Name: Myography 와이어를 사용 하 여 마우스 Mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-20T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 42 s
Description: 배우세요 와이어 마이오그래프 기법을 이용하여 마우스 장간막 동맥의 등장성 수축을 측정하는 방법을 알아보세요. 이 기술은 혈관 평활근 기능 평가와 고혈압 치료제 선별에 활용됩니다.

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우리는 기술 지원에 대 한 박사 웨이 제나라 (Soochow 대학, 소 주, 중국)과 박사 연 닝 Qiao (산시 사범 대학, 서 안, 중국) 감사합니다. 이 작품은 자연 과학 재단의 중국 국가 (31272311, 81373295 및 81473420 부여)와 우선 교육 프로그램 개발의 장쑤 등 교육 기관 (부여 번호에 의해 투자 하는 프로젝트에 의해 지원 되었다 ysxk-2016 년)입니다.

동물 조작 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)의 모델 동물 연구 센터 남 경 대학에 의해 승인 되었다.
1. 솔루션 준비
<ol><li>HEPES Tyrode 솔루션 (H-T) 137.0 m NaCl, 2.7 m KCl m m, 1.8 m m CaCl2, 1 mM MgCl2∙6H2O, 5.6 m m D-포도 당, 및 10 mM HEPES를 사용 하 여 준비 pH 7.3-7.4.</li>
	<li>칼슘 없이 HEPES Tyrode 솔루션 준비 (캘리포니아2 +-H T 무료) 140.6 m NaCl m, 2.7 m KCl m, 1 mM MgCl2∙6H2O, 5.6 m m D-포도 당, 및 10 mM HEPES, pH 7.3-7.4를 사용 하 여.</li>
	<li>HEPES Tyrode 솔루션 124 mM 15.7 m m NaCl, 124.0 m m KCl, 1.8 m m CaCl2, 1 mM MgCl2∙6H2O, D-포도 당, 그리고 10 mM HEPES, pH를 5.6 m m를 사용 하 여 KCl (높은 K+)를 사용 하 여 준비 7.3-7.4.</li>
</ol>2. 실험 준비
<ol><li>H-T와 37 ° C 물 목욕을 사용 하 여 높은-K+ 솔루션 예 열.</li>
	<li>Myograph 시스템, 데이터 수집 하드웨어와 컴퓨터를 켭니다.</li>
	<li>신중 하 게 모든 myograph 챔버 채울 H T 솔루션의 5 mL.</li>
	<li>4 ° C H-T와 캘리포니아의2 +20 mL 두 접시를 채워-H T 솔루션, 각각, 얼음 저장 고.</li>
	<li>H-T 솔루션의 20 mL와 코팅된 10 cm 배양 접시를 실내 온도에 그것을 유지.</li>
</ol>3. 마우스 Mesenteric 동맥 해 부
<ol><li>자 궁 경부 전위에 의해 8 12 주 된 C57BL/6J 여성 또는 남성 마우스를 안락사. 향하도록 하는 복 부와 함께 마우스를 고정.</li>
	<li>70% 에탄올과 복 부 축 그리고는 사 타 구니에서 피부 복 부 정중 선 따라가 위로 잘라 첫 번째 절 개의 시작에서 아래쪽으로 양쪽에 다리를 절 개 하 게 합니다. 양쪽;에 다시 피부를 당겨 복 여 비슷한 절 개를 확인 합니다.</li>
	<li>가 위를 사용 하 여 잘라는 식도, 대 장 및 시체에서 맥 관 구조와 위장을 완전히 다른 결합 조직.</li>
	<li>집게와 피를 씻어 감기 H T 단계 2.4에서에서 준비 하 고 부드럽게 조직의 여러 번 H T 솔루션에서 린스를 포함 하는 접시에 격리 된 세그먼트를 이동 합니다.</li>
	<li>2.5 단계에서 준비 코팅된 페 트리 접시에 격리 된 세그먼트를 전송 하 고 실 온에서 mesenteric 동맥 해 부를 수행 합니다.</li>
