Name: 마우스에 있는 기종의 평가를 위한 일정한 압력의 밑에 폐 고정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-26T12:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 48 s
Description: 학습하세요 마우스 폐 고정 기법으로 담배 연기 유발 폐기종의 조직학적 평가를 수행하는 방법을 배우세요. 일정한 압력을 유지하여 폐가 붕괴되지 않고 여러 폐를 동시에 고정할 수 있습니다.

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이 작품은 JSPS KAKENHI 교부금 번호 26461199 (T. 사토)와 환경 및 성별 특정 의학 연구소, 준텐도 대학 의학 대학원, 그랜트 번호 E2920 (T. 사토)에 의해 부분적으로 지원되었습니다. 이 파동은 현재의 방법의 설계와 원고 작성에 아무런 역할이 없었다.

다음 방법은 준텐도 대학 의과 대학의 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다. 2006년 6월 1일, 일본 과학위원회의 동물 실험의 적절한 수행에 대한 지침이 준수되었습니다. 이 방법에는 1) 마우스 해부, 2) 폐 퇴출 및 3) 특수 장비에 의한 폐 조직의 고정의 세 가지 주요 단계가 있습니다. 전형적으로, 폐 시편은 고정12,15,16,17,18의48 시간 후에 박베제처리된다.
1. 마우스 해부
<ol><li>마우스의 체중을 측정한 다음 투여할 펜토바르비탈의 양을 결정합니다.</li>
	<li>체중의 70 mg/kg의 복용량에 펜토 바르 비탈 내부를 주입하고 발가락 핀치에 대한 반응이 없는 상태에서 마취를 확인하십시오.</li>
	<li>피부와 근육에 침투 할 때까지 45 ° 각도로 바늘을 주입하십시오. 플런저를 그리고 공기 진공을 확인한 다음 펜토바르비탈을 주입합니다.</li>
	<li>반사 운동이 없는 상태에서 마취를 확인하십시오. 참고 : 안락사 마우스와 반대로 마취 마우스를 사용하는 것은 완전히 폐 흥분을 위해 권장됩니다.</li>
	<li>내측 선에서 마우스 피부와 복부 근육을 자르고 뇌영역을 목표로합니다.</li>
	<li>더 넓은 작업 공간을 제공하기 위해 측면으로 잘라냅니다.</li>
</ol>2. 폐 분노
<ol><li>다이어프램 층을 노출하고 집게로 찔러.</li>
	<li>흉부 공간을 열고 흉골 영역을 잘라 폐와 심장을 명확하게 볼 수 있습니다.</li>
	<li>왼쪽 심방과 우심실에서 심장을 잘라냅니다.</li>
	<li>그림 1과같이 캐뉼라 (24 G)를 우심실 부위에 삽입하고 폐 동맥에 도달 할 때까지 두개 부위로 지시하십시오.</li>
	<li>펌프를 켜고 모든 폐 조직이 흰색으로 변할 때까지 1x 인산완충 식염수(PBS)가 순환(약 200 mL/h)되도록 합니다.</li>
</ol>3. 폐 조직의 고정
<ol><li>기관, 폐 및 심장을 제거합니다.</li>
	<li>주변 결합 조직을 절단하여 세 가지 장기를 모두 해방하십시오.</li>
	<li>오른쪽 주 기관지와 봉합사 스레드를 묶고 오른쪽 폐의 모든 로브를 잘라냅니다.</li>
	<li>(선택 사항): 오른쪽 폐의 로브는 네 부분으로 구성됩니다. 오른쪽 주요 기관지에서 이러한 부분을 잘라 냉동 조직 샘플로 처리를위해 부품을 분할합니다.</li>
	<li>10 mL 주사기 내부에있는 고정 제에 왼쪽 폐의 심장과 로브를 삽입하십시오. 주의: 고정제는 위험합니다. 적절한 보호 장비(예: 긴 고무 장갑)를 착용하고 통풍이 잘 되는 방에서 작업하십시오.</li>
	<li>그림 2와같이 10 mL 주사기를 사용하여 폐를 팽창시키는 진공 상태를 만듭니다.</li>
	<li>캐뉼라(20G)를 기관에 넣고 매듭을 묶습니다.</li>
	<li>1 mL 주사기를 사용하여 누출을 확인하기 위해 고정 제로 폐를 팽창시.</li>
	<li>그림 3에도시된 바와 같이 폐 고정 압력 장비로의 이송.</li>
	<li>기간을 고정 한 후, 매듭으로 기관을 묶는 폐 샘플을 제거합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Vogelmeier, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+strategy+for+the+diagnosis%2C+management%2C+and+prevention+of+chronic+obstructive+lung+disease+2017+report.+GOLD+Executive+Summary%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Global strategy for the diagnosis, management, and prevention of chronic obstructive lung disease 2017 report. GOLD Executive Summary.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 195 (5), 557-582 (2017).</li>
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<li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescence+marker+protein-30+protects+mice+lungs+from+oxidative+stress%2C+aging%2C+and+smoking%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Senescence marker protein-30 protects mice lungs from oxidative stress, aging, and smoking.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 174 (5), 530-537 (2006).</li>
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<li>Hsia, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+official+research+policy+statement+of+the+American+Thoracic+Society%2FEuropean+Respiratory+Society%3A+standards+for+quantitative+assessment+of+lung+structure%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">An official research policy statement of the American Thoracic Society/European Respiratory Society: standards for quantitative assessment of lung structure.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 181 (4), 394-418 (2010).</li>
<li>Kasagi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tomato+juice+prevents+senescence-accelerated+mouse+P1+strain+from+developing+emphysema+induced+by+chronic+exposure+to+tobacco+smoke%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Tomato juice prevents senescence-accelerated mouse P1 strain from developing emphysema induced by chronic exposure to tobacco smoke.</a> American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 290 (2), L396-L404 (2006).</li>
<li>Koike, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complete+lack+of+vitamin+C+intake+generates+pulmonary+emphysema+in+senescence+marker+protein-30+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Complete lack of vitamin C intake generates pulmonary emphysema in senescence marker protein-30 knockout mice.</a> American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 298 (6), L784-L792 (2010).</li>
<li>Koike, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitamin+C+prevents+cigarette+smoke-induced+pulmonary+emphysema+in+mice+and+provides+pulmonary+restoration%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+Cell+and+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Vitamin C prevents cigarette smoke-induced pulmonary emphysema in mice and provides pulmonary restoration.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 50 (2), 347-357 (2014).</li>
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<li>Saad, M., Ruwanpura, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+Processing+for+Stereological+Analyses+of+Lung+Structure+in+Chronic+Obstructive+Pulmonary+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Tissue Processing for Stereological Analyses of Lung Structure in Chronic Obstructive Pulmonary Disease.</a> Methods in Molecular Biology. 1725, 155-162 (2018).</li>
