 70% 에탄올로 닦습니다.다음으로, 마취된 동물을 귀바를 외이도에 부드럽게 삽입하여 입체 프레임에 장착합니다. 마우스의 머리가 이어바에 의해 안정되면 지속적인 이소플루란 전달을 위해 마우스피스를 위에 놓고 눈에 연고를 발라 건조를 방지합니다. 그 후, 마우스 아래에 발열 패드를 놓고 부프레노르핀을 피하주사하여 수술 후 진통제를 보장합니다.그런 다음 머리를 면도하고 70 % 에탄올로 피부를 소독하십시오. 수술용 가위를 사용하여 두개골 정중선을 따라 피부를 절개하고 수술용 클램프를 사용하여 피부를 엽니다. 입체 정렬 도구를 사용하여 동물의 머리를 브레그마와 람다의 수평을 맞추기 위해 정렬합니다.브레그마와 람다 사이에 50마이크로미터 미만의 높이 오프셋이 있어야 합니다. 또한, 왼쪽과 오른쪽 양쪽의 브레그마에서 정의된 거리에서 깊이를 측정하여 내측-외측 축을 따라 머리를 수평으로 맞춥니다. 머리가 기울어져 있으면 조정하십시오.3% 과산화수소로 헤드를 청소하고 멸균 면포로 말리십시오. 적절한 입체 아틀라스(stereotaxic atlas)를 사용하여 브레그마에 상대적인 개두술의 위치를 결정합니다. 0.9mm 드릴 헤드를 사용하여 소뇌 위의 뼈에 두 개의 나사 구멍을 뚫어 접지 및 참조 나사를 놓습니다.또한 임플란트를 안정화하기 위해 나사를 고정하기 위한 1-3개의 구멍을 뚫습니다. 앵커 나사의 위치는 개두술의 위치에 따라 다릅니다. 적절한 드라이버를 사용하여 뼈에 나사를 삽입하십시오.뇌에 침투하지 않도록 주의하세요. 이제 이식 쪽 주위의 직사각형 영역에서 드릴로 두개골을 천천히 얇게 하여 개두술을 수행합니다. 멸균된 인산염 완충액으로 뼈를 자주 적십니다.얇아진 나머지 두개골을 27게이지 주사 바늘로 부드럽게 뚫고 핀셋으로 제거합니다. 다음으로, 27 게이지 주사 바늘로 경막을 조심스럽게 뚫습니다. 핀셋을 사용하여 바늘 끝을 구부려 작은 고리를 만들고 이 고리를 사용하여 경막을 제거합니다.그런 다음 인산염 완충액을 바르

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

이 비디오는 국소 자기장 전위를 측정하기 위해 다중 생크 선형 실리콘 프로브를 마우스 뇌에 이식하는 프로토콜을 간략하게 설명합니다. 이 절차에는 프로브를 입체 장치에 고정하고, 표적 뇌 영역에 정확하게 배치하고, 뇌에 삽입하고, 치과 시멘트로 고정하는 것이 포함됩니다. 이식 후 어셈블리는 케이스로 보호됩니다. 회복 후 이 설정을 통해 국소 자기장 전위를 기록하여 뉴런 활동에 대한 통찰력을 얻을 수 있습니다.

Multi-Shank Linear Silicon Probes를 사용하여 행동하는 마우스의 뇌 전기 활동 기록

이 비디오는 쥐 해마-내후각 피질 절편에서 국소장전위(LFP)를 기록하는 절차를 보여줍니다. 전기 자극은 해마의 CA3 방사층에서 제공되며, 이는 CA1 피라미드층에서 시냅스후 전위의 변화를 일으킵니다. 국소장 전위(local field potential)라고 하는 CA1 뉴런의 막전위(membrane potential)의 결합된 변화가 기록되어 있습니다.

Mouse Hippocampal-Entorhinal Cortex Slices의 국소장전위(Local Field Potential in Mouse Hippocampal-Entorhinal Cortex Slices) 기록

이 비디오는 GABAergic 내측 중격 뉴런에 빛에 민감한 이온 채널이 있는 유전자 조작 마우스 모델에서 세타 진동을 조절하는 프로토콜을 보여줍니다. 이 프로토콜은 광 펄스를 해마에 전달함으로써 뉴런 활동을 동기화하고 국소 자기장 전위로 기록되는 세타 진동을 생성하는 것을 목표로 합니다.