	<li>위, 공장, 회장, caecum 시계 방향에서 밖으로 부드럽게 하 고 각각 위장과 caecum 왼쪽과 오른쪽 측면에 고정.</li>
	<li>Mesenteric 맥 관 구조 침대 스트레칭 및 해 부 mesenteric 동맥을 노출 하는 핀 소장을 수정. 참고:이 조건 하에서 동맥 혈관 위에 있습니다.</li>
	<li>해 부 현미경 동맥 및 전송 입체 현미경의 광원을 켭니다. 솔루션에는 전체 조직 몰입은 다는 것을 확인 하십시오.</li>
	<li>집게와 동맥 주위 지방 조직 클램프 그리고 해 부가 위 잘라 모든 결합 조직에 의해 동맥을 분리. 동맥을 부상 하지 마십시오.</li>
</ol>4. 동맥 장착
<ol><li>전송 및 mesenteric 동맥 나무에는 감기 캘리포니아2 +담가-무료 H T 솔루션 (단계 2.4에서에서 준비) 집게와 초과 동맥을 죄 여.</li>
	<li>동맥의 1.4 m m 부분에서 mesenteric 아케이드의 창 자 벽에 인접 잘라내어 두 개의 집게를 사용 하 여이 동맥 세그먼트의 양쪽 모두를 신중 하 게 열.</li>
	<li>스테인레스 스틸 와이어 길이, 2.5 c m의 두 세그먼트를 준비 하 고 같은 그릇에 넣어.</li>
	<li>부드럽게 클램프, 집게를 사용 하 여 동맥의 한쪽 끝을 신중 하 게 다른 집게의 도움으로 하나 하나 동맥의 루멘으로 2 개의 철사를 삽입 합니다. 전선을 똑바로 유지 됩니다 endothelium 만지지 마십시오 확인 하십시오.</li>
	<li>두 개의 집게를 사용 하 여 스레드 선박 외부 두 개의 강철 와이어 클램프를 동시에, 그리고 신중 하 게 H T 솔루션 (2.3 단계)으로 가득 이전 myograph 약 실에 페 트리 접시에서 선박을 전송.</li>
	<li>설치를 위한 공간을 만들기 위해 떨어져 턱을 나사. 두 개의 집게를 사용 하 여 두 개의 삽입된 와이어 중의 양쪽 모두를 클램프과 턱 간격 (그림 1A)에 배를 놓습니다.</li>
	<li>나사 마이크로미터 (그림 1B)에 연결 된 턱의 주위 클램프 와이어의 양쪽을 감싸 줍니다.</li>
	<li>시계 방향으로 왜곡 하 여 왼쪽 나사를 해결. 오른쪽 집게를 사용 하 여 와이어를 곧게 다음 시계 방향으로 (그림 1C)을 왜곡 하 여 오른쪽 나사를 해결 합니다. 배는 항상 턱 간격 안에 다는 것을 확인 하지만 손상을 피하기 위해 턱을 만지지 마십시오.</li>
	<li>마이크로미터 (그림 1D)를 사용 하 여 두 개의 문 턱을 닫습니다. 두 턱은 충분히 가까이 하지만 그들은 서로 고정된 와이어 고정된 와이어 상단은 만지지 마십시오 있는지 확인 하십시오.</li>
	<li>오른쪽 집게를 사용 하 여 신중 하 게 변환기, 강제로 연결 하는 턱의 모서리에 풀 었된 와이어를 접어 하 고 시계 방향으로 오른쪽 나사 (그림 1E) 주위 포장. 그런 다음 나사를 수정 합니다. 와이어의 왼쪽된 측면에서이 단계를 반복 하 고 왼쪽 나사 (그림 1 층)을 수정.</li>
	<li>마이크로미터 (그림 1G)을 신중 하 게 회전 하 여 약간 떨어져 턱을 이동 합니다. 선박을 스트레칭 하지 마십시오. 집게를 사용 하 여 변환기에서 와이어의 수평 평면에 와이어 마이크로미터 측에 이동. 두 턱 사이의 간격 단지 2 개의 철사를 수용할 수 있도록 신중 하 게는 마이크로미터를 회전 합니다.</li>
	<li>4.2-4.11 동맥 다른 챔버에 탑재 단계 반복 합니다. 장비에 모든 챔버를 연결, 챔버 커버, 100% 산소 공급 및 온도 프로브 연결 고 37 ° c에 난방 시작 차트 소프트웨어 열고 녹음을 시작 차트 뷰 창에서 시작 버튼을 누릅니다.</li>
	<li>약 20 분 동안 equilibrate.</li>
</ol>5입니다. 정규화