<li>Thurlbeck, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+internal+surface+area+of+nonemphysematous+lungs%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Review+of+Respiratory+Disease%22%5BJournal%5D)">The internal surface area of nonemphysematous lungs.</a> The American Review of Respiratory Disease. 95 (5), 765-773 (1967).</li>
<li>Saetta, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Destructive+index%3A+a+measurement+of+lung+parenchymal+destruction+in+smokers%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Review+of+Respiratory+Disease%22%5BJournal%5D)">Destructive index: a measurement of lung parenchymal destruction in smokers.</a> The American Review of Respiratory Disease. 131 (5), 764-769 (1985).</li>
<li>Renne, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendation+of+optimal+method+for+formalin+fixation+of+rodent+lungs+in+routine+toxicology+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Recommendation of optimal method for formalin fixation of rodent lungs in routine toxicology studies.</a> Toxicologic Pathology. 29 (5), 587-589 (2001).</li>
<li>Schneider, J. P., Ochs, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+of+mouse+lung+tissue+dimensions+during+processing+for+morphometry%3A+a+comparison+of+methods%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Alterations of mouse lung tissue dimensions during processing for morphometry: a comparison of methods.</a> American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 306 (4), L341-L350 (2014).</li>
<li>Wright, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+of+pulmonary+arterial+pressure+and+airflow+obstruction+to+emphysema%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">Relationship of pulmonary arterial pressure and airflow obstruction to emphysema.</a> Journal of Applied Physiology. 74 (3), 1320-1324 (1993).</li>
<li>Wright, J. L., Churg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cigarette+smoke+causes+physiologic+and+morphologic+changes+of+emphysema+in+the+guinea+pig%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Review+of+Respiratory+Disease%22%5BJournal%5D)">Cigarette smoke causes physiologic and morphologic changes of emphysema in the guinea pig.</a> The American Review of Respiratory Disease. 142 (6 Pt 1), 1422-1428 (1990).</li>
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<li>Wright, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Airway+remodeling+in+the+smoke+exposed+guinea+pig+model%5BTitle%5D)+AND+%22Inhalation+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Airway remodeling in the smoke exposed guinea pig model.</a> Inhalation Toxicology. 19 (11), 915-923 (2007).</li>
<li>Limjunyawong, N., Mock, J., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Instillation+and+Fixation+Methods+Useful+in+Mouse+Lung+Cancer+Research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research.</a> Journal of Visualized Experiments. (102), e52964(2015).</li>
<li>Roos, A. B., Berg, T., Ahlgren, K. M., Grunewald, J., Nord, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+generating+pulmonary+neutrophilia+using+aerosolized+lipopolysaccharide%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A method for generating pulmonary neutrophilia using aerosolized lipopolysaccharide.</a> Journal of Visualized Experiments. (94), (2014).</li>
<li>Laucho-Contreras, M. E., Taylor, K. L., Mahadeva, R., Boukedes, S. S., Owen, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+measurement+of+pulmonary+emphysema+and+small+airway+remodeling+in+cigarette+smoke-exposed+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Automated measurement of pulmonary emphysema and small airway remodeling in cigarette smoke-exposed mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (95), 52236(2015).</li>
<li>Nakanishi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clarithromycin+prevents+smoke-induced+emphysema+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Clarithromycin prevents smoke-induced emphysema in mice.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 179 (4), 271-278 (2009).</li>
<li>Maeno, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD8%2B+T+Cells+are+required+for+inflammation+and+destruction+in+cigarette+smoke-induced+emphysema+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">CD8+ T Cells are required for inflammation and destruction in cigarette smoke-induced emphysema in mice.</a> Journal of Immunology. 178 (12), 8090-8096 (2007).</li>
<li>Sato, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+fixation+for+total+preanalytic+phase+evaluation+in+pathology+laboratories%3A+a+comprehensive+study+including+immunohistochemistry%2C+DNA%2C+and+mRNA+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Pathology+International%22%5BJournal%5D)">Optimal fixation for total preanalytic phase evaluation in pathology laboratories: a comprehensive study including immunohistochemistry, DNA, and mRNA assays.</a> Pathology International. 64 (5), 209-216 (2014).</li>
</ol>