마우스 모델에서 Theta Oscillations의 선택적 조작

이 비디오는 마우스 모델의 해마에 와이어 전극 어레이와 광섬유를 정위 이식하는 방법을 보여줍니다.

전극 배열과 광섬유를 마우스 해마에 이식

이 비디오는 고립된 해마에서 세타 진동이라고도 하는 리드미컬한 뉴런 네트워크 활동을 기록하는 방법을 보여줍니다. 전극은 세타 진동을 감지하고 분석하기 위해 다양한 층과 공간 위치에 삽입됩니다. 이것은 독특한 뉴런 구성과 해마의 여러 층에 걸친 뉴런 네트워크의 연결성을 보여줍니다.

마우스 해마의 세타 진동에 대한 시험관 내 기록

여기에서, 우리는 격리 된 전체 해마 제조물로부터 리듬 뉴런 네트워크 세타 및 감마 진동을 기록하기위한 프로토콜을 제시한다. 우리는 해마 추출에서 현장, 단일 및 전체 세포 패치 클램프 녹음뿐만 아니라 theta 리듬의 광 발생기 페이싱에 이르기까지의 실험 단계를 설명합니다.

Hippocampal 쎄타 밴드의 튜닝<em&gt; 체외에서</em&gt; : 격리 된 설치류 Septohippocampal Circuit에서 기록하는 방법론

우리 동작 쥐에서 hippocampal 세타 진동 (5-10 Hz)의 선택적 조작에 대 한 optogenetics 및 electrophysiological 기록의 사용을 설명합니다. 리듬 유입의 효능은 사용 하 여 로컬 필드 가능성을 모니터링 하 고 있다. 광학-및 pharmacogenetic 저해의 조합 해결 hippocampal 동기화의 원심 판독 합니다.

Optogenetic 쥐 행동에 Hippocampal 세타 진동의 유입

이 프로토콜은 자발적인 날카로운 파도 잔물결 활동을 나타내는 마우스에서 수평 해마 내톨리날 피질 (HEC) 슬라이스의 준비를 설명합니다. 슬라이스는 단순화 된 인터페이스 보유 챔버에서 배양되고 기록은 조직의 산소화와 네트워크 수준의 활동의 자발적출현을 촉진하기 위해 빠르게 흐르는 인공 뇌척수액과 침수 된 조건에서 수행됩니다.

급성 마우스 뇌 슬라이스 자발적인 해 마 네트워크 활동을 조사

이 문서는 주입 캐뉼라와 마우스의 해마의 CA1 영역에 이식으로 보충 된 맞춤형 이미징 창의 준비를 보여줍니다.

마우스를 면도하는 해마에서 신경 활동을 시각화하기위한 두개골 절제술 절차

이 프로토콜은 국소 자기장 전위를 기록하고 쥐 해마와 전전두엽 피질의 정보 흐름을 조사하기 위해 맞춤형으로 설계된 기록 장치와 전극의 사용을 간략하게 설명합니다.

Mouse Hippocampus and Prefrontal Cortex의 Dual Extracellular Recordings in the Mouse Hippocampus and Prefrontal Cortex(생쥐 해마와 전전두엽 피질의 이중 세포외 기록)

이 프로토콜은 냄새 기둥을 탐색하는 쥐의 해마 CA1에서 뇌-행동 관계를 조사합니다. 해마 영상에 접근하기 위한 수술, 행동 훈련, 뇌의 미니스코프 GCaMP6f 기록 및 처리, ROI 신경 활동에서 마우스 위치를 디코딩하기 위한 행동 데이터를 포함한 단계별 프로토콜을 제공합니다.

냄새 기둥을 탐색하는 생쥐의 해마에서 칼슘 신호를 기록하는 미니스코프

학습하세요 자유롭게 움직이는 생쥐의 해마에서 다중 샹크 실리콘 프로브를 이용한 국소 전기 활동 기록 방법입니다. 전류원 밀도 분석을 통해 기존 방법으로는 감지하기 어려운 국소 진동을 재구성하여 신경망 활동의 시공간 조직을 연구할 수 있습니다.

행동 하는 쥐의 해 마에서 진동 제한 공간 기록

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