참고: 실험 조건을 표준화 하 고 혈관의 믿을 수 있는 생리 적인 응답을 얻을, 정규화 절차는 필요한15입니다. 활성 힘 및 선박의 내부 둘레 사이의 관계에 따라 와이어 myograph 시스템에 탑재 된 선박5,8, 내부 둘레 (IC)를 평가 하는 표준 정규화 프로그램 9. 짧게,를 계산 하는 IC (µ m), 읽고는 마이크로 미터 X 값 변환기로 값을 입력 힘, 즉, 휴식 하는 벽 긴장 (mN/m m), Y 값으로 출력 합니다. 프로그램 (X, Y)의 맞춤된 곡선을 반환 하 고 100 mmHg (IC100)의 과거 압력에 해당 하는 IC를 계산. 선박 정규화 된 내부 둘레 (IC1)로 설정 되어 때 활성 응답은 최대한.
<ol><li>장치에서 모든 채널에 대 한 0 힘을 설정 하 고 다른 1-2 분에 대 한 equilibrate.</li>
	<li>정규화 설정 에서 선택 하는 "DMT 메뉴, 그리고 다음과 같이 매개 변수 설정: 접 안 렌즈 교정 (mm/div): 0.36; 압력 (kPa) 대상: 13.3; IC1/IC100: 0.9; 온라인 평균 시간 (초): 2; 지연 시간 (초): 60. DMT 정규화 설정 창을 닫고 확인 버튼을 클릭 합니다.</li>
	<li>해당 채널에 대 한 DMT 정규화 창을 열려면 DMT 메뉴 에서 관심의 채널을 선택 합니다. 창에 다음과 같은 상수 값을 입력: 조직 종점 a1: 0.1; 조직 종점 a2: 4; 와이어 직경 (µ m): 40. 창 1.40 m m로 계산 된 선박 길이 표시합니다.</li>
	<li>적절 한 조직 챔버의 마이크로미터를 읽기. 마이크로미터 읽기 상자에 값을 입력 하 고 지점 추가 단추를 클릭 합니다. 이 값은 (X0) X의 초기 값이입니다. 60 s 지연 시간 후 창 힘 및이 마이크로 미터 값에 해당 하는 효과적인 압력 (ERTP)를 표시 합니다. 동시에, 마이크로 미터 독서 상자 활성화 됩니다.</li>
	<li>스트레치는 마이크로미터 반시계 방향으로 선회 하 여 정규화 되 고 선박. 마이크로미터 읽는 상자에 마이크로 미터 값을 입력 하 고 지점 추가 단추를 클릭 합니다. 60의 지연 시간을 기다린 s 다시.</li>
	<li>반복 단계 5.5, 선박, 스트레칭 "마이크로 미터 X1", 해당 IC1그릇을 스트레칭 하는 데 필요한 계산 된 마이크로미터 설정의 값을 표시 하는 창까지 마이크로 미터 값을 추가 하는 계속 해 서.</li>
	<li>마이크로 미터 x1 값을 설정 합니다. 참고: 정규화 된 긴장은 일반적으로 1-2만.</li>
</ol>6. 동맥 수축 녹음
참고: H-T와이 섹션에서 사용 되는 하이-K+ 솔루션을 포함 한 모든 솔루션 단계 2.1에서에서 준비 되었다.
<ol><li>정규화 후 15-20 분 동안 상공에 있는 배를 equilibrate. 참고:이이 단계에서 솔루션을 변경할 필요가 없습니다.</li>
	<li>높은-K+ 솔루션으로 배를 두 번 도전 한다.<ol>
<li>선박에 도전, H-T 솔루션을 H T 솔루션의 5 mL로 3-4 회 세척 뒤 10 분 동안 수축 유도 하 고 K+ 솔루션의 5 mL 바꿉니다. 참고: 일반적인 수축 3 미네소타와 2.5 mN12주위 일정 지속적인된 힘 극대 힘이 있다. 2.5 mN 아래 최대한 힘을 생성 하는 첫 번째 도전 또는 지속적인된 힘 감소 시간 또는 처음 복용량 보다는 더 낮은 힘을 생성 하는 두 번째 도전, 선박 삭제 되 고 추가 조사를 위해 사용 되지 않습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>수 축을 유도 하 고 K+ 솔루션의 5 mL와 선박을 도전 한다. 5 분 후 1 µ M neoliensinine의 최종 농도에 선 긴장을 챔버로 neoliensinine 재고 솔루션 (DMSO에 10 m m)14 의 0.5 µ L를 추가 합니다.</li>
	<li>힘은 안정 (이 일반적으로 몇 분 걸립니다), 4, 6, 8 및 10 µ M t를 생성 하 게 농도 증가 하는 농도를 2 µ M. 추가 1 µ L 재고 솔루션의 각 시간 증가를 챔버로 neoliensinine 재고 솔루션의 또 다른 0.5 µ L를 추가 그는 복용량 응답 곡선. 참고: 재고와 작업 농도 약 마다 다릅니다.</li>
</ol>