저자는 선언할 경쟁적인 이해관계가 없습니다.

여기에 제시 된 설치류 폐에 대한 고정 절차는 소설이 아닙니다. 그러나 이 시스템에는 몇 가지 장점이 있습니다. 첫째, 한 번에 동일한 조건으로 많은 폐 (최대 20)를 해결할 수 있습니다. 독성 병리학 의 사회는 중력 주입을 위한 압력이 22-25 cmH2O22에서변화한다는 것을 말합니다. 특히, 여러 연구는 25 cmH2O13, 19,23,24,25,26,27의 압력에서 폐 고정을 수행했습니다. , 현재 시스템<sup class="x...

COPD는 사망의 주요 한 세계적인 원인 중 하나입니다1. 담배 연기는 COPD의 가장 중요한 원인이지만 병인의 메커니즘은 불완전하게 정의되어 있습니다. COPD는 공기 흐름의 점진적 제한 및 폐의 비정상적인 염증 반응을 포함하여 두 가지 주요 특성을 보여줍니다. 폐기장애는 COPD 환자의 폐에서 빈번하게 발생한다2. 폐기종의 병리학적 발견은 폐포 벽 파괴3을특징으로한다. 여러 동물 종은 생체 내에서 COPD 모델(즉, 개, 기니피그, 원숭이 및 설치류)을 생성하는데 사용되어 왔다.4. 그러나, 마우스는 COPD 모델의 구성에 가장 일반적으로 사용되고 있다. 이는 저렴한 비용, 유전자 변형 능력, 광범위한 게놈 정보 가용성, 항체의 가용성 및 다양한 마우스 균주를 사용하는 능력을 포함하여 많은 장점을 갖는다5. 현재, 인간 COPD의 전체 기능을 모방할 수 있는 마우스 모델은 없다; 따라서, 개별 연구원은 특정 COPD 연구에 가장 적합한 모델을 선택해야합니다6. 폐기종 마우스 모델은 현재 이용 가능한 많은 COPD 마우스 모델 중 하나입니다. 추가 모델은 악화 마우스 모델, 전신 동이환 모델 및 COPD 감수성 모델7을포함한다.
폐기종 마우스 모델은 화학약제 및 담배 연기 노출을 포함하는 여러 종류의 외인성 제제에 의해 생성될 수있다 4. 화학적 노출(예를 들어, 엘라스타제)은 심각한 유형의 기종을 생성하는 반면, 담배 연기는 경증 기종8,9를초래한다. 담배 연기는 COPD의 병인에 대한 주요 원인으로 여겨진다; 따라서, COPD 마우스 모델을 만드는 수단으로 담배 연기의 선택은 합리적인10이다. 많은 연구는 마우스에 기종을 만들기 위해 담배 연기를 사용했습니다. 예를 들어, Nikula 등은 B6C3F1 암컷 마우스로부터 7개월 또는 13개월 동안 담배 연기에 노출시킴으로써 기종 마우스 모델을 성공적으로생성하였다. 우리는 또한 노화 마커 단백질/SMP-30 KO 마우스12를통해 기종 마우스 모델을 확립했습니다. 담배 연기 노출에 의해 이 온화한 기종 모형을 제대로 구상할 수 있는 폐 고정 방법을 능력을 발휘하는 것이 중요합니다.
폐 고정을위한 다양한 방법이13설립되었습니다. 그러나, 폐기종14를평가하기 위한 폐 조직 고정의 금 표준 방법은 없다. 이 실험실에서 여러 연구는 여기에 제시 된 고정 시스템이 기종12,15, 16,17,18을평가하기위한 안정적인 조건을 생성하여 유용하다는 것을 보여 주었다. 현재 시스템의 주요 장점은 폐 붕괴 또는 디플레이션없이 한 번에 동일한 조건으로 많은 폐를 해결할 수 있다는 것입니다. 현재 폐 고정 시스템은 주어진 기간 동안 적절한 일정한 압력으로 폐 표본을 팽창 할 수있는 몇 가지 특수 장비를 사용합니다. 이 특수 장비는 하부 컨테이너, 상부 컨테이너 및 펌프를 포함한 세 부분으로 구성됩니다. 폐 시편은 가압 고정제에 연결되는 하부 용기에 배치되어 상부 및 하부용기(19)사이의 제제 수준에서 25cmH2O 압력 차이를 초래한다.