<ol><li>Bevan, J. A., Osher, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+direct+method+for+recording+tension+changes+in+the+wall+of+small+blood+vessels+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Agents+and+Actions%22%5BJournal%5D)">A direct method for recording tension changes in the wall of small blood vessels in vitro.</a> Agents and Actions. 2 (5), 257-260 (1972).</li>
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</ol>

저자는 공개 없다.

고혈압은 심혈 관 질환 등 심각한 합병증 및 신장 질환16광범위 한 보건 도전 이다. 고혈압의 병 인을 이해 하 고 탐구 더 고혈압 약물이이 분야에서 긴급 작업 되고있다. 혈압은 생성 하 고 순환의 주변 저항에 의해 유지. Poiseuille의 법률, 상대적으로 작은 동맥 순환 저항의 큰 비율을 생성 하 고 혈압3,10의 지배적인 생산자로 봉사. 따라서, 큰 동맥 보다는 오히려 작은 저항 동맥의 측정은 혈압의 연구에 더 적합 합니다. 와이어 myograph 기술 작은 저항 동맥의 생리 기능 및 혈관 질환의 병 인 연구에 가장 좋은 형식 중 하나입니다.
작은 그릇 와이어 myograph 시스템 다른 보고서에 잘 문서화 되어가 고 대동맥9같은 쥐 mesenteric 동맥<sup class="xr...

여기에 사용 된 작은 그릇 myograph 시스템 되었고 측정에 대 한 내부 직경 100에서 400 µ m. 고립 된 작은 배 (약 2 m m 긴)에 이르기까지 작은 저항 혈관의 수축 isometric 두 40 µ m 직경 철사에 의해 삽입 된 그 마이크로미터 측면과 변환기 쪽 턱에 순차적으로 탑재. 이 myograph 기술은 19721 에서 처음 제안 되었고 Mulvany와 그의 동료2,3,4,,56에 의해 주로 개발. 그것은 지금 안정 장비, 쉬운 성능 및 표준 정규화 절차7,,89성숙한 기술. 우리 마우스 mesenteric 동맥에서 측정에 대 한 몇 가지 수정이 방법을 활용.
혈관 평활 근 거의 모든 혈관의 벽을 라인. 그들의 기본적인 함수는 다양 한 자극에 대 한 응답에서 수 축을 통해 힘을 생성 하는. 혈관 부드러운 근육의 정상적인 수축 혈액 압력 조절에 필수적 이며 영양 보충10. 다양 한 질병, 고혈압, 심장 마비와 뇌. 을 포함 하 여 혈압의 비정상적인 규제 여러 연구 결과 비정상적인 혈압은 항상 역 기능 혈관 평활 근 수축7,11,,1213와 관련 된 제안 했다. Myograph 메서드는 vasoconstrictors, 저 해제 및 약물을 포함 하 여 다양 한 자극에 의해 유도 된 마우스 선박의 isometric 수축의 조사 수 있습니다. 수축의 성공적인 측정 혈압 유지 보수와 새로운 치료 접근을 탐구 하 고 혈관 부드러운 근육 관련 질환의 pathogenesis의 메커니즘을 이해 하는 데 도움이 됩니다.
많은 중국 약초; 혈관 질환의 임상 치료에 널리 사용 된 그러나, 그들의 성분에 일반적으로 알 수 없는 남아 있습니다. 따라서, 절연 및 효과적인 구성 요소 식별 새로운 약물의 개발에 대 한 매우 중요 하다. 멀티 와이어 myograph 기술 심사 허브에 활성 구성 요소에 대 한 간단한 접근을 제공 합니다. 우리 마우스 mesenteric 동맥 수축 조사를 작은 그릇 myograph 시스템을 사용 하 여 여러 연구 결과 보고 하 고 반대로 고혈압 활동12,,1314자연 화합물 발견. 여기, 우리는 자세한 설명 로터스 씨 (Nelumbo nucifera Gaertn.)의 배아에서 분리 된 neoliensinine의 이완 효과 평가 하 고 myograph 메서드에 대 한 프로토콜 14.