<table><tbody><tr><td>10 % 포르말린 (포르말린 중성 완충 용액)</td> <td>Wako</td><td>060-01667</td><td></td></tr><tr><td>구부러진 집게</td><td>Hammacher</td><td>HSC187-11</td><td></td></tr><tr><td>캐뉼라, 크기 20G</td><td>Terumo</td><td>SR-FS2032</td><td></td></tr><tr><td>캐뉼라, 크기 22G</td><td>Terumo</td><td>SR-OT2225C</td><td>폐</td></tr> 겸자 <tr><td></td><td>Hammacher</td><td>HSC184-10</td><td></td></tr><tr><td>Kimtowel</td><td>일본 종이 크레시아 (Kimberly Clark)</td><td>61000</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipe</td><td>일본 종이 크레시아 (Kimberly Clark)</td><td>62011</td><td></td></tr><tr><td>하부 용기 (아크릴 유리 재료)</td><td>도쿄 사이언</td>스 <td>맞춤형</td><td>압력 장비 부품</td></tr><tr><td>롤러 펌프</td><td>닛신 사이언티픽 코퍼레이션</td><td>NRP-75</td><td>폐 배출 펌프</td></tr><tr><td>기계 롤러 펌프 RP-2000</td><td>Eyela (도쿄 Rikakikai Co. Ltd)</td><td>160200</td><td>압력 설비 펌프</td></tr><tr><td>실리콘 튜브 &Oslash; 9 mm</td><td>Sansyo</td><td>94-0479</td><td>압력 설비 부품</td></tr><tr><td>Somnopentyl (64.8 mg/mL)</td><td>Kyoritsu Seiyaku</td><td>SOM02-YA1312</td><td>펜토바르비탈</td></tr><tr><td>나트륨 수술용 가위</td><td>Hammacher</td><td>HSB014-11</td><td></td></tr><tr><td>봉합사, 크기 0</td><td>Nescosuture</td><td>GA01SW</td><td></td></tr><tr><td>주사기, 1mL</td><td>테루모</td><td>SS-01T</td><td></td></tr><tr><td>주사기, 바늘 테</td><td>루모</td><td>SS-01T2613S</td><td></td></tr><tr><td>주사기 10mL</td><td>테루모</td><td>SS-10ESZ</td><td></td></tr><tr><td>삼방향 마개</td><td>테루모</td><td>TS-TR1K01</td><td></td></tr><tr><td>상부 용기(아크릴 유리 소재)</td><td>도쿄 사이언</td>스 <td>맞춤형</td><td>압력 기기 부품</td></tr></tbody></table>

마우스에 있는 기종의 평가를 위한 일정한 압력의 밑에 폐 고정

Lung Fixation under Constant Pressure for Evaluation of Emphysema in Mice

폐기종은 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD)의 중요한 특징입니다. 기종 마우스 모형을 관련시키는 연구 결과는 폐의 믿을 수 있는 조직학 견본을 생성하기 위하여 최적 폐 고정을 요구합니다. 주로 공기와 조직으로 구성된 폐의 구조 구성의 특성으로 인해 고정 과정에서 붕괴또는 수축 될 위험이 있습니다. 다양한 폐 고정 방법이 존재하며, 각각은 자신의 장점과 단점을 가지고 있습니다. 여기에 제시된 폐 고정 방법은 기종 마우스 폐 모델을 사용하여 연구를 위한 최적 조직 평가를 가능하게 하기 위하여 일정한 압력을 이용합니다. 주요 장점은 한 번에 동일한 조건으로 많은 폐를 고칠 수 있다는 것입니다. 폐 표본은 만성 담배 연기 노출 마우스로부터 수득된다. 폐 고정은 일정한 압력의 생산을 가능하게 하는 특수 장비를 사용하여 수행됩니다. 이 일정한 압력은 합리적으로 팽창 된 상태에서 폐를 유지합니다. 따라서, 이 방법은 담배 연기 유발 경증 기종을 평가하기에 적합한 폐의 조직학적 표본을 생성한다.

앞서 설명한 바와 같이, 확장된 일정한 압력을 생성하는 특수 장비는 세 부분으로 나눌 수있다(도 3A). 하부는 폐 샘플을 삽입하는 지점입니다(도4A). 폐는 캐뉼라(20 G)를 통해 3방향 스톱 콕을 이용하여 포르말린 흐름의 끝까지 연결된다(도4B). 압력은 하부 용기와 상부 용기 사이의 고정제의 상이한 표면 수준에서 생성된다(그림5). 압력 차이는 25 cmH2O; 그러나 높이 조절 노브를 사용하여 압력은 25-30 cmH2O 범위 내에서 조정할 수 있습니다(그림 5). 펌프는 튜브를 통해 하부 및 상부 용기를 연결합니다(그림<str...

여기에 제시된 폐 고정을 위한 유용한 프로토콜은 기종의 마우스 모델에서 폐 견본의 조직학적 평가를 위한 안정한 조건을 만드는. 이 모델의 주요 장점은 폐 붕괴 또는 디플레이션없이 동일한 일정한 압력으로 많은 폐를 고정 할 수 있다는 것입니다.

Emphysema is a significant feature of chronic obstructive pulmonary disease (COPD). Studies involving an emphysematous mouse model require optimal lung ...