<table><tbody><tr><td>다중 와이어 근 그래프 시스템</td><td>DMT</td><td>610-M</td><td></td></tr><tr><td>스테인레스 스틸 와이어</td><td>DMT</td><td>400447</td><td></td></tr><tr><td>Geuder 해부 가위</td><td>DMT</td><td>400431</td><td></td></tr><tr><td>Dumont 집게</td><td>DMT</td><td>300413</td><td></td></tr><tr><td>PowerLab / 8SP</td><td>ADInstruments</td><td>ML785</td><td></td></tr><tr><td>소프트웨어</td><td>ADInstruments</td><td>LabChart 5</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>SigmaAldrich</td><td>S5886</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>SigmaAldrich</td><td>P5405</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>SigmaAldrich</td><td>C4901</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2&middot; 6H2O</td><td>시그마알드리치</td><td>M2393</td><td></td></tr><tr><td>D-글루코스</td><td>시그마알드리치</td><td>G6152</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>상곤 생명공학</td><td>A100511-0250</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>시그마알드리치</td><td>S8045</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>시그마알드리치</td><td>D2650</td><td></td></tr></tbody></table>

myography 와이어를 사용 하 여 마우스 mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

와이어 myograph 기술은 depolarization 응답, GPCR 촉진제/저 해제 및 약. 에 혈관 부드러운 근육의 수축 평가 하는 데 사용 됩니다. 그것은 혈관 부드러운 근육의 생리 기능, 고혈압 등 혈관 질환의 병 인 및 부드러운 근육 이완 약물의 개발에 많은 연구에서 널리 이용 된다. 마우스는 널리 사용 되는 모델 동물 질병 모델, 유전자 변형된 종자의 큰 수영장. 자세히 마우스 mesenteric 동맥의 수축 isometric을 측정 하기 위해이 방법을 도입 했습니다. 마우스 mesenteric 저항 동맥의 1.4 m m 세그먼트 격리 되었고 그것의 루멘을 통해 두 개의 강철 와이어를 전달 하 여 myograph 챔버에 장착. 평형 및 정규화 단계 후 선박 세그먼트 수축 분석 결과 이전에 두 번 하이-K+ 솔루션으로 potentiated 이었다. 신약 개발에서이 방법의 응용 프로그램의 예를 들어, 마우스 mesenteric에 새로운 자연 물질, neoliensinine, 중국 약초, 연꽃 씨 (Nelumbo nucifera Gaertn.)의 배아에서에서 분리의 이완 효과 측정 동맥입니다. Myograph 챔버에 장착 된 선박 세그먼트 높은-K+ 솔루션으로 자극 했다. 힘 긴장에 안정적인 지속적인된 단계에 도달 하면 neoliensinine의 누적 복용량 챔버에 추가 되었습니다. 우리는 neoliensinine 했다 복용량 의존 이완 효과 부드러운 근육 수축에 따라서 고혈압에 대 한 잠재적인 활동 곰 제안 발견. 또한, 선박 세그먼트 장착 후 적어도 4 시간을 살아남을 수 있고 여러 번, 우리는 제안에 대 한 높은-K+ 솔루션에 의해 유도 된 수축 유지 와이어 myograph 시스템 마약 검사의 시간이 걸리는 과정에 사용할 수 있습니다.

우리는 멀티 와이어 myograph 시스템을 사용 하 여 마우스 mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정 하 고 로터스 씨 (Nelumbo nucifera Gaertn.)의 배아에서 정화 neoliensinine의 이완 효과 평가 14. 마우스 mesenteric 저항 동맥은 고립 된 결합 조직의 청소 하 고 1.4 m m 세그먼트를 잘라. 동맥 세그먼트에 캘리포니아2 +2 개의 강철 철사에 의해 삽입 된-무료 페 트리 접시에 H T 솔루션 및 다음 세그먼트 myograph 챔버 (그림 2A)의 두 턱에 탑재 했다. 세그먼트를 장착, 2 개의 철사는 되도록 병렬, 가까이 하지 만지고 (그림 2B) 하지만 조정 되었다. 힘 측정 전에 선박 세그먼트 정상화 되었고 두 번 배를 ...

선법 myograph 혈관 부드러운 근육 기능과 화면 새로운 약물을 조사 하는 데 사용 됩니다. 우리 보고 마우스 mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정 및 혈관 평활 근의 새로운 relaxants 심사에 대 한 자세한 프로토콜.