고정 장치 내의 일정한 압력은 경증 담배 연기 유도 기종을 평가하기에 적합한 조직론적 폐 표본을 생성하는 합리적으로 팽창된 상태에서 폐를 유지합니다. 이 모델의 주요 장점은 폐 붕괴 또는 디플레이션없이 동일한 일정한 압력을 사용하여 동시에 많은 폐를 고칠 수 있다는 것입니다. 절차를 시연하는 것은 내 실험실에서 대학원생 인 나오코 아라노가 될 것입니다.반사 운동에 대한 반응의 부족을 확인 한 후 마우스의 내측 라인을 따라 피부와 근육 조직에 절개를하고, 세프랄 영역을 목표로하고, 더 넓은 작업 공간을 만들기 위해 측면으로 잘라. 다이어프램 층을 노출 한 후 집게로 조직을 뚫고 흉부 공간을 엽니다. 폐와 심장이 시각화될 수 있도록 흉골 부위를 잘라냅니다.그리고 왼쪽 심실과 오른쪽 심실을 잘라. 관류 펌프에 연결된 24 게이지 캐뉼라를 오른쪽 심실 부위에 삽입하고 폐 동맥에 도달 할 때까지 캐뉼러를 세팔 영역으로 안내하십시오. 그런 다음, 펌프를 켜고 모든 폐 조직이 백색으로 변경될 때까지 PBS의 약 200 밀리리터로 조직을 1시간 동안 인퓨즈합니다.관류의 끝에서 기관, 폐 및 심장을 둘러싼 결합 조직을 잘라 내고 봉합사를 사용하여 올바른 주요 기관지를 묶습니다. 다음으로, 오른쪽 폐의 모든 개별 엽을 수확하고 왼쪽 폐의 심장과 엽을 적절한 고정제를 포함하는 개별 10 밀리리터 주사기에 넣습니다. 플런저를 철회하여 주사기에 진공을 만들어 폐를 팽창시키고 주사기에서 폐를 제거합니다.기관지에 20 게이지 캐뉼라를 삽입하고 봉합사를 사용하여 캐뉼라를 제자리에 고정시하십시오. 캐뉼라에 고정으로 채워진 1 밀리리터 주사기를 연결하고 폐를 추가 고정 장치로 채우면 누출을 확인하십시오. 고정 시 폐 시편이 폐판에서 분리되는 것을 방지하기 위해 삽입 부위를 고정해야 합니다.그런 다음 조직을 폐 고정 압력 장비로 옮기고 샘플을 제거하고 고정 기간이 끝날 때 매듭으로 기관체를 묶는다. 폐 시료가 삽입되는 폐 고정 압력 장비의 하부 성분은 20 게이지 캐뉼라를 통해 3방향 스톱콕을 사용하여 포르말린 흐름의 끝에 연결된다. 압력은 하부 구획과 상부 구획 사이의 고정의 다른 표면 수준에서 생성됩니다.압력 차이는 25센티미터의 물이지만 높이 조절 노브를 사용하여 압력을 25~30cm 의 수로 조정할 수 있습니다. 펌프는 하부 및 상부 컨테이너를 연결하여 고정 표면 높이에서 25cm 차이를 유지하며 에이전트의 흐름을 지시합니다. 48시간 고정 후 주변 공기에 노출된 SMP30 녹아웃 마우스의 폐는 표시된 영공 확대를 나타내지 않는다.그러나, 만성 담배 연기에 노출된 SMP30 녹아웃 마우스에서 상당한 영공 확대 및 폐포 벽 파괴가 관찰된다. 또한, 폐 시편의 평균 선형 요격 및 파괴 지수는 공기 노출 동물보다 SMP30 녹아웃 마우스가 노출된 연기에서 현저히 크다. 우리의 실험실은 10%의 포르말린을 사용하지만 연구원은 실험적인 필요에 따라 다른 고정 에이전트를 사용할 수 있습니다.입증된 고정 시스템을 사용하여 보고된 바와 같이 폐 시료는 형태성 평가를 위해 다양한 마우스 폐기종 모델으로부터 수확될 수 있다. 고정 요원은 항상 적절한 인력 보호 장비를 착용하고 통풍이 잘되는 방에서 작동위험 할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

환풍기 유도 폐 손상에 대한 murine 모델은 급성 폐 손상을 연구하는 중요한...

마우스의 급성 폐 상해를 유발하는 압력 제어 환기

SCIREQ Inc의 몬트리올, 품질 관리, 현재의 프로토콜은 호흡 역학의 측정​​뿐만 아니라 강제 진동 기술을 사용하여 마우스의 흡입 메타 콜린에 대한기도 응답의 평가 (flexiVent을 실행하는 데 필요한 절차에 대한 자세한 단계별 설명을 제공합니다 , 캐나다).

강제 진동 기술을 사용하여 마우스의 호흡기 시스템 역학의 평가

이 프로토콜의 목표는 COPD의 쥐 모델에서 만성 폐 병리학을 정량화하는 자동화된 방법을 제공하는 것입니다. 이 프로토콜에는 생쥐를 담배 연기(CS)에 노출시키고, 폐 기능을 측정하고, 폐를 팽창시키고, 형태 측정 방법을 사용하여 생쥐의 폐기종 및 소기도 재형성을 측정하는 것이 포함됩니다.

담배 연기에 노출 된 마우스의 폐 폐기종 및 작은기도 리모델링 자동 측정

여기에서는 마우스의 폐압-부피 곡선을 간단하고 안정적으로 측정할 수 있는 프로토콜을 제시하며, 두 가지 일반적인 폐 병리학인 폐 섬유증과 폐기종에서 표현형 실질 변화를 감지할 수 있을 만큼 충분히 민감하다는 것을 보여줍니다. 이 지표는 병리학의 발달에 따른 폐의 구조적 변화를 정량화할 수 있는 수단을 제공합니다.

마우스 폐의 압력 볼륨 곡선의 측정

이 논문의 목적은 크게 폐암 또는 다른 병리와 설정 및 마우스 폐의 분석에 도움이 될 간단한 방법을 설명하는 것입니다. 우리는 간단하고 확실하게 폐 instillations, 정착, 폐 용적 측정을 수행하는데 3 프로토콜을 제시한다.

마우스 폐 암 연구에 유용한 점안 및 고정 방법

이 연구는 반복적으로 오존의 높은 농도에 쥐를 노출 하 여 새로운 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD) 동물 모델의 성공적인 세대를 설명 합니다.

반복된 오존 노출에 의해 쥐에 만성 폐쇄성 폐 질환 모델의 생성

내부 폐 표면적 (ISA)은 폐 질환 및 부상 유발 폐포 재생에서 폐 형태 및 생리학을 평가하는 데 중요한 기준입니다. 폐 절제술 및 인공 삽입물 마우스 모델에서 ISA의 측정 편향을 최소화 할 수있는 표준화 된 방법을 설명합니다.

마우스 폐 전 절제술 및 보철물 삽입을 통한 내시경 표면 측정을위한 표준화 된 방법

이 방법의 목적은 폐 종양 병리학의 검사 및 폐에 전이의 평가를 위한 마우스 폐의 관류, 인플레이션 및 고정을 위한 간단하고 효율적인 방법을 제시하는 것입니다.

종양 연고학을 위한 마우스 폐의 관류 및 인플레이션

여기에서는 병변 측의 기관내 점안을 통해 편측성 블레오마이신 유도 폐섬유증 모델에서 환기 부위를 정량화하기 위해 마이크로 컴퓨터 단층촬영(micro-CT)을 활용하는 프로토콜을 제시합니다.

전임상 모델에서 폐 섬유증 평가 향상을 위해 Micro-CT를 사용한 일측성 폐 용적 분석

본 연구에서보고 된 소설 프로토콜 결합에 의한 마우스의 단일 셀 해상도로 폐 metastases의 선택적 검출 할 수...

복합에 의한 마우스의 싱글 셀 해상도에서 폐 Metastases의 향상된 시각화<em&gt;에서 시츄</em폐 조직 및 X-걸의 착색의&gt; 재관류<em&gt; lacZ</em&gt; 태그 종양 세포

학습하세요 마우스 폐 고정 기법으로 담배 연기 유발 폐기종의 조직학적 평가를 수행하는 방법을 배우세요. 일정한 압력을 유지하여 폐가 붕괴되지 않고 여러 폐를 동시에 고정할 수 있습니다.

마우스에 있는 기종의 평가를 위한 일정한 압력의 밑에 폐 고정

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