Myography 와이어를 사용 하 여 마우스 Mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

우리 연구실은 수년 동안 혈관 평활근 수축성을 측정하기 위해 와이어 근 그래프 방법을 사용해 왔습니다. 우리는 이 기술을 사용하여 평활근 수축의 메커니즘을 연구합니다. 우리는 이 방법을 사용하여 고혈압 치료를 위한 새로운 약물을 탐색합니다.이 기술의 주요 장점은 용기 세그먼트가 장착 후 최소 4시간 동안 생존하고 높은 칼륨으로 인한 수축성을 여러 번 유지한다는 것입니다. 다중 채널 시스템은 신약에 대한 높은 수준의 치료 스크리닝을 위한 기회를 제공합니다. 안락사된 쥐의 몸을 복부가 위를 향하도록 고정하고 복부를 70% 에탄올로 적십니다.그런 다음 가위를 사용하여 사타구니에서 복부 정중선을 따라 피부를 자른 후 첫 번째 절개 시작부터 각 다리를 절개합니다. 양쪽 피부를 뒤로 당긴 다음 비슷한 절개를 하여 복막을 엽니다. 그런 다음 가위를 사용하여 식도, 결장 및 기타 결합 조직을 잘라 혈관 조직을 신체에서 공급하여 위장관을 완전히 격리합니다.HEPES-Tyrode 또는 H-T 용액으로 위장관의 혈액을 헹군 후, 실온에서 장간막 동맥 박리를 위해 분리된 분절을 코팅된 페트리 접시에 옮깁니다. 위, 제주눔, 회장, 맹장을 시계 방향으로 펴고 위와 맹장을 각각 왼쪽과 오른쪽에 고정합니다. 실체 현미경의 투과 광원을 켜고 핀으로 장을 고정하여 절개된 장간막 동맥을 노출시킵니다.그런 다음 집게로 동맥 주위의 지방 조직을 고정하고 박리 가위로 모든 결합 조직을 잘라 동맥을 조심스럽게 분리합니다. 겸자로 여분의 동맥을 잡고 장간막 동맥 나무를 차가운 칼슘 이온 프리 H-T 용액으로 옮기고 담그십시오. 장간막 아케이드의 장 벽 근위부 동맥의 1.4mm 부분을 잘라내고 두 개의 집게를 사용하여 이 동맥 부분의 양쪽을 조심스럽게 엽니다.2.5cm 길이의 스테인리스 스틸 와이어 두 조각을 준비하고 같은 접시에 넣습니다. 집게를 사용하여 동맥의 한쪽 끝을 부드럽게 조입니다. 그런 다음 다른 집게를 사용하여 두 개의 와이어를 동맥 내강에 하나씩 조심스럽게 삽입합니다.전선이 똑바로 유지되고 내피에 닿지 않도록 하십시오. 두 개의 집게를 사용하여 나사산 용기 외부에 두 와이어를 동시에 고정하고 페트리 접시에서 HT 용액으로 채워진 근그래프 챔버로 용기를 조심스럽게 옮깁니다. 챔버의 턱을 나사로 분리하여 장착할 공간을 확보한 다음 두 개의 집게를 사용하여 삽입된 두 와이어 중 하나의 양쪽을 잡고 용기를 턱 틈에 놓습니다.cl의 양쪽을 감습니다.amp마이크로미터에 연결된 턱의 나사에 와이어를 감습니다. 왼쪽 나사를 시계 방향으로 돌려 고정합니다. 그런 다음 집게를 사용하여 와이어를 곧게 펴십시오.그런 다음 시계 방향으로 돌려 오른쪽 나사를 고정합니다. 용기가 항상 턱 틈 안에 있는지 확인하되 손상을 방지하기 위해 턱을 만지지 마십시오. 마이크로미터를 사용하여 두 개의 턱을 닫습니다.두 개의 턱이 충분히 가깝지만 서로 닿지 않는지, 고정되지 않은 와이어가 고정 와이어 위에 있는지 확인하십시오. 오른쪽 집게를 사용하여 힘 변환기에 연결된 턱 모서리에 있는 나사가 풀린 와이어를 조심스럽게 접고 오른쪽 나사를 시계 방향으로 감습니다. 그런 다음 나사를 고정하십시오.와이어 왼쪽의 풀림과 감기를 반복하고 왼쪽 나사를 고정합니다. 다음으로, 두 턱 사이의 틈이 두 개의 와이어를 수용할 수 있도록 마이크로미터를 조심스럽게 회전하여 용기를 늘리지 않고 턱을 약간 떨어뜨립니다. 그런 다음 집게를 사용하여 마이크로미터 쪽의 와이어를 변환기 쪽에 있는 와이어의 수평면으로 이동합니다.다른 챔버에 동맥을 장착한 후 모든 챔버를 장비에 연결하고 챔버를 덮습니다. 100% 산소 공급 장치와 온도 프로브를 연결하고 섭씨 37도까지 가열을 시작합니다. 차트 작성 소프트웨어를 엽니다.시작 버튼을 눌러 녹음을 시작합니다. DMT 메뉴에서 관심 채널을 선택하여 해당 채널에 대한 DMT 정규화 창을 엽니다. 창에 다음 상수 값을 입력합니다.조직 끝점 a1, 0.1; 조직 종말점 a2, 4; 와이어 직경, 40.그러면 창에 계산된 용기 길이가 1.40mm로 표시됩니다. 해당 조직 챔버의 마이크로미터를 읽습니다. 마이크로미터 판독 상자에 값을 입력하고 Add Point' 버튼을 클릭합니다.이 값은 X의 초기 값이며, 60초 지연 후 창에는 이 마이크로미터 값에 해당하는 힘과 유효 압력이 표시됩니다. 동시에 마이크로미터 판독 상자가 활성화됩니다. 마이크로미터를 시계 반대 방향으로 돌려 정규화되는 용기를 늘립니다.마이크로미터 판독 상자에 마이크로미터 값을 입력하고 포인트 추가' 버튼을 클릭합니다. 다시 60초의 지연 시간을 기다립니다. 용기를 IC-1로 늘리는 데 필요한 계산된 마이크로미터 설정인 마이크로미터 X-1 값이 창에 표시될 때까지 용기를 계속 늘리고 마이크로미터 값을 추가합니다.마이크로미터를 X-one 값으로 설정합니다. 정규화 후 15-20분 동안 챔버의 혈관을 평형화합니다. 평형이 이루어지면 H-T 용액을 5ml의 고칼륨 용액으로 교체하여 10분 동안 수축을 유도하여 고칼륨 용액으로 용기에 챌린지를 합니다.신선한 고칼륨 용액에서 10분 배양을 반복한 후 5ml의 HT 용액으로 3-4회 세척합니다. 다시 말하지만, 수축을 유도하기 위해 5ml의 고칼륨 용액을 용기에 투여합니다. 5분 후, 0.5마이크로리터의 네오리엔시닌 원액을 챔버에 첨가하여 1마이크로몰 네오리엔시닌의 최종 농도에서 혈관을 이완시킵니다.몇 분 후 힘이 안정되면 0.5 마이크로 리터의 네오리 엔센닌 원액을 더 첨가하여 농도를 2 마이크로 몰로 높입니다. 매번 1마이크로리터의 원액을 첨가하여 농도를 4, 6, 8 및 10마이크로몰로 증가시켜 용량 반응 곡선을 생성합니다. 정규화 절차 동안 선박은 IC-100의 값에 도달할 때까지 여러 번 늘어났으며 각 늘어난 주기에는 강력한 수축, 빠른 이완 및 60초 내 힘 유지가 포함되었습니다.높은 칼륨 용액에 의해 유도된 혈관 평활근의 수축은 일반적으로 강건한 단계와 지속적인 단계의 두 단계를 보였습니다. 우리는 다중 와이어 근경사진 시스템을 사용하여 마우스 장간막 동맥의 등척성 수축성을 측정하는 방법을 설명했습니다. 이 방법은 혈관 평활근의 기능을 평가하고 평활근의 이완제를 선별하는 데 사용할 수 있습니다.이 방법과 다른 방법의 주요 차이점은 장착 단계에 있습니다. 여기에 사용된 이 단계는 수행하기 쉽고 조직이나 장치를 손상시키지 않습니다. 이 절차에 따라 EP 및 Angiotensin II와 같은 다른 자극제도 이 작용제에 민감한 일부 새로운 약물을 찾기 위해 평활근 수축을 자극하는 데 사용할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

절연 mesenteric의 동맥에 힘 측정을위한 자동 myography 방법이 설명되어 있습니다. 그것은 phenylephrine 및 세포외 칼슘에 대한 답변을 결정하기 위해 510A Mulvany - Halpern 자동 듀얼 와이어 Myograph을 사용합니다. 300 μm의, 독립적으로 - 방법은 60 직경의 작은 선박에 agonists에 사시 응답 일관성있는 결정 수 있습니다.

자동 와이어 Myography를 사용 Mesenteric 동맥 수축과 휴식 연구

압력 myography에서 혈관의 손상 작은 세그먼트는 두 개의 작은 캐 뉼러에 장착하고 적절한 내강 압력으로 가압. 여기, 우리는 마우스 3의 혈관 이완 반응을 측정하는 방법을...

압력 Myography를 사용 쥐과 저항 동맥의 기능을 평가

압력 myography는 가압 할 때 지속적인 수축을 개발하는 작은 동맥의 vasoactivity을 평가하는 데 사용됩니다. 이 원고는 쥐, vasoactivity 혈관 직경에 관내 압력의 영향에서 작은 장간막 동맥의 고립 된 세그먼트에서 평가하기위한 세부 프로토콜을 제공합니다.

압력 Myography를 사용하여 저항 장간막 동맥에서 근육 조직 대응 및 Vasoactivity 평가

뮤린 좌심실 유두근는 체외에서 심근 수축력을 조사하는데 사용될 수있다. 이 문서 자세히 분리 실험 프로토콜 심장 수축 특성을 연구에 대해 설명합니다.

마우스의 심장 수축력의 조사에 대 한 격리 유두 근육의 수축력 측정

이 프로토콜은 마우스에서 분리 된 장 간 막 동맥의 경 벽 등각 장력을 평가 하는 와이어 묘 조 그래피의 사용을 설명 하며, 내 피 세포 및 혈관 주위 지방 조직에서 방출 되는 요인에의 한 변조를 특별히 고려 합니다.

혈관 주위 지방 조직에 의해 변조에 초점을 맞춘 분리 된 장 간 동맥을 사용 하 여 혈관 톤 응답성의 평가

본 프로토콜은 마우스 대동맥 내피 기능의 실험적 생체외 평가에서 다중 챔버 근초음파 시스템을 사용하는 텐소메트릭 근초음파 기술의 개념 및 기술적 적용을 기술한다.

Tensometric Small Volume Chamber Myography 를 이용한 마우스 흉부 대동맥의 내피 의존성 혈관 이완 측정

우리는 비디오 intraluminal monofilament를 사용하여 성인 마우스의 중간 대뇌 동맥 폐색을 생산하는 방법을 보여줍니다. 또한 2,3,5 - triphenyltetrazolium 염화물 (TTC) 염색법에 의해 대뇌 경색의 범위를 평가하는 방법을 보여줍니다.

중간 대뇌 동맥 폐색의 마우스 모델

중간 대뇌 동맥 (MCA) 내고 동물 모델에 초점 대뇌 국소 빈혈을 연구하는 기술입니다. 이 방법에서는, 중간 대뇌 동맥 craniotomy에 의해 노출 소작된에 의해 출혈도 잡았. 이 방법은 높은 재현성 경색 볼륨과 사용 가능한 다른 방법에 비해 증가 이후 수술 생존 속도를 제공합니다.

마우스에 영구 중간 대뇌 동맥 내고의 응용

내피 내피 / glycocalyx 표면 층은 이상적인 intravital 현미경을 사용하여 공부하고 있습니다. Intravital 현미경은 기술적 같은 폐 등 움직이는 장기에 도전하고 있습니다. 우리는 동시 brightfield 및 형광 현미경은 자유롭게 - 이동에 내피 표면 층의 두께를 추정하는 데 사용할 수 있습니다 방법을...

마우스 폐 내피 표면 층의 생체 측정

소장은 자주 혈액 흐름에 부정적인 영향을주고 영양분 흡수에 영향을 미칠 수있는 독소에 노출된다. , 화합물 또는 관심의 독소를 multimyograph 및 장간막 동맥을 사용하고 정맥 분리하는 vasoactivity에 대한 검사를 할 수 있습니다.

생물 검정으로 소 장간막 동맥과 정맥의 섹션을 분리하고 사용하면 소장에서 Vasoactivity을 테스트

배우세요 와이어 마이오그래프 기법을 이용하여 마우스 장간막 동맥의 등장성 수축을 측정하는 방법을 알아보세요. 이 기술은 혈관 평활근 기능 평가와 고혈압 치료제 선별에 활용됩니다.

Myography 와이어를 사용 하 여 마우스 Mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정